Cuvet cho máy đo quang phổ

Cuvet được sử dụng để đo mẫu là một phần của hệ thống quang học của máy đo quang phổ. Do đó, vị trí, hình dạng và tình trạng của cuvet có thể ảnh hưởng đến độ chính xác của các phép đo độ hấp thụ và cần được kiểm soát cẩn thận.

Độ dài quang trình của cuvet là khoảng cách ánh sáng đi qua các thành bên trong cuvet.

Trên cuvet máy đo quang phổ tiêu chuẩn, độ dài quang trình sẽ là khoảng cách bên trong từ cửa sổ trước đến cửa sổ sau. Độ dài quang trình của cuvet tiêu chuẩn là 10 mm.

Chất liệu của cuvet có thể gây ra độ hấp thụ riêng tùy thuộc vào bước sóng. Cuvet thạch anh hoàn toàn thấu quang trên toàn bộ phạm vi đo (UV/Vis). Cuvet nhựa dùng một lần thường chỉ thấu quang trong phạm vi quang phổ nhìn thấy được. Do đó, việc lựa chọn cuvet phụ thuộc chủ yếu vào ứng dụng.

Theo định luật Beer-Lambert, độ hấp thụ tỷ lệ thuận với độ dài truyền quang của cuvet và nồng độ mẫu. Việc chọn độ dài truyền quang lý tưởng (ví dụ từ 1 mm đến 5 cm) có thể loại bỏ nhu cầu pha loãng. Độ hấp thụ nằm trong phạm vi 0,2 A đến 1,5 A tạo ra kết quả chính xác nhất. Dụng cụ vi lượng với độ dài truyền quang rất ngắn, (1 mm hoặc 0,1 mm) là lý tưởng cho các mẫu có độ đậm đặc cao.

Để đo tốt nhất, cuvet nên nằm trong giá đỡ cuvet giữa các lần đo. Nếu tháo ra, cần chú ý luôn đặt cuvet theo cùng một hướng trong giá đỡ cuvet, tức là nhãn hướng về nguồn sáng. Điều này đảm bảo rằng hiệu ứng quang học giống hệt nhau cho cả phép đo tham chiếu và phép đo mẫu.

Để có kết quả tốt nhất, phép đo tham chiếu và phép đo mẫu phải được thực hiện với cùng một loại cuvet.

Cuvet phải có cửa sổ được chế tạo từ chất liệu trong suốt trong vùng phổ quan tâm.

Để có kết quả đo tốt nhất trong phạm vi bước sóng UV, cần sử dụng kính cho phép tia UV đi qua, chẳng hạn như thủy tinh thạch anh hoặc thủy tinh SUPRASIL^®.

SUPRASIL^® là nhãn hiệu của Heraeus (Thủy tinh thạch anh)

Đối với phạm vi nhìn thấy (>400 nm), dụng cụ thường được sử dụng là cuvet thủy tinh quang học hoặc PMMA (Polymethylmethacrylate) hoặc PS (Polystyrene) dùng một lần.

Cuvet dùng một lần được làm bằng poly-metyl-methacrylate, có tính hấp thụ trong phạm vi bước sóng UV và hoạt động giống như một bộ lọc chặn, làm cho các phép đo trong phạm vi bước sóng UV không chính xác và chỉ nên sử dụng đối với các phép đo trong phạm vi nhìn thấy được.

Trộn đều mẫu trước khi sử dụng, đặc biệt khi tái huyền phù axit nucleic hoặc protein. Tránh dùng pipet thủy tinh để bơm vào cuvet, vì chúng có thể làm xước bề mặt quang học. Tốt nhất là sử dụng pipet có đầu tip bằng nhựa dùng một lần. Để dung dịch chảy từ thành thủy tinh vào cuvet để tránh tạo bọt khí. Không bơm đầy quá 80% sức chứa của cuvet.

Các cửa sổ của cuvette, nơi có ánh sáng đi qua, phải được vệ sinh trước mỗi lần sử dụng. Để vệ sinh kỹ bên trong và bên ngoài, hãy sử dụng dung dịch nước khử ion/isopropanol 60% và lau bằng khăn lau kính hoặc giấy lụa không xơ (để tránh các vết xước do xơ trên bề mặt).

Để tránh tăng độ hấp thụ, cuvet nên được vệ sinh kỹ lưỡng trước và sau khi sử dụng. Cần phải cẩn thận để tránh chạm vào cửa sổ sau khi vệ sinh xong. Mẫu phải được loại bỏ ngay sau khi đo để tránh làm hỏng cuvet do dung môi bay hơi.

Độ hấp thụ tăng lên nếu các chất còn lại, chẳng hạn như dấu vân tay hoặc dầu mỡ, đọng lại trên cửa sổ cuvet. Có thể tránh được điều này bằng cách vệ sinh kỹ lưỡng trước và sau khi sử dụng. Cần phải cẩn thận để tránh chạm vào cửa sổ sau khi vệ sinh xong.

Chỉ cầm cuvet ở các mặt mờ và cẩn thận để không để lại dấu vân tay trên cuvet.

Đặt mặt trong suốt của cuvet trong chùm tia sáng, đảm bảo rằng nhãn cuvet mẫu và cuvet trống hướng về cùng một hướng. Đảm bảo rằng cuvet không bị nghiêng và được cố định hoàn toàn trong giá đỡ cuvet. Cuvet không được di chuyển nữa.

Để hạn chế sự bay hơi của dung môi hoặc sự hấp thụ nước từ không khí xung quanh trong trường hợp mẫu ưa nước, hãy sử dụng nắp thường đi kèm với cuvet.

Các flow cell phải luôn được làm sạch hoàn toàn sau một chuỗi các phép đo. Để tránh vôi hóa trên cửa sổ quang học, bạn phải rửa phần bên trong cuvet phải và sau đó làm khô hoàn toàn để loại bỏ axeton còn sót lại.

Để bảo quản trong thời gian ngắn, nên sử dụng các giá đỡ cuvet đặc biệt. Để bảo quản lâu dài, nên sử dụng hộp được giao để tránh trầy xước và bám bụi trên bề mặt kính.

Để đo tốt nhất, cuvet nên nằm trong giá đỡ cuvet giữa các lần đo. Nếu tháo ra, cần chú ý luôn đặt cuvet theo cùng một hướng trong giá đỡ cuvet, tức là nhãn hướng về nguồn sáng. Điều này đảm bảo rằng hiệu ứng quang học giống hệt nhau cho cả phép đo tham chiếu và phép đo mẫu. Nhờ dung sai chế tạo nổi bật của cuvet METTLER TOLEDO Nâng cao, định hướng ưu tiên này là không cần thiết vì chênh lệch độ hấp thụ theo 180 độ là rất nhỏ.

Nếu những chất còn lại, chẳng hạn như dấu vân tay hoặc dầu mỡ, đọng lại trên cửa sổ cuvet, thì độ hấp thụ sẽ tăng lên do có thêm các thành phần hấp thụ. Có thể tránh được điều này bằng cách vệ sinh kỹ lưỡng trước và sau khi sử dụng. Cần phải cẩn thận để tránh chạm vào cửa sổ sau khi vệ sinh xong.

Cuvet là một ống nhỏ hình chữ nhật để chứa các mẫu chứa nước. Cuvet có các mặt thẳng được làm bằng vật liệu trong suốt. Một số người còn gọi chúng là cell hoặc ống mao dẫn. Cuvet được sử dụng trong các phép đo quang phổ để đo độ hấp thụ của một bước sóng cụ thể.

Nếu cuvet có vết xước hoặc vết nứt nhỏ trong vùng đã đánh bóng thì không nên sử dụng để đo thêm vì kết quả sẽ bị sai hoặc cuvet có thể bị vỡ bên trong máy quang phổ. Bất kỳ vật liệu nhựa nào được sử dụng để sửa chữa hoặc dán cuvet đều sẽ làm giảm chất lượng đo. Vì vậy, không nên sửa chữa cuvet bị hỏng.

Cuvet trống được sử dụng để hiệu chuẩn các số đo của máy đo quang phổ trước khi đo dung dịch chưa biết. Số đo của máy đo quang phổ là so với cuvet trống. Các yếu tố môi trường có thể ảnh hưởng đến số đo, chẳng hạn như bụi, nhiệt độ và độ ẩm. Để loại bỏ tất cả các yếu tố bên ngoài, số đo quang phổ của cuvet trống sẽ được loại bỏ khỏi số đo của cuvet dung dịch mẫu.

Cuvet thủy tinh METTLER TOLEDO: Bước sóng 320-2500mm, khả năng truyền >80%, có thể sử dụng nhiều lần, dùng trong khoảng quang phổ nhìn thấy được

Cuvet thạch anh METTLER TOLEDO: Bước sóng 200-2500 nm; khả năng truyền > 82%, có thể sử dụng nhiều làn, dùng trong khoảng quang phổ nhìn thấy được.

Thể tích phổ biến nhất là 3,5 ml (3500 µL) đối với cuvet cỡ lớn 10 mm tiêu chuẩn. Có thể dễ dàng tính được thể tích của cuvet: chiều dài bên trong x chiều rộng bên trong x chiều cao bên trong x 80% = thể tích cuvet

Một cặp cuvet khớp nhau nghĩa là hai cuvet có cùng chất liệu và cùng độ dài truyền quang. Do thể tích sản xuất được xác định, các cặp cuvet khớp nhau để đảm bảo kích thước tương đương. Cuvet METTLER TOLEDO Excellence đảm bảo thể tích sản xuất sai số chỉ + 0,01 mm và do đó không cần tương đương.