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分光光度測定用のセルは小さく透明な長方形の容器で、さまざまな素材、品質水準、寸法のものがあります。ガラス製セルはVIS範囲が320~2500nmの測定に使用されます。石英製セルは200~2500nmのUV/VIS範囲全体で高精度な結果を出します。製造上の公差が小さければ小さいほど、測定の繰り返し性は高くなります。
5つのエピソードシリーズ「ガラスキュベットの扱い方」では、キュベットと測定値を最大限に活用するためのヒントとコツを共有しています。 続きを読む
Excellenceセルは卓越したウィンドウの平行性を保証し、光路長公差はわずか± 0.01mmと極めて小さくなっています。そのため、製薬や研究の用途に必要な正確度を備えています。
StandardセルとExcellenceセルはどちらも、長く使える設計になっています。そのため環境に優しく、使い捨てのプラスチック製セルの継続的な購入が不要になるため、コストを節約することもできます。
サンプルの測定に使用するセルは、分光光度計の光学系の一部です。したがって、セルの位置、配置、状態は吸光測定の正確度と精度に影響を及ぼす可能性があるため、注意深く制御する必要があります。
セルの光路長とは、セル内部の壁を通って進む光の距離のことです。
標準的な分光光度計のセルでは、光路または光路長は、前面のウィンドウから背面のウィンドウまでの内側の距離になります。標準的なセルの光路長は10mmです。
セルの素材には、波長に応じて独自の吸光度があります。石英製のセルは測定範囲全体(UV/VIS)で透明性を備えています。使い捨てのプラスチック製セルは非常に多くの場合、スペクトルの可視範囲でのみ透明性を備えています。したがって、セルの選択は主にアプリケーションにより異なります。
ランベルト・ベールの法則によると、吸光度はセルの光路長とサンプル濃度に正比例します。適切な光路長(1mm~5cmなど)を選択することで、希釈の必要性がなくなります。0.2A~1.5Aの範囲内の吸光度は、最も正確な結果をもたらします。光路長が非常に短い(1mmまたは0.1mm)微量用機器は、高濃度のサンプルに適しています。
最適な測定を行うためには、測定と測定の間はセルホルダにセルを載せたままにしておく必要があります。取り外す場合は、ラベルを光源に向けるなど、必ずセルホルダの中でセルを同じ方向に向けて置くように注意する必要があります。こうすることで、基準とサンプルの両方の測定で同じ光学的効果を得ることができます。
最高の測定結果を得るには、同じ種類のセルを使用して基準とサンプルを測定する必要があります。
セルのウィンドウは、目的のスペクトル範囲で透明性を備えている素材で作られている必要があります。
UV範囲で最高の測定結果を得るには、石英ガラスまたはSUPRASIL®ガラスなど、UVを透過させるガラスを使用する必要があります。
SUPRASIL®はHeraeus社の商標です(石英ガラス)。
可視範囲(>400nm)では、光学ガラスセル、または使い捨てのPMMA(ポリメタクリル酸メチル)やPS(ポリスチレン)セルがよく使用されます。
ポリメチル・メタクリレートで作られた使い捨てのセルはUV範囲で吸光性があり、遮光フィルターのような役割を果たすため、UV範囲の測定が不正確になります。このため、可視範囲内の測定のみに限定する必要があります。
使用する前に、サンプルをよく撹拌します。核酸やタンパク質を再懸濁する場合は特に重要です。ガラス製ピペットは光学面を傷つける可能性があるため、セルに充填する際に使用しないでください。使い捨てのプラスチックチップ付きピペットが適しています。気泡ができないように、溶液をセル内部のガラス壁に沿って流し入れます。充填する際には、最大容量の80%を超えないようにします。
光が通過するセルのウィンドウは、使用する前に清掃する必要があります。内側と外側を完全に清掃するためには、60%のイソプロパノール/脱イオン水溶液を使用して、光学クリーニングクロスまたは糸くずの出ないティッシュ(糸くずで表面に傷をつけないため)で拭き取ります。
吸光度が上がらないように、使用前と使用後にセルを徹底的に清掃する必要があります。清掃が終了した後は、ウィンドウに触れないようにさらに注意する必要があります。溶媒の蒸発によりセルが損傷しないよう、測定後はサンプルをすぐに取り除く必要があります。
指紋や皮脂などの残留物がセルウィンドウに残っていると、吸収する成分が追加されるため、吸光度が高くなります。使用前と使用後の徹底的な清掃で、これを防ぐことができます。清掃が終了した後は、ウィンドウに触れないようにさらに注意する必要があります。
セルのすりガラスになっている方だけを持ち、セルに指紋を残さないように気を付けてください。
セルの透過面を光線に配置して、ブランクとサンプルのセルラベルが同じ方向を向くようにします。セルが傾かないように、セルホルダに確実に固定します。セルは絶対に動かないようにします。
親水性サンプルの場合、セル専用の蓋を使用して、溶媒の蒸発や外気からの水分の吸収を抑制します。
一連の測定が終了した後、フローセルは必ず完全に空にする必要があります。光学ウィンドウの上で石灰化しないようにするには、フローセルの内部をアセトンですすいだ後、残留したアセトンを取り除くために十分に乾燥させる必要があります。
短期間の保管には、専用のセルホルダを使用することができます。長期間の保管の場合は、ガラス面に傷や埃がつかないように、梱包箱を使用する必要があります。
最適な測定を行うためには、測定と測定の間はセルホルダにセルを載せたままにしておく必要があります。取り外す場合は、ラベルを光源に向けるなど、必ずセルホルダの中でセルを同じ方向に向けて置くように注意する必要があります。こうすることで、基準とサンプルの両方の測定で同じ光学的効果を得ることができます。メトラー・トレドのExcellenceセルは製造公差が優れており、180°の吸光度の差はわずかなため、必ずしも特定の方向に向ける必要はありません。
指紋や皮脂などの残留物がセルウィンドウに残っていると、吸収する成分が追加されるため、吸光度が高くなります。使用前と使用後の徹底的な清掃で、これを防ぐことができます。清掃が終了した後は、ウィンドウに触れないようにさらに注意する必要があります。
セルとは、水性サンプルを入れる小さな長方形の筒です。直線的な側面は、傷や汚れのない透明な素材で作られています。キャピラリと呼ばれることもあります。セルは分光光度測定で使われ、特定の波長の吸光度を測定します。
セルの滑らかな面に傷や小さなひびがある場合、測定品質が低下したり、分光光度計の中でセルが壊れる可能性があるため、以降の測定には使用しないでください。修理や接着に樹脂材料を使用すると、測定品質を低下させてしまいます。したがって、破損したセルの修理はお勧めできません。
空のセルは、未知の溶液を測定する前に分光光度計を校正するのに使用します。分光器の測定値は空のセルに対する相対値です。測定値に影響を及ぼす可能性のある環境要因には、埃、温度、湿度などがあります。すべての外的要因を排除するために、空のセルの分光光度測定値は、サンプル溶液セルの測定値から差し引きます。
メトラー・トレドの光学ガラス: 波長320~2500nm、透過率80%超、再利用可、VISスペクトル
メトラー・トレドの石英ガラス: 波長200~2500nm、透過率82%超、再利用可、UV/VISスペクトル
最も一般的な容量は、標準的な10mmマクロセルの3.5ml(3500µL)です。セルの容量は次の式で簡単に計算できます: 内側の長さ x 内側の幅 x 内側の高さ x 80% = セル容量
一対のセルとは、同じ素材で同じ光路長を持つ2つのセルのことを指しています。製造公差は指定されているため、一対のセルによって比較可能な測定を行うことができます。メトラー・トレドのExcellenceセルの製造公差はわずか± 0.01mmしかないため、揃える必要がありません。