Få pipettehåndboken
Guide

Få pipettehåndboken —

Guide

det ypperste kunnskapsverktøyet for enhver pipetteringsmester!

Maecenas faucibus mollis interdum. Donec id elit non mi porta gravida at eget metus. Nullam id dolor id nibh ultricies vehicula ut id elit.
Maecenas faucibus mollis interdum. Donec id elit non mi porta gravida at eget metus. Nullam id dolor id nibh ultricies vehicula ut id elit.

Pipettering er et sentralt element i biovitenskapelig forskningsarbeid. For reproduserbare resultater trenger forskere nøyaktige pipetter og forurensningsfrie spisser av høy kvalitet.

Med vår biovitenskapelige håndbok for pipettering vil du forstå valg og evaluering av pipetter og spisser, slik at du kan forbedre din pipetteringsytelse og oppnå bedre resultater. 

Vår biovitenskapelige håndbok for pipettering gir et 360°-perspektiv med detaljerte beskrivelser av:

  • Evaluering og valg av pipetter
  • Valg av riktige spisser
  • Pipetteringsteknikker

Last ned håndboken nå og bli en ekspert på pipettering!

Forhåndsvis pipetteringshåndboken

1. Forord

God pipetteringspraksis er ment å hjelpe forskere til å gjøre informerte valg om utstyr, riktig pipettering og ergonomiske teknikker, kalibrering og rutinemessig drift for å få de best mulig resultater. Pipettering – eller måling og overføring – av små væskevolumer på mikro- og milliliternivå er trolig den vanligste aktiviteten i vitenskapelige laboratorier, og det å være i stand til å utføre denne oppgaven raskt og presist er en absolutt forutsetning for vellykket laboratoriearbeid. Moderne luft-forskyvningspipetter brukes i størstedelen av laboratoriearbeidet på grunn av deres mange fordeler - de er det ideelle instrumentet for effektivt å dosere små mengder væske. Et høyt produktivitetsnivå, med tilsvarende besparelser i arbeidstimer, er mulig ved å bruke moderne høy-kvalitets pipetter og spisser.

2. Projektplanlegging, arbeidsflyt og valg

Prosjektplanlegging og arbeidsflyt

De fleste nye prosjekter vil dra nytte av en fullstendig planleggingsprosess der alle trinnene i arbeidsflyten analyseres for maksimal effektivitet og datagenerering. Fra væskebehandlingsperspektivet krever dette en forståelse av startprøvetypen, den nødvendige endepunktsanalysen og prøvetrykket. Disse vil i sin tur styre de anvendte teknikkene og håndteringsformene for væsker som kreves (rør, plater, osv.). Dette bestemmer senere de optimale væskehåndteringsverktøyene for arbeidsflyten. For enhver pipetteringsaktivitet eller -virkning må pipetten, den tilhørende spissen og operatørteknikken betraktes som ett system for å levere det nøyaktige volum av væske som kreves. Å velge riktig pipette og spisser og deretter bruke den mest effektive teknikken er en integrert del av å designe og implementere et hvilket som helst prosjekt eller eksperiment.

Analyse av arbeidsflyten

Det første trinnet i prosessen er å identifisere alle trinnene som er involvert i en eksperimentell arbeidsflyt - fra første prøveisolasjon til endelig dataproduksjon. Dette vil også inkludere alle forberedelsestrinnene for å støtte arbeidsflyten, for eksempel buffer eller mastermix-preparater. Deretter identifiserer du hvor mye variabilitet som kan tolereres for eksperimentet for å kunne produsere gode data. Noen applikasjoner og noen skritt er mye mer følsomme for eksperimentell variasjon enn andre, for eksempel et eksperiment med forsterkning, som qPCR, kan være svært følsomt for variasjon mens et enkelt buffer forberedelsesskritt ikke nødvendigvis er det. Suboptimalt valg av pipette og spiss, samt dårlig pipetteringsteknikk, kan være en viktig kilde til eksperimentell variabilitet. For eksempel kan eventuelle eksperimenter som er avhengige av en standardkurve generert gjennom seriell fortynning av standarder bli sterkt påvirket av suboptimal pipettering.

Optimaliser arbeidsflyten

  • Volumområde og krav til prøvetakingkapasitet
  • Prøve- / reagensbeholder formatkrav
  • Prøve- / målingspesifikke krav

3. Valg av riktig pipette

Det finnes mange pipetteringsverktøy tilgjengelige for å oppnå optimale resultater og større produktivitet, samtidig som det gir flere fordeler som forbedrede ergonomiske funksjoner og bedre funksjonalitet for en gitt applikasjon. Det finnes to hovedtyper av mikropipetter: luftforskyvning og positiv forskyvning. Begge typer bestemmer volumet av væske dispensert ved bruk av stemplets diameter og lengde.

Luftforskyvningspipetter

  • Ekstremt nøyaktig ved vandige løsninger
  • Økonomisk

Luftforskyvningspipetter er de vanligste pipetteringsinstrumentene som finnes i laboratoriet. Disse pipettene virker ved å plassere enden av spissen i væskeprøven, og deretter slippe stempelknappen. Et delvis vakuum oppstår når pipettstemplet beveges opp i pipettlegemet, og væskeprøven beveger seg oppover spissen for å fylle tomrommet til det valgte volumet opprettet av det partielle vakuumet.

Positivforskyvningspipetter

  • Ekstremt nøyaktig med de fleste løsninger
  • Anbefales for viskøse, tette, flyktige eller korroderende væsker

Selv om de ikke er like vanlige som luft-forskyvningspipetter, finnes positiv forskyvningspipetter ofte i laboratoriemiljø. Disse pipettene bruker et engangstempel og kapillarsystem for å gjøre et fysisk tomrom av det valgte volumet. Stemplet er i direkte kontakt med prøven, og når stempelet beveges oppover, trekkes prøven inn i kapillæren. Pipetter med positiv forskyvning gir høy nøyaktighet og presisjon ved pipettering av vandige løsninger, men anbefales for bruk med viskøse, tette, flyktige og korroderende løsninger. Engangskapillærene og -stemplene som brukes med en pipette med positiv forskyvning er dyre sammenlignet med engangs luftforskyvningspipettespisser, slik at luftforskyvningspipetter anbefales når de gir de samme resultatene.

Optimaliser arbeidsflyten

  • Volumområde og krav til prøvetakingkapasitet
  • Elektroniske enkanalspipetter
  • Flerkanalspipetter
  • Pipettering med høy kapasitet
  • Spesialiserte pipetter
  • Positiv forskyvningspipetter
  • Repeterende pipetter
  • Styreenhet for pipetter
  • Flaskekapseldispensere

4. Velge den riktige spiss: design, kvalitet og passform

Pipetten og spissen som produsenten anbefaler er best sett på som et system, ikke som to individuelle komponenter. Pipettespisser som markedsføres for bruk med alle pipetter har ofte kompromisser i form eller design, siden de er beregnet på å passe til et bredt spekter av pipettmodeller. Når du velger pipettespisser, bør du vurdere funksjoner som design, kvalitet og passform.

Spisskonstruksjon

Den mest avanserte designen i pipettespisser er den fleksible tynnveggede spissen med fin spiss eller liten spissåpning. For småvolum pipettering, mindre enn 20 μL, forbedrer Rainin Fine-Point ™ spissene nøyaktighet og presisjon i forhold til standardpipettespisser med tykke vegger eller skråkantede ender. FinePoint-spisser er mer fleksible enn de fleste andre standardspisser, og lar væskeprøven strømme i hvilken som helst spissvinkel for fullstendig levering. Det vil si at langt mindre av prøven ligger igjen på spissen i forhold til tykkveggede eller skråkantede spisser. Forskjeller i spissdesign påvirker ytelse, nøyaktighet og presisjon. Men når pipetter brukes riktig, vil de gi garantert ytelse med spesifisert nøyaktighet og presisjon, forutsatt at produsentens anbefalte spisser brukes.

Spisskvalitet

De alvorligste kvalitetsfeilene oppstår ved åpningen eller enden, hvor prøvetaking og dispensering er mest berørt. Figur 13 viser fire spissender i forstørret visning.

Blits er gjenværende plast fra støpeprosessen på innsiden av spissen eller rundt blenderåpningen.

Støpedefekter og koaksialdefekter skyldes feil avfyring av støpekjernespisser etter at plast har blitt injisert. Alle disse feilene vil resultere i prøvetap under pipettering. En produksjonsprosess av høy kvalitet vil minimere forekomsten av spissfeil og de resulterende feilene.

Pipettespissens forsegling

  • LTS™ LiteTouch™-spissutstøtingssystem
  • Valg av spiss
  • Spesialiserte spisser for spesielle applikasjoner

5. Pipetteringsteknikker

Korrekt evaluering av din applikasjonen - og dermed ditt valg av instrumenter - vil påvirke resultatene av din forskning betydelig. Likevel er dette ikke de eneste tingene forskerne må vurdere for optimale forskningsresultater. Andre påvirkninger, som korrekt pipetteringsteknikk og miljøforhold, påvirker også resultatene. Nøyaktighet og presisjon er avgjørende for vitenskapelig forskning, og de følgende sidene gir en kort oversikt over flere aspekter av pipetteringsteknikk. Visste du for eksempel at ved å følge disse teknikkene, kan nøyaktigheten og presisjonen øke med opptil 5 %?

Optimalt volumområde

Det normale driftsområdet for de fleste pipetter er 10 - 100 % av nominelt volum. Selv om dette anses å være driftsområdet, endres ytelsespesifikasjonene når voluminnstillingen minsker. Nøyaktighetsspesifikasjonene for en pipette på 100 mikroliter er +/- 0,8 % fra 50 - 100 % av nominell verdi. Likevel, hvis du skulle pipettere på 10 μl (eller 10 % av nominell verdi), ville feilspesifikasjonen være mer enn 3 ganger større, eller 2,5-3 %. Derfor er det optimale volumet for nøyaktighet og presisjon typisk 35 - 100 % av nominell verdi. Prøv å unngå å sette en pipettes volum til mindre enn 10 % av sitt maksimum - i stedet, bytt til en pipette med mindre volum for mindre volumer.

Spiss nedsenkningsdybde

Av spesiell viktighet for mikrovolumpipetter er at riktig nedsenkningsdybde kan forbedre presisjonen med opptil 5 %. Spissen skal være nedsenket 1-2 mm for mikrovolumpipetter og opptil 6-10 mm for storvolumpipetter. Hvis spissen senkes for langt ned, blir gassvolumet i spissen komprimert, slik at det aspireres for mye væske. Væske som blir liggende på spissens overflate kan også forvrenge resultater. Hvis spissen ikke senkes dypt nok ned kan luft aspireres, noe som fører til luftbobler og unøyaktig volum. Begge deler resulterer i unøyaktige volum.

  • Aspirering ved riktig vinkel
  • Opprettholdelse av konsistens
  • Konsekvent prøveutdeling
  • Forhåndsskylling av spisser
  • Unngå temperaturvariasjon
  • Konsekvent mikrometerinnstillinger
Thank you for visiting www.mt.com. We have tried to optimize your experience while on the site, but we noticed that you are using an older version of a web browser. We would like to let you know that some features on the site may not be available or may not work as nicely as they would on a newer browser version. If you would like to take full advantage of the site, please update your web browser to help improve your experience while browsing www.mt.com.