Good Pipetting Practice™: Bedre resultater gjennom opplæring og støtte

Væsker med høyt damptrykk kan forårsake raske konsentrasjonsskift hvis de utsettes for luft for lenge. Fukt spissen på forhånd, arbeid raskt og hold beholderne lukket når det er mulig. Konsekvent aspirasjonsteknikk, inkludert muligheten for omvendt pipettering, kan bidra til å stabilisere volumene.

Fordi pipetter med positiv forskyvning mangler luftspalte, er de mer nøyaktige med væsker med høyt damptrykk. Derfor anbefales de hvis nøyaktighet er avgjørende for applikasjonen. 

Å velge riktig pipette innebærer å evaluere dine behov. For det første, hva slags prøver pipetterer du? Er de vandige? Eller er de tyktflytende, flyktige, skummende, etsende eller farlige? For vandige og nesten vandige væsker er de vanligste luftforskyvningspipettene (også kalt "luftpute"-pipetter) et godt valg. For tyktflytende, flyktige og andre uvanlige væsketyper vil en pipette med positiv forskyvning være et bedre valg for både nøyaktighet og sikkerhet. 

Hvilket volum vil du pipettere? Hvor mange prøver trenger du for å overføre fra ett fartøy til et annet? Ta en titt på dette white paperet om valg av pipetter for å forstå hvilken pipette som fungerer best, avhengig av væsken og andre faktorer som er unike for din situasjon.

Mikrofluidiske analyser krever kompromissløs nøyaktighet. Stabiliser pipetteringshånden din, bruk spisser av høy kvalitet designet for ultralave volumer, og vurder omvendt pipettering for forbedret konsistens. Regelmessig kalibrering, sammen med kontroll av miljøfaktorer som temperatur, støtter nøyaktighet på disse skalaene. 

Rainin-pipetter, sammen med fint konstruerte mikrovolumspisser, gir den presise og pålitelige kontrollen du trenger for å oppnå utmerkede resultater i banebrytende mikrofluidiske eksperimenter.

Ved pipettering av tykke løsninger med en flerkanalspipette introduserer luftbobler volumfeil og kompliserer målinger. For å redusere risikoen for bobler, fukt spissene ved å aspirere og dispensere sakte 2-3 ganger. Aspirer deretter sakte, og sørg for at spissene er helt nedsenket gjennom hele trekket for å redusere luftlommer. Omvendt pipettering kan gi ekstra kontroll i bobleutsatte prøver. 

Fordi pipetter med positiv forskyvning mangler en luftspalte, er det mindre sannsynlig at bobler påvirker nøyaktigheten. Ved pipettering av mange alikvoter av væsker som danner bobler, vil en elektronisk repeaterpipette som Nanorep bidra til å unngå problemer. Manuelle pipetter med positiv forskyvning er også nyttige med eksperimenter med lavere gjennomstrømning der nøyaktighet er viktig.

Når du aspirerer, hold en pipette så nær vertikal som mulig, og unngå enhver vinkel større enn 20° fra Y-aksen. Når du dispenserer, hvis du berører veggen til målbeholderen for å trekke all væske helt ut av spissen, er det OK å overskride 20°-vinkelen.

Fremoverpipettering er standard pipetteringsteknikk og det beste valget for vandige prøver. For viskøse og flyktige prøver gir omvendt pipettering bedre nøyaktighet.

For å sende pipetten fremover, skyv stempelet ned til første stopp mens du holder pipetten utenfor væsken. Senk deretter spissen 2-10 mm dypt ned i væsken du jobber med – ikke dypere. Slipp stempelet sakte til full forlengelse for å aspirere hele væskevolumet. For å dispensere inn i målbeholderen, flytt pipetten inn i beholderen, og trykk deretter stempelet med jevn hastighet gjennom det første stoppet helt til det andre stoppet – så langt stempelet går. Med stempelet helt trykket, dra spissen av pipetten lett oppover veggen på karet for å "berøre". Dette hjelper til med å dispensere hele væskevolumet fullstendig. Slipp stempelet, løs ut pipettespissen, sett inn en ny pipettespiss og gjenta.

For å reversere pipetten skyver du stempelet helt ned gjennom det første stoppet til det andre stoppet – så langt stempelet går. Senk deretter spissen i væske og slipp stempelet sakte og jevnt for å aspirere. Beveg deg til mottakerbeholderen og trykk stempelet KUN TIL FØRSTE STOPP for å dispensere riktig volum. Et lite restvolum vil forbli i pipettespissen. Flytt pipetten over et kasseringsbeholder og trykk stempelet helt ned til det andre stoppet, også kalt "utblåsningsstoppet", for å frigjøre eventuell gjenværende væske. 

Slipp stempelet, løs ut pipettespissen, sett inn en ny pipettespiss og gjenta.

Leter du etter flere tips om pipetteringsteknikker? Få denne nyttige plakaten for laboratoriet ditt i dag! 

En luftfortrengningspipette kan brukes til å pipettere lett tyktflytende væsker, inkludert blod. For å oppnå maksimal nøyaktighet, bruk omvendt pipetteringsteknikk beskrevet ovenfor. For mer tyktflytende væsker, for eksempel 85 % glyserol eller Triton X-100, gir en pipette med positiv forskyvning den beste nøyaktigheten og konsistensen.

Lett flyktige væsker som etanol kan pipetteres med en luftforskyvningspipette ved hjelp av den ovennevnte omvendte pipetteringsteknikken. Pipetter med positiv forskyvning er imidlertid et bedre valg for flyktige væsker. 

Hvis du bruker en luftforskyvningspipette, må du forhåndsskylle pipettespissen (aspirere og dispensere) minst fem ganger før du pipetterer volumet. Dette balanserer luften inne i pipetten, og bremser væskens fordampningshastighet. Rask fordampning av flyktige væsker utvider luften inne i en pipette og tvinger væske ut av spissen uten at det legges noe trykk på stempelet, og dette reduserer nøyaktig volumtilførsel.

Flyktige væsker som acetonitril håndteres generelt bedre med en pipette med positiv forskyvning.

Ja, pipettering med luftforskyvningspipetter kan skape aerosoler. Aerosoler kan stige inn i det indre av pipetten og forurense innvendige vegger og stempel. Aerosolisering skjer lettere når stempelet frigjøres for raskt under aspirasjon og kan også forekomme i motsatt retning utenfor pipetten med altfor rask dispensering. 

For å minimere aerosoler, aspirer og dispenser sakte og jevnt. Bruk filtrerte spisser. 

Pipetter med positiv forskyvning bruker sprøytespisser som forhindrer aerosolisering. En pipette med positiv forskyvning er det beste valget for pipettering av farlige væsker og enhver væske med forhøyet viskositet eller flyktighet.

Svært kalde eller varme væsker endrer lufttrykket i luftforskyvningspipetter, noe som fører til unøyaktig pipettering. 

Pipetter med positiv forskyvning, med sprøytespisser som ikke har luftlomme mellom væske og stempel, påvirkes ikke av forskjellige temperaturer på væsker. Pipetter med positiv forskyvning vil gi nøyaktige resultater med væsker uten romtemperatur.

Hvis du må pipettere en veldig varm eller kald væske med en luftforskyvningspipette, må du ikke forhåndsskylle pipettespissen – dette er vanligvis den beste fremgangsmåten for høyest mulig nøyaktighet. Aspirer og dispenser i stedet raskt for å minimere effekten av væskens temperatur på pipettens indre luftspalte.

For å unngå bobler og skumdannelse ved pipettering, må du ikke senke spissen mer enn 10 mm i væskebeholderen, og aspirere sakte.

Omvendt pipettering gir ekstra beskyttelse fordi du trykker stempelet helt til 2. For mer om omvendt pipettering, besøk denne siden. 

En pipette med positiv forskyvning skaper ikke bobler eller skum når den samhandler med væske fordi sprøytespissen ikke har luft som væsken kan samhandle med.

Dekontaminerer en pipette ved å tørke av den med en våt klut og et vaskemiddel som isopropanol eller en 10 % blekemiddelløsning. Unngå mikrometerets klare plastvindu.

Autoklavering kan være et annet alternativ, men sjekk pipettens instrumentspesifikasjoner. Hvis det er autoklaverbart, er hele instrumentet autoklavert eller bare væskeenden?  Ofte kan bare væskeenden autoklaveres.

Hvis du vil ha mer informasjon om rengjøring av en pipette, kan du laste ned plakaten Rengjøring av en pipette .

Reaktive kjemikalier må håndteres med forsiktighet. Bruk friske, inerte spisser og spray pipettens utside med etanol regelmessig for å fjerne sprut og rester. Unngå spisskontakt med overflater og bytt pipettespisser ofte for å forhindre krysskontakt.

Rainin-pipetter er anerkjent for sitt sikre spissinngrep og jevne stempelkontroll, og støtter trygge, kontamineringsfrie overføringer selv når de arbeider med utfordrende, reaktive reagenser.

Pipettenøyaktighet – eller sannhet, som det heter nå – er forskjellen mellom gjennomsnittsvolumet for alle målinger (4–10 målinger) og det innstilte volumet. Når man diskuterer presisjonen til en pipette, forklares dette som standardavviket for alle utførte målinger. 

En pipettes usikkerhet er den kvantitative betegnelsen for dens generelle nøyaktighet. Det er en kombinasjon av sannhet (et mål på systematisk feil) og presisjon (et mål på tilfeldig feil). 

Ligningen for usikkerhet er: 

Usikkerhet = Systematisk feil + Tilfeldig feil * k. k (dekningsfaktor eller Z-score) avhenger av antall målinger. k=3,31 for fire målinger og 2 for ti målinger.

Hvis du vil ha mer informasjon om pipetteusikkerhet og sikring av nøyaktighet, kan du laste ned dette white paperet.