Popraw jakość danych dzięki dobrej praktyce pipetowania

Ciecze o wysokiej prężności par mogą powodować szybkie zmiany stężenia, jeśli są zbyt długo wystawione na działanie powietrza. Wstępnie zwilż końcówkę, pracuj szybko i utrzymuj pojemniki zakryte, gdy tylko jest to możliwe. Spójna technika aspiracji, w tym opcja odwróconego pipetowania, może pomóc w ustabilizowaniu objętości.

Ponieważ pipety wyporowe nie mają szczeliny powietrznej, są dokładniejsze w przypadku cieczy o wysokiej prężności pary. Dlatego są zalecane, jeśli dokładność ma kluczowe znaczenie dla aplikacji. 

Wybór odpowiedniej pipety wymaga oceny wymagań. Po pierwsze, jakiego rodzaju próbki są pipetowane? Czy są wodne? A może są lepkie, lotne, pieniące się, lub niebezpieczne? W przypadku cieczy wodnych i prawie wodnych dobrym wyborem są najpopularniejsze pipety wyporowe (zwane również pipetami z poduszką powietrzną). W przypadku lepkich, lotnych i innych nietypowych rodzajów cieczy lepszym wyborem będzie pipeta wyporowa zarówno ze względu na dokładność, jak i bezpieczeństwo. 

Jaką objętość będzie pipetować? Ile próbek trzeba przenieść z jednego naczynia do drugiego? Zapoznaj się z tym opracowaniem technicznym na temat wyboru pipet , aby dowiedzieć się, które pipety działają najlepiej w zależności od płynu i innych czynników charakterystycznych dla Twojej sytuacji.

Testy mikroprzepływowe wymagają bezkompromisowej dokładności. Ustabilizuj dłoń pipetującą, używaj wysokiej jakości końcówek przeznaczonych do bardzo małych objętości i rozważ pipetowanie odwrotne, aby uzyskać lepszą konsystencję. Regularna kalibracja, wraz z kontrolowaniem czynników środowiskowych, takich jak temperatura, wspiera dokładność tych wag. 

Pipety Rainin w połączeniu z precyzyjnie zaprojektowanymi końcówkami do mikroobjętości zapewniają precyzyjną i niezawodną kontrolę, której potrzebujesz, aby osiągnąć doskonałe wyniki w najnowocześniejszych eksperymentach mikroprzepływowych.

Podczas pipetowania gęstych roztworów za pomocą pipety wielokanałowej pęcherzyki powietrza wprowadzają błędy objętości i komplikują pomiary. Aby zmniejszyć ryzyko powstawania pęcherzyków, wstępnie zwilż końcówki, zasysając i dozując powoli 2-3 razy. Następnie zasysaj powoli, upewniając się, że końcówki są całkowicie zanurzone przez cały czas zaciągania, aby zmniejszyć kieszenie powietrzne. Pipetowanie odwrócone może zapewnić dodatkową kontrolę w próbkach podatnych na pęcherzyki powietrza. 

Ponieważ pipety wyporowe nie mają szczeliny powietrznej, istnieje mniejsze prawdopodobieństwo, że pęcherzyki wpłyną na ich dokładność. Podczas pipetowania wielu porcji cieczy, które tworzą pęcherzyki, elektroniczna pipeta powtarzalna, taka jak Nanorep , pomoże uniknąć problemów. Ręczne pipety wyporowe są również pomocne w eksperymentach o niższej przepustowości, w których ważna jest dokładność.

Podczas zasysania pipetę należy trzymać jak najbliżej pionu, unikając kątów większych niż 20° od osi Y. Podczas dozowania, jeśli dotykasz ścianki naczynia docelowego, aby całkowicie wyciągnąć cały płyn z końcówki, możesz przekroczyć kąt 20°.

Pipetowanie do przodu jest standardową techniką pipetowania i najlepszym wyborem dla próbek wodnych. W przypadku próbek lepkich i lotnych pipetowanie wsteczne zapewnia większą dokładność.

Aby przesunąć pipetę do przodu, wciśnij tłok do pierwszego oporu, trzymając pipetę poza cieczą. Następnie zanurz końcówkę na głębokość 2-10 mm w płynie, z którym pracujesz – nie głębiej. Powoli zwolnić tłok do pełnego wysunięcia, aby zassać całą objętość cieczy. Aby dozować do naczynia docelowego, należy wsunąć pipetę do naczynia, a następnie naciskać tłok z równą szybkością przez pierwszy ogranicznik aż do drugiego oporu – aż do oporu. Przy całkowicie wciśniętym tłoku delikatnie przeciągnij końcówkę pipety w górę ścianki naczynia, aby "dotknąć". Pomaga to w całkowitym dozowaniu pełnej objętości płynu. Zwolnij tłok, wysuń końcówkę pipety, załaduj nową końcówkę pipety i powtórz czynność.

Aby odwrócić pipetę, popchnij tłok do końca przez pierwszy ogranicznik do drugiego oporu – do oporu. Następnie zanurz końcówkę w płynie i powoli i równomiernie zwolnij tłok, aby zasnąć. Przejść do naczynia odbiorczego i nacisnąć tłok TYLKO DO PIERWSZEGO ZATRZYMANIA, aby dozować odpowiednią objętość. Niewielka objętość resztkowa pozostanie w końcówce pipety. Przesunąć pipetę nad naczyniem dozującym odrzuty i wcisnąć tłok do końca do drugiego oporu, zwanego również ogranicznikiem "wydmuchiwania", aby uwolnić pozostały płyn. 

Zwolnij tłok, wysuń końcówkę pipety, załaduj nową końcówkę pipety i powtórz czynność.

Szukasz więcej wskazówek na temat technik pipetowania? Pobierz ten pomocny plakat do swojego laboratorium już dziś! 

Pipeta wyporowa może być używana do pipetowania lekko lepkich cieczy, w tym krwi. Aby osiągnąć maksymalną dokładność, należy zastosować opisaną powyżej technikę pipetowania odwrotnego. W przypadku cieczy o większej lepkości, takich jak 85% glicerol lub Triton X-100, pipeta wyporowa zapewnia najlepszą dokładność i spójność.

Lekko lotne ciecze, takie jak etanol, można pipetować pipetą wyporową przy użyciu wyżej wymienionej techniki pipetowania odwrotnego. Jednak pipety wyporowe są lepszym wyborem w przypadku cieczy lotnych. 

W przypadku korzystania z pipety wyporowej należy wstępnie wypłukać końcówkę pipety (zassać i dozować) co najmniej pięć razy przed pipetowaniem objętości. Równoważy to powietrze wewnątrz pipety, spowalniając szybkość parowania cieczy. Szybkie parowanie lotnych cieczy rozszerza powietrze wewnątrz pipety i wypycha ciecz z końcówki bez wywierania nacisku na tłok, co zmniejsza dokładność dostarczania objętości.

Z cieczami lotnymi, takimi jak acetonitryl, zazwyczaj lepiej radzić sobie za pomocą pipety wyporowej.

Tak, pipetowanie za pomocą pipet wyporowych może powodować powstawanie aerozoli. Aerozole mogą unosić się do wnętrza pipety i zanieczyszczać wewnętrzne ścianki i tłok. Aerozol następuje łatwiej, gdy tłok jest zwalniany zbyt szybko podczas zasysania, a także może wystąpić w przeciwnym kierunku poza pipetą przy zbyt szybkim dozowaniu. 

Aby zminimalizować ilość aerozoli, zasysaj i dozuj powoli i równomiernie. Korzystaj z filtrowanych końcówek. 

Pipety wyporowe wykorzystują końcówki w kształcie strzykawki, które zapobiegają aerozolowaniu. Pipeta wyporowa to najlepszy wybór do pipetowania niebezpiecznych cieczy i wszelkich cieczy o podwyższonej lepkości lub lotności.

Bardzo zimne lub gorące ciecze zmieniają ciśnienie powietrza w pipetach wyporowych, co prowadzi do niedokładnego pipetowania. 

Pipety wyporowe, z końcówkami w kształcie strzykawki, które nie mają kieszeni powietrznej między cieczą a tłokiem, nie mają wpływu na różne temperatury cieczy. Pipety wyporowe zapewniają dokładne wyniki w przypadku cieczy o temperaturze innej niż pokojowa.

Jeśli konieczne jest pipetowanie bardzo gorącej lub zimnej cieczy za pomocą pipety wyporowej z przepływem powietrza, nie należy wstępnie płukać końcówki pipety — jest to zazwyczaj najlepsza praktyka zapewniająca najwyższą dokładność. Zamiast tego należy szybko zasysać i dozować, aby zminimalizować wpływ temperatury cieczy na wewnętrzną szczelinę powietrzną pipety.

Aby uniknąć pęcherzyków powietrza i pienienia się podczas pipetowania, nie zanurzaj końcówki na więcej niż 10 mm w zbiorniku cieczy i powoli zasysaj.

Pipetowanie wsteczne zapewnia dodatkową ochronę, ponieważ przed zasysaniem należy całkowicie docisnąć tłok do 2. stopnia, dzięki czemu nie ma szans na wstrzyknięcie powietrza do próbki cieczy. Więcej informacji na temat pipetowania odwrotnego można znaleźć na tej stronie. 

Pipeta wyporowa nie tworzy pęcherzyków ani piany podczas interakcji z cieczą, ponieważ jej końcówka w kształcie strzykawki nie dostarcza powietrza, z którym ciecz mogłaby wchodzić w interakcję.

Odkadź pipetę, przecierając ją wilgotną szmatką i detergentem, takim jak izopropanol lub 10% roztwór wybielacza. Unikaj przezroczystego plastikowego okienka mikrometru.

Inną opcją może być autoklawowanie, ale sprawdź specyfikacje pipety. Jeśli można go sterylizować w autoklawie, to czy autoklawowanie obejmuje całe narzędzie, czy tylko końcówkę płynną?  Często autoklawować można tylko końcówkę płynną.

Aby uzyskać więcej informacji na temat czyszczenia pipety, pobierz plakat Czyszczenie pipety .

Z reaktywnymi chemikaliami należy obchodzić się ostrożnie. Używaj świeżych, obojętnych końcówek i regularnie spryskuj zewnętrzną część pipety etanolem, aby usunąć rozpryski i pozostałości. Zapobiegaj kontaktowi końcówek z powierzchniami i często zmieniaj końcówki pipet, aby zapobiec kontaktowi krzyżowemu.

Pipety Rainin, powszechnie cenione za bezpieczne zazębianie końcówek i płynną kontrolę tłoka, umożliwiają bezpieczne, wolne od zanieczyszczeń przenoszenie nawet podczas pracy z wymagającymi, reaktywnymi odczynnikami.

Dokładność pipet — lub poprawność, jak to się teraz nazywa — to różnica między średnią objętością wszystkich pomiarów (4-10 pomiarów) a ustawioną objętością. Omawiając precyzję pipety, wyjaśnia się ją jako odchylenie standardowe wszystkich wykonanych pomiarów. 

Niepewność pipety to termin ilościowy określający jej ogólną dokładność. Jest to połączenie prawdziwości (miara błędu systematycznego) i precyzji (miara błędu losowego). 

Równanie niepewności jest następujące: 

Niepewność = błąd systematyczny + błąd losowy * kk (współczynnik pokrycia lub wskaźnik Z) zależy od liczby pomiarów. k=3,31 dla czterech pomiarów i 2 dla dziesięciu pomiarów.

Aby uzyskać więcej informacji na temat niepewności pipet i zapewnienia dokładności, pobierz ten oficjalny dokument.