UV Vis-spektrofotometer

UV Vis-spektroskopi er en enkel og mye brukt teknikk som baserer seg på absorbsjon av lys i en bestemt prøve. Avhengig av mengden lys og bølgelengden som absorberes av prøven, kan verdifull informasjon samles inn; som konsentrasjonen av renhet i en prøve, for eksempel i koffeinspektrumet under. Fordi hvert stoff absorberer lys på en forskjellig måte, finnes det et unikt og spesifikt forhold mellom stoffet og dets UV Vis-spektrum. Derfor kan et stoff identifiseres ved bruk av spektrofotometri.

Et UV Vis-spektrofotometer måler styrken på lys som passerer gjennom en prøveløsning i en kyvette og sammenligner den med styrken på lyset før det passerer gjennom prøven. Hovedkomponentene i et UV Vis-spektrofotometer er en lyskilde, prøveholder, spredningsenhet for fordeling av de ulike bølgelengdene til lyset, og en egnet detektor, som for eksempel en fotodiodedetektor.

Det er fem hovedgrunner til at UV Vis-spektre måles:

• UV Vis-spektre identifiserer komponenter som finnes i en prøveløsning. Nærmere bestemt muliggjør spiss-posisjonen, og til en viss grad spektrumprofilen, identifisering av spesifikke forbindelser.
  
• Absorpsjonsspisser kan brukes til å kvantifisere prøven som undersøkes. For eksempel kan prøvekonsentrasjonen beregnes ut fra absorpsjonsverdien til spissen.
  
• Et UV Vis-spektrofotometer baserer seg på forholdet mellom absorpsjon og prøvekonsentrasjon, og det brukes til kvantitative analyseteknikker i markedssegmenter som bioteknologi, legemidler, kosmetikk, næringsmidler og testing av kjemikalier og vann.
  
• Spektrumet kan påvise spesifikke fysiske egenskaper for molekylene i prøven, og dette gjør det mulig å beregne prøvens svekkingskoeffisient, beregne smeltepunktet for proteiner og nukleinsyrer ved å måle UV Vis ved ulike temperaturer samt bestemme hastigheten til en reaksjon ved å overvåke absorpsjonsspektre som en funksjon for tid.
  
• Posisjonen og profilen til spissene i spektrumet kan gi informasjon om det mikroskopiske miljøet til molekylene i prøven.

• Den faste bølgelengden er det enkleste bruksområdet for et spektrofotometer. Det er en måling av én eller flere bølgelengder, og resultatet kan rapporteres i absorbans eller transmittans.
  
• Bestemmelse av kvantitet eller konsentrasjon av et stoff ved bruk av et UV Vis-spektrofotometer er basert på Lambert-Beer-loven, som sier at absorpsjonen til en løsning er direkte proporsjonal med konsentrasjonen av det absorberende stoffet i løsningen og kyvettens veilengde. Således kan et UV Vis-spektrofotometer brukes til å bestemme konsentrasjonen i en prøve.
  
• Målinger av spektralskanning bestemmer en prøves absorbans eller transmittans over et bestemt bølgelengdeområde eller over hele spektrumområdet, vanligvis mellom 190 til 1100 nm. Den vanligste etterfølgende analysen er påvisning av spisser og bunner.
  
• Et UV Vis-spektrofotometer brukes ofte til å overvåke endringen i konsentrasjonen til enten reaktanten eller produktet, ved å måle absorbansen ved en spesifikk bølgelengde over tid. Disse kinetiske metodene brukes ofte til å studere hastigheten på enzymatiske reaksjoner eller å bestemme konsentrasjonen til spesifikke karbohydrater, som glukose, fruktose eller laktose.

• Et skannings-spektrofotometer måler hver bølgelengde separat, og bruker derfor betydelig lenger tid. Et dioderekke-spektrofotometer måler hele spektrumet på kort tid, ettersom alle bølgelengdene måles av dioderekkedetektoren.
  
• Et skannings-spektrofotometer skanner spektrumet ved bruk av mekanisk roterende elementer. Dette kan føre til feil i reproduserbarheten av bølgelengdene. Et skannings-spektroskopiinstrument krever derfor jevnlig rekalibrering for å garantere nøyaktige bølgelengder. Et rekkediode-spektrofotometer har ingen bevegelige optiske deler, og dette betyr at det ikke forekommer avvik i ytelsen over tid som følge av mekaniske unøyaktigheter.
  
• Et rekkediode-spektrofotometer krever ikke et lukket prøverom, ettersom dets optiske design gjør at det ikke påvirkes av omgivelseslys.

Vår portefølje for spektrofotometri er utviklet for å være egnet til flere bransjesegmenter:

• Typiske bruksområder for UV5Bio- og UV5Nano-spektrofotometrene omfatter legemidler, biovitenskap, bioteknologi og akademia.
  
• Typiske bruksområder for UV7- og UV5-spektrofotometrene omfatter legemidler, næringsmidler, kjemi, kosmetikk, petroleum og akademia.

Et mikrovolum-spektrofotometer utfører målinger i små prøvevolumer (så små som 1 mikroliter). Prøver med høy konsentrasjon kan også måles uten ytterligere fortynninger, takket være LockPath-teknologien i METTLER TOLEDOS UV5Nano, som kan angi en veilengde på 0,1 eller 1 mm.

• METTLER TOLEDOs UV5Nano- og UV5Bio-spektrofotometere kan brukes på et stort utvalg av prosesser innen biovitenskap, som:
  
  • kvalitative analyser av DNA, RNA og proteiner
    
  • kvantitative analyser av DNA, RNA og proteiner
    
  • BCA-, Bradford-, Lowry- og andre kolometriske proteinanalyser
    
  • forhåndskonfigurerte farger og alternativer for tilsetning av tilpassede farger
    
  • oligokalkulator for bestemmelse av konsentrasjonen av DNA- og RNA-oligoer
    
  • OD600 for levende celler
    
• I tillegg tilbyr UV5Bio- og UV7-spektrofotometere kinetiske metoder for utføring av enzymkinetikk.
  
• Hvis du vil ha mer informasjon om bruksområder innen biovitenskap for spektrofotometere fra METTLER TOLEDO, kan du laste ned Verktøyeske for biovitenskap.

METTLER TOLEDO tilbyr en løsning for ytelsesverifisering i form av CertiRef™-enheten, som er den mest effektive metoden for å kontrollere om spektrofotometeret fungerer i henhold til farmasøytiske krav. Dette tilbehøret utfører automatisk tester for nøyaktighet og repeterbarhet for bølgelengder, fotometrisk nøyaktighet og repeterbarhet, oppløsning, lysspredning, fotometrisk støy og avvik samt grunnlinjens flathet.

METTLER TOLEDO LabX-programvaren gir brukeren mer fleksibilitet ved at det er mulig å opprette arbeidsflyter som er tilpasset den enkelte brukerens krav. Beregningsfeil og transkripsjonsfeil unngås fullstendig. Programvaren sikrer også dataintegritet, ved at all informasjon, inkludert ytelsesverifiseringer og tjenester, lagres i en sikker database. Med sikkerhetsfunksjoner som elektroniske signaturer og brukerstyring, bidrar den til fullstendig samsvar med FDA-forskrift 21 CFR del 11.