Postup prípravy vzorky pomocou nástrojov METTLER TOLEDO na stanovenie bodu topenia:
Krok 1: Najprv je potrebné vzorku vysušiť v exsikátore. Potom sa malá časť vzorky jemne rozomelie v mažiari.
Krok 2: Na meranie pomocou prístroja METTLER TOLEDO sa súčasne pripraví niekoľko kapilár. Nástroj na plnenie kapilár dokonale pomáha pri plnení, pretože prázdne kapiláry sú bezpečne uchytené v úchytke podobnej kolíku. Odber malej časti vzorky z malty sa ľahko vykonáva s pomocou nástroja.
Krok 3: Malé množstvo vzorky v hornej časti kapilár sa potom presunie dole kapilárou uvoľnením úchytu a jemným niekoľkonásobným odrazom kapilár o stôl. Týmto úkonom sa vzorka pevne zabalí do spodnej časti kapiláry. Efekt "odrážania" spôsobuje tesné zabalenie látky a zabraňuje vzniku vzduchových vreciek.
Krok 4: Správnu výšku plnenia možno skontrolovať pomocou vyrytého pravítka na nástroji na plnenie kapilár. Vo všeobecnosti by výška naplnenia nemala presiahnuť 3 mm.
7. Nastavenie prístroja
Okrem správnej prípravy vzorky sú pre presné stanovenie bodu topenia dôležité aj nastavenia prístroja. Správna voľba počiatočnej teploty, koncovej teploty zastavenia a rýchlosti nábehu ohrevu je nevyhnutná, aby sa predišlo nepresnostiam v dôsledku nesprávneho alebo príliš rýchleho nárastu tepla vo vzorke:
a) Počiatočná teplota
Stanovenie teploty topenia sa začína pri vopred definovanej teplote blízkej očakávanej teplote topenia. Až do počiatočnej teploty sa ohrievací stojan rýchlo predhrieva. Pri počiatočnej teplote sa kapiláry zavedú do pece a teplota sa začne zvyšovať definovanou rýchlosťou ohrievania.
Bežný vzorec na výpočet počiatočnej teploty:
Počiatočná teplota = očakávaná MP - (5 min * rýchlosť ohrevu)
b) Rýchlosť rampy ohrevu
Rýchlosť vykurovacej rampy je pevná rýchlosť nárastu teploty medzi počiatočnou a koncovou teplotou pre vykurovaciu rampu.
Výsledky silne závisia od rýchlosti ohrevu - čím vyššia je rýchlosť ohrevu, tým vyššia je pozorovaná teplota bodu topenia.
V liekopisoch sa používa konštantná rýchlosť zahrievania 1 °C/min. Pre najvyššiu presnosť a nerozkladajúce sa vzorky použite 0,2 °C/min. Pri látkach, ktoré sa rozkladajú, by sa mala použiť rýchlosť zahrievania 5 °C/min. Pri prieskumných meraniach sa môže použiť rýchlosť zahrievania 10 °C/min.
c) Teplota zastavenia
Maximálna teplota, ktorá sa má dosiahnuť pri stanovení.
Spoločný vzorec na výpočet teploty zastavenia:
(3 min * rýchlosť ohrevu)
d) Termodynamický / liekopisný režim
Existujú dva režimy hodnotenia teploty topenia: Farmakopejský bod topenia a termodynamický bod topenia. Farmakopejský režim zanedbáva skutočnosť, že teplota pece je počas procesu zahrievania iná (vyššia) ako teplota vzorky, čo znamená, že sa meria teplota pece a nie teplota vzorky. V dôsledku toho farmakopejský bod topenia výrazne závisí od rýchlosti ohrevu. Preto sú merania porovnateľné len vtedy, ak sa použije rovnaká rýchlosť zahrievania.
Termodynamický bod topenia sa na druhej strane získa odčítaním matematického súčinu termodynamického faktora "f" a druhej odmocniny z rýchlosti ohrevu od liekopisného bodu topenia. Termodynamický faktor je empiricky určený faktor špecifický pre daný prístroj. Termodynamický bod topenia je fyzikálne správny bod topenia. Táto hodnota nezávisí od rýchlosti ohrevu ani od iných parametrov. Je to veľmi užitočná hodnota, pretože umožňuje porovnávať body topenia rôznych látok nezávisle od experimentálneho nastavenia.
9. Vplyv rýchlosti ohrevu na meranie bodu topenia
Výsledky výrazne závisia od rýchlosti ohrevu - čím vyššia je rýchlosť ohrevu, tým vyššia je pozorovaná teplota bodu topenia. Dôvodom je, že teplota bodu topenia sa z technických dôvodov nemeria priamo v látke, ale mimo kapiláry na ohrievacom bloku. Preto teplota vzorky zaostáva za teplotou v peci. Čím vyššia je rýchlosť ohrevu, tým rýchlejšie stúpa teplota v peci, čím sa zvyšuje rozdiel medzi nameranou teplotou topenia a skutočnou teplotou topenia.
Vzhľadom na závislosť od rýchlosti nárastu tepla sú merania bodov topenia navzájom porovnateľné len vtedy, ak sa vykonávajú s použitím rovnakých rýchlostí.
12. Stanovenie bodu topenia zmesí
Ak sa dve látky topia pri rovnakej teplote, stanovenie zmiešaného bodu topenia môže odhaliť, či ide o jednu a tú istú látku. Teplota topenia zmesi dvoch zložiek je zvyčajne nižšia ako teplota topenia jednej z čistých zložiek. Toto správanie je známe ako depresia teploty topenia.
Pri zmiešanom stanovení teploty topenia sa vzorka zmieša s referenčnou látkou v pomere 1 : 1. Vždy, keď sa teplota topenia vzorky zníži zmiešaním s referenčnou látkou, tieto dve látky nemôžu byť identické. Ak teplota topenia zmesi neklesne, vzorka je identická s pridanou referenčnou látkou.
Bežne sa stanovujú tri teploty topenia: vzorky, referenčnej látky a pomeru zmiešavania vzorky a referenčnej látky 1:1. Technika zmiešaného bodu topenia je dôležitým dôvodom, prečo sú všetky vysokokvalitné prístroje na stanovenie bodu topenia vybavené aspoň tromi kapilárami vo svojich vyhrievacích blokoch.