UV/Vis spektroskopie slouží k mnoha vědeckým a průmyslovým účelům, včetně:
Tyto funkce podporují aplikace při kontrole kvality léčiv a potravinářských výrobků, stejně jako výzkum v oblastech, jako je chemie, biologie a věda o materiálech. To pomáhá při studiu vlastností materiálů a pochopení toho, jak světlo interaguje s různými látkami.
Když UV/Vis světlo interaguje se vzorkem, může být buď absorbováno, nebo přenášeno. Absorbance měří množství světla, které vzorek absorbuje na určité vlnové délce, a udává, kolik světla je zadrženo. Propustnost (T = I/I₀) představuje podíl světla, který projde vzorkem. Pochopení těchto vlastností je zásadní pro analýzu interakce látky se světlem.
Absorbance (A) je bezrozměrná veličina běžně uváděná v jednotkách absorbance (AU) pro přehlednost.
Matematicky souvisí s propustností prostřednictvím rovnice: A = -log₁₀(T).
Výsledky UV/Vis spektroskopie jsou zobrazeny v UV/Vis spektru, což je graf, který obvykle vykresluje absorbanci nebo propustnost v závislosti na vlnové délce (190-780 nm). Toto spektrum odhaluje, které vlnové délky byly absorbovány a v jakém rozsahu.
Píky v tomto spektru označují vlnové délky maximální absorpce (λmax), které jsou specifické pro strukturu molekuly a slouží jako jedinečný "otisk prstu" analyzované látky. Intenzita těchto píků (nebo intenzita absorpce) je přímo úměrná koncentraci absorbujících látek, jak je popsáno v Beer-Lambertově zákoně.
Tato základní technika zahrnuje průchod UV/Vis světla vzorkem a měření procházejícího světla. Absorpční charakteristiky vzorku v celém rozsahu UV/Vis můžeme určit porovnáním počáteční intenzity světla s intenzitou procházejícího světla.
Beerův-Lambertův zákon (A = εdc) je nezbytný pro kvantitativní analýzu. Uvádí, že absorbance je přímo úměrná koncentraci (c) absorbující látky a délce dráhy (d) světelného paprsku vzorkem. Molární absorpční koeficient (ε) je konstanta specifická pro danou látku. Tento zákon umožňuje přesné stanovení koncentrací analytů.
Kalibrační křivka je grafický nástroj používaný ke zjištění koncentrace látky ve vzorku. Zde je podrobný přehled procesu:
Stanovení koncentrace neznámého vzorku:
Kalibrační křivky jsou životně důležité pro transformaci měření absorbance na přesné hodnoty koncentrace, čímž usnadňují přesnou kvantitativní analýzu.
UV/Vis spektroskopie může také poskytnout vhled do elektronických vlastností materiálů, jako jsou polovodiče. Analýzou absorpční hrany ve spektru lze energii zakázaného pásma odhadnout pomocí technik, jako je Taucův graf. Tato analýza pomáhá charakterizovat energii potřebnou k excitaci elektronů v materiálu.
Zajímá vás, jak funguje UV/Vis spektrofotometr? Toto video popisuje, jak tyto přístroje fungují, a představuje technologii FastTrack společnosti METTLER TOLEDO pro rychlé, přesné a spolehlivé výsledky.
Rozpusťte vzorek ve vhodném rozpouštědle a vložte jej do speciální průhledné nádoby (kyvety). Připravte si také referenční kyvetu (nazývanou blank) s čistým rozpouštědlem.
Stroj vyzařuje paprsek UV a viditelného světla jak na vzorek, tak na referenci.
Část přístroje (monochromátor) funguje jako filtr, který vybírá jednu konkrétní barvu (vlnovou délku) světla v daném okamžiku, aby prošlo vzorkem. Tento postup se pak zopakuje pro všechny vlnové délky v UV/Vis rozsahu.
Detektor měří, kolik světla projde vzorkem a kolik projde referenční vlnovou délkou při každé vlnové délce.
Stroj porovnává množství světla, které prošlo vzorkem, s množstvím, které prošlo referencí. To nám říká, kolik světla vzorek absorboval při každé vlnové délce.
Přístroj poté vytvoří graf (UV/Vis spektrum), který ukazuje, kolik světla vzorek absorboval při každé vlnové délce. To pomáhá identifikovat a kvantifikovat látky ve vzorku
Typický UV/Vis spektrofotometr se skládá z několika klíčových součástí:
Detektor je klíčovou součástí odpovědnou za přeměnu světelné energie, která prošla vzorkem a referencí, na měřitelný elektrický signál. Intenzita procházejícího světla je nepřímo úměrná absorbanci vzorku při specifické vlnové délce. Detektor měří tyto intenzity pro výpočet hodnot absorbance pro UV/Vis spektrum a jeho citlivost a rozsah vlnových délek ovlivňují výkon a použitelnost spektrofotometru .
Tyto přístroje měří propustnost světla po jedné vlnové délce. Difrakční mřížka rozděluje světlo na vlnové délky jeho složek a jediný detektor měří světlo, které prochází vzorkem při každé zvolené vlnové délce. Tento proces se opakuje v požadovaném rozsahu, aby se vytvořilo celé spektrum.
Tyto přístroje osvětlují vzorek současně celým spektrem UV/Vis světla. Vzorek absorbuje různé vlnové délky současně a procházející světlo je difraktováno mřížkou na pole více detektorů (jako jsou fotodiody). Každý detektor v poli měří intenzitu specifického úzkého pásma vlnových délek současně. Tato konstrukce umožňuje mnohem rychlejší pořízení celého UV/Vis spektra ve srovnání se skenovacími přístroji.
Kyveta je klíčovou součástí spektrofotometru, která udržuje kapalný vzorek ve světelné dráze. Musí být vyroben z materiálu transparentního pro použité vlnové délky, což zajišťuje přesné měření. Důležitá je také délka dráhy nebo vzdálenost, kterou světlo urazí vzorkem, přičemž standardní kyvety mají obvykle délku dráhy 10 mm, i když se může pohybovat od 1 mm do 50 mm v závislosti na aplikaci.
Jedná se o nejběžnější typ a jsou vhodné pro většinu vzorků. Obvykle mají vnější rozměry 12,5 mm x 12,5 mm a výšku 45 mm, s vnitřními rozměry 10 mm x 10 mm, což vede ke standardní délce dráhy 10 mm.
Tyto kyvety mají délku dráhy větší než 10 mm a používají se, když je vzorek příliš zředěný a vyžaduje delší délku dráhy pro zvýšení absorbančního signálu a zlepšení citlivosti. Jsou také užitečné, když se vzorek může během měření odpařit nebo dojít k chemické změně, protože delší cesta umožňuje větší interakci se světelným paprskem.
Kyvety s délkou dráhy menší než 10 mm se používají v případě, že absorbance vzorku je velmi vysoká a ředění je buď obtížné, nebo nežádoucí. Kratší délka dráhy pomáhá udržet absorbanci v měřitelném (lineárním) rozsahu přístroje.
Tyto kyvety jsou speciálně navrženy pro analýzu velmi malých objemů vzorků. Například některé mikrokyvety mají délku optické dráhy 10 milimetrů a jsou vyrobeny z taveného křemičitého skla. Jsou vhodné pro měření v ultrafialovém a viditelném rozsahu, pokrývají vlnové délky mezi 200 nm – 2500 nm a zvládnou objemy vzorků kolem 700 μl.
Jsou vhodné pro měření v ultrafialovém a viditelném rozsahu, pokrývají vlnové délky mezi 170 nm – 2700 nm a vyžadují malý objem vzorku 440 μl. Tyto články jsou spolehlivé a opakovaně použitelné.
Pro přesná a spolehlivá UV/Vis měření, zejména v klinické, farmaceutické a průmyslové kontrole kvality, musí spektrofotometr pracovat v rámci svých specifikovaných výkonnostních limitů. V důsledku toho je nezbytné pravidelné ověřování výkonu a všechny výsledky kalibrace by měly být pečlivě zdokumentovány a uloženy.
Kalibrace zahrnuje kontrolu a nastavení přesnosti přístroje v následujících oblastech. Tyto kontroly jsou prováděny pravidelně a úpravy jsou prováděny, pokud naměřené hodnoty spadají mimo přijatelné limity, takže je nezbytné vést záznamy o těchto kalibracích.
Zajištění správné zvolené barvy světla pomocí standardních referenčních materiálů.
Potvrzení, že přístroj přesně měří množství světla absorbovaného nebo propouštěného standardními roztoky.
Kontrola nežádoucího světla, které by mohlo vést k chybám měření.
Ověření schopnosti přístroje rozlišovat mezi těsně rozmístěnými barvami světla.
Zajištění stabilního a přesného odečtu nuly.
Test výkonu | Certifikovaný referenční materiál (CRM) | Parametr testu přístroje | Kritéria přijetí | |
USP 42 NF 37 | Ph. Eur. 10 | |||
Přesnost vlnové délky & opakovatelnost | Ho(ClO4)3: 4 % Ho2O3 v 10 % v/v HClO4 Prázdné: Vzduch | 14 vlnových délek (240 nm – 650 nm) Xe: 2 vlnové délky (260,6, 528,6 nm) | UV (200 – 400 nm): ± 1 nm Vis (400 – 780 nm): ± 2 nm (S.D.) < 0,5 nm | UV (< 400 nm): ± 1 nm Vis (> 400 nm): ± 3 nm |
Fotometrický přesnost & opakovatelnost** | K2Cr2O7 v 0.001 M HClO4 Prázdný: 0,001 M HClO4 | 60 mg/l 0 A – 2 A, 235, 257, 313, 350 nm | Pro absorpční ≤ 1A Přesnost: ± 0,010A Opakovatelnost: S.D. ≤ 0,005 A Pro absorpční > 1A Přesnost: ± 1% Opakovatelnost: S.D. ≤ 0,5 % | Přesnost: ± 0,010 A nebo ± 1 %, podle toho, která hodnota je větší |
Kyselina nikotinová v 0,1 M HCl Blank: 0,1 M HCl | 12 mg/l 0,26 A až 1,6 A 213, 261 nm | |||
Fotometrická linearita | K2Cr2O7 v 0.001 M HClO4 Prázdný: 0,001 M HClO4 | 6 – 200 mg/L, do 3,0 A, 235, 257, 313, 350 nm | Všechny měřené filtry splňují kritéria přijatelnosti fotometrické přesnosti | Č2> 0,999 |
Kyselina nikotinová v 0,1 M HCl Blank: 0,1 M HCl | 6 – 60 mg/l, do 2,5 A 213, 261 nm | |||
Rozptýlené světlo podle postupu A (SFRM) | 1,2 % w/v KCl/H2O; Délka dráhy 10 mm Blank: 1,2 % w/v KCl/H2O, délka dráhy 5 mm | Maximum při 198 nm | ≥ 0,7 A | člen Komise. |
Rozptýlené světlo podle postupu B (SWM) | 1,2 % w/v KCl/H2O; Délka dráhy 10 mm Blank: H2O, délka dráhy 10 mm | Maximum při 198 nm | ≥ 2,0 A | ≥ 2,0 A |
Usnesení | 0,02 % obj. toluenu v n-hexanu Prázdný: n-hexan/ n-heptan (Ph. Eur. 10) | Amax,269/Amin,267 | >1.3 | Úrovně jsou uvedeny v příslušné monografii |
** Žádná specifikace fotometrické opakovatelnosti (přesnosti) v Ph. EUR. S.D. - směrodatná odchylka | ||||
Zajišťuje bezpečnost spotřebitelů hodnocením kvality a složení potravin se zaměřením na atributy, jako je barva, chuť a vůně. Využívá také analytické techniky k identifikaci kontaminantů a příložných látek.
Přísná analýza je životně důležitá pro ověření čistoty, koncentrace a identity léků. Sledování stability léků je také nezbytné pro zajištění účinnosti v průběhu času za různých podmínek prostředí.
Hodnotí bezpečnost a účinnost produktu na základě analýzy fotostability UV filtrů, charakterizace částic a měření barevných indexů. Detekuje také falšování a kvantifikuje barviva a antioxidanty, aby splnil očekávání spotřebitelů.
Charakterizuje ropu, vypočítává asfaltenové frakce, formuluje indexy aromatického obsahu, určuje obsah síry a vypočítává faktory rozpustnosti.
Určuje chemické vlastnosti, posuzuje kvalitu finálního produktu, studuje složení polymerů, kvalifikuje vodu, určuje čistotu a účinnost barvení, analyzuje fotokatalytickou degradaci a zbytky pesticidů.
Určuje koncentraci a čistotu nukleových kyselin a proteinů, monitoruje mikrobiální buněčné kultury, studuje denaturaci a kinetiku proteinů a analyzuje biologické vzorky, jako je krevní plazma a sérum.
UV/Vis spektroskopie se používá v nesčetných aplikacích, které pokrývají různá průmyslová odvětví, od farmacie až po monitorování životního prostředí.
Skupina pro podporu trhu společnosti METTLER TOLEDO nabízí knihovnu UV/Vis aplikací ke stažení.
Tyto osvědčené a otestované aplikace zahrnují poznámky a metody, které lze přímo importovat do vašich nástrojů.
Ať už pracujete ve výzkumu a vývoji, kontrole kvality nebo výrobě, naše webové stránky jsou zdrojem informací pro všechny vaše potřeby v oblasti UV/Vis spektrofotometrie. Prohlédněte si naši kolekci ještě dnes a objevte nejnovější normy a protokoly, které vám zajistí nejvyšší úroveň přesnosti a přesnosti vašich měření.
Mikroobjemové spektrofotometry usnadňují analýzu extrémně malých objemů vzorků, pouhých 1 μl, což je nezbytné v oblastech, jako je biomolekulární analýza. Tyto přístroje využívají technologii optických vláken k nasměrování světla přes malou kapičku vzorku umístěnou na podstavci. Krátká délka dráhy umožňuje přesné měření koncentrovaných vzorků bez nutnosti ředění.
Konkrétně mikroobjemová spektrofotometrie přesně měří čistotu a koncentraci nukleových kyselin hodnocením absorbance při 260 nm a výpočtem poměru A260/A280, který indikuje kontaminaci proteinů. Podporuje také kvantifikaci proteinů pomocí absorbance při 280 nm, což umožňuje spolehlivou kontrolu kvality v pracovních postupech molekulární biologie, jako je PCR a sekvenování.
Výhody | Nevýhody |
Jednoduché ovládání a rychlé experimenty. | Omezené podrobné strukturální informace. |
Relativně nízké náklady na instrumentaci a analýzu. | Může postrádat specifičnost ve složitých směsích kvůli překrývajícím se pásům. |
Použitelné pro širokou škálu analytů. | Citlivost může být pro některé analyty nedostatečná. |
Užitečné pro kvantitativní analýzu s kalibračními křivkami. | Náchylný k maticovým efektům. |
Může poskytnout některé kvalitativní informace (λmax) | Mohou se vyskytnout odchylky od Beer-Lambertova zákona. |
Neničí vzorek. | Poskytuje omezené informace o molekulárním prostředí. |
Dobrá citlivost pro silně absorbující analyty. | Ne všechny látky se v UV/Vis oblasti silně vstřebávají. |
Umožňuje integraci procesů, jako např. při víceparametrové analýze. | Funguje pouze s průsvitnými, nezakalenými vzorky. |
Nízké náklady na vzorek/analýzu | |
Malé rozměry |
Dosažení vysoké přesnosti a preciznosti UV/Vis měření vyžaduje přijetí opatření, aby se předešlo chybám. Zde jsou některé typické zdroje chyb, které je třeba vzít v úvahu:
Optimalizujte svá UV/Vis spektrofotometrická měření identifikací potenciálních problémů. Udělejte si naši rychlou kontrolu rizik UV/Vis a zhodnoťte své současné postupy a získejte personalizovaná doporučení ke zlepšení.
Dosáhněte spolehlivějších výsledků s GUVP™ minimalizací potenciálních chyb. Zjistěte, jak na to, v naší brožuře "Důvěryhodné výsledky pro UV/VIS spektroskopii".
Type of Spectroscopy | Type of Radiation | Interactions | Wavelength |
ϒ-ray spectroscopy | Y-rays | Atomic nuclei | < 0.1 nm |
X-ray fluorescence spectroscopy | X-rays | Inner shell electrons | 0.01 – 2.0 nm |
Vacuum UV spectroscopy | Ultraviolet (UV) | Ionization | 2.0 – 200 nm |
UV/Vis spectroscopy | UV/Vis | Valance electrons | 200 – 800 nm |
Infrared & Raman spectroscopy | Infrared | Molecular vibrations | 0.8 – 300 mm |
Microwave spectroscopy | Microwaves | Molecular rotations | 1 mm – 30 cm |
Electron spin resonance spectroscopy | Electron spin | ||
Nuclear magnetic resonance spectroscopy | Radio waves | Nuclear spin | 0.6 – 10 |
The different spectroscopic techniques are mainly differentiated by the radiation they use, the interaction between the energy and the material, and the type of material and applications they are used for. The spectroscopic techniques commonly used for chemical analysis are atomic spectroscopy, ultraviolet and visible spectroscopy (UV Vis spectroscopy), infrared spectroscopy, Raman spectroscopy and nuclear magnetic resonance.
Chcete-li číst UV/Vis spektrum, analyzujete graf absorbance (nebo někdy propustnosti) v závislosti na vlnové délce. Mezi klíčové body, na které je třeba se zaměřit, patří:
Interpretací těchto vlastností můžete identifikovat sloučeniny, určit koncentraci a studovat molekulární vlastnosti.
UV/Vis spektroskopie obvykle pokrývá rozsah vlnových délek od 190 nm do 780 nm.
Konkrétněji:
UV/VIS spektrofotometry METTLER TOLEDO Excellence zasahují dále do blízké infračervené oblasti a dosahují vlnové délky 1100 nm.
UV/Vis spektroskopie je důležitá, protože umožňuje kvalitativní i kvantitativní analýzu látek měřením jejich absorpce ultrafialového a viditelného světla.
Tato metoda pomáhá určit koncentraci analytů, studovat chemickou kinetiku, posoudit čistotu, provádět objektivní měření barev a analyzovat molekulární struktury. Jeho aplikace pokrývají širokou škálu oborů, včetně chemie, biologie, vědy o životním prostředí a vědy o materiálech, což z něj činí všestranný a nezbytný nástroj pro analýzu.
UV/Vis spektroskopie měří světlo absorbované vzorkem, aby určila jeho koncentraci a identifikovala sloučeniny. Tento proces zahrnuje odstranění světla.
Naproti tomu fluorescenční spektroskopie měří světlo vyzařované vzorkem poté, co absorbuje světlo, obvykle na delší vlnové délce. Tato technika se zaměřuje na opětovnou emisi světla, což poskytuje mnohem vyšší citlivost pro specifické fluorescenční molekuly.
Chcete-li připravit vzorek pro UV/Vis spektroskopii, budete muset se svými kyvetami a roztoky zacházet opatrně:
Chcete-li určit koncentraci neznámého roztoku pomocí UV/Vis spektroskopie, postupujte takto:
Tato metoda se opírá o Beer-Lambertův zákon, který říká, že absorbance A = εbc, kde ε je molární absorptivita, b je délka dráhy a c je koncentrace.
Absorpce UV záření má za následek elektronické přechody z nižších energetických hladin na vyšší energetické úrovně. Absorpce ultrafialového záření v organických molekulách je omezena na určité funkční skupiny (chromofory), které obsahují valenční elektrony s nízkou excitační energií. Molekulární přechody/interakce, ke kterým dochází v důsledku absorpce UV záření, jsou:
Tyto přechody potřebují nenasycenou skupinu v molekule, která poskytne π elektronů.
Přechody σ (vazba) na σ* (anti-bonding) vyžadují vyšší energii, a proto je nelze detekovat pomocí UV Vis spektroskopie.
Uvažujme funkční skupinu obsahující atomy s jedním nebo více osamocenými páry elektronů, které neabsorbují ultrafialové/viditelné záření. Když je však tato funkční skupina připojena k chromoforu, mění intenzitu a vlnovou délku absorpce. Tento jev se nazývá auxochrom nebo skupina zvýrazňující barvu.
Přítomnost auxochromu způsobuje posun polohy píku nebo signálu na delší vlnovou délku, což se nazývá bathochromní nebo červený posuv. Funkční skupiny přispívající k bathochromním skupinám jsou substituenty jako methyl, hydroxyl, alkoxy, halogen a aminoskupiny.
Auxochrom, který způsobuje posun polohy píku nebo signálu na kratší vlnovou délku, se nazývá hypsochromní nebo modrý posuv. Kombinace chromoforu a auxochromu se ve skutečnosti chová jako nový chromofor s jiným absorpčním maximem (λmax). Například benzen ukazuje λmax při 256 nm, zatímco anilin ukazuje λmax při 280 nm. SkupinaNH2 tedy působí jako auxochrom a způsobuje posun λmax na větší hodnotu.
| Instrumen | Spectral resolution | Equivalent SBW (nm) |
| UV5 | > 1.5 | < 2.0 |
| UV5Bio | > 1.5 | < 2.0 |
| UV5Nano | > 1.7 | < 1.5 |
| UV7 | > 1.9 | ≤ 1.0 |
The table shows the resolution of METTLER TOLEDO's UV/VIS Excellence spectrophotometers, which is measured using toluene in hexane, and the equivalent SBW.
The spectral bandwidth (SBW) of a spectrophotometer is related to the physical slit-width and optical dispersion of the monochromator system. Resolution is the ability of an instrument to separate light into finite, distinct wavelength regions and to distinguish each finite region. Spectral bandwidth is typically used for scanning instruments, whereas resolution is typically used for array instruments.
For most pharmacopeia quantitative purposes, a spectral bandwidth of less than 2 nm is sufficient and the acceptance criteria for the ratio is 1.3. Spectral resolution can be used for comparison with spectral bandwidth.
| Light Source | Wavelength Range (nm) | Region | Lifetime |
| Tungsten filament lamp | 350 – 2500 | Vis + IR | 3,000 hr |
| Deuterium arc lamp | 190 – 400 | UV | 1,000 hr |
| Hydrogen lamp | 190 – 400 | UV | 1,000 hr |
| Xenon flash lamp | 190 – 1100 | UV + Vis + NIR | 5,500 hr* |
* Corresponds to 50 Hz flashes at constant operation
The best light source would be one that provides good intensity with low noise across all ultraviolet and visible wavelengths and offers stability over a long period. There is a range of light sources which are commonly employed as mentioned above.
Difrakční mřížky jsou obecně lepší než hranoly pro rozdělení různých vlnových délek, protože:
Vyšší spektrální rozlišení: Mřížky mohou poskytovat mnohem vyšší spektrální rozlišení díky své schopnosti produkovat více ostrých difrakčních řádů, což umožňuje jemnější separaci těsně rozmístěných vlnových délek.
Lineární disperze: Úhlová separace mezi vlnovými délkami v mřížce je lineárněji vztažena k vlnové délce, což usnadňuje analýzu a kalibraci spekter ve srovnání s nelineární disperzí hranolů.
Žádná omezení disperze materiálu: Hranoly se spoléhají na disperzi materiálu (změna indexu lomu s vlnovou délkou), což může omezit výkon, zejména v určitých rozsazích vlnových délek. Rošty využívají interferenčních efektů, které nejsou omezeny vlastnostmi materiálu.
Široký rozsah vlnových délek: Mřížky mohou efektivně pracovat v širším rozsahu vlnových délek, včetně ultrafialového a infračerveného záření, zatímco hranoly mají omezení absorpce a disperze.
Celkově difrakční mřížky poskytují přesnější a univerzálnější separaci vlnových délek než hranoly, a proto se běžně používají ve spektrometrech a optických přístrojích.
Molekuly mohou být analyzovány pomocí UV/Vis spektroskopie, pokud mají nějakou funkční skupinu nebo konjugaci, nebo pokud vytvářejí barevný komplex. Protože anorganické sloučeniny neobsahují žádnou funkční skupinu ani konjugaci, běžnou metodou jejich analýzy je reakce s vhodnou sloučeninou. Vzniká tak barevný komplex, jehož absorbance může být fotometricky měřena ve viditelné oblasti a korelována s jeho skutečnou koncentrací. Například železo se běžně analyzuje reakcí s 1,10-fentrolinem za vzniku komplexu červené barvy. Absorbance komplexu se měří při 570 nm pro odhad koncentrace železa.
Následuje hlavní rozdíl mezi jednopaprskovým a dvoupaprskovým spektrofotometrem.
Rozdělení svazku ve dvoupaprskovém spektrofotometru lze dosáhnout dvěma způsoby:
Analýza pevného vzorku se provádí především odhadem jeho absorbance, propustnosti a odrazivosti. Mezi běžné parametry stanovené pro pevné polymery patří % propustnosti, mezní vlnová délka a index žloutnutí. Vzorek je namontován na držáku speciálně navrženém pro pevné vzorky a odečty se provádějí stejným způsobem jako u kapalných vzorků. Pevný držák vzorků umožňuje měření pevných vzorků, jako jsou filmy nebo sklo.
Teplota ovlivňuje hodnoty absorbance. Různá rozpouštědla podléhají různým interakcím při různých teplotách. Parametry řešení, které se mění v důsledku změn teploty, jsou:
Parametry optického výkonu, jako je fotometrický šum, přesnost/opakovatelnost vlnové délky, fotometrická opakovatelnost a rozptýlené světlo, nejsou ovlivněny teplotou v rozmezí 10 – 40 °C.
Zatímco optické parametry, jako je fotometrické rozlišení (poměr toluen/hexan) a vlnové délky fotometrické přesnosti (K2Cr2O7 v HClO4), vykazují teplotní závislost v rozmezí od 0,014 do -0,034/jednotku v rozmezí 10 – 40 °C.
Rozptýlené světlo je definováno jako světlo, které dopadá na detektor, které nepochází ze světelného zdroje přístroje a nesleduje optickou dráhu, což způsobuje odchylku na odpovídající vlnové délce. Intenzita světla měřená detektorem je tedy vyšší, než by ve skutečnosti měla být. Na druhou stranu to také znamená, že naměřená absorbance je nižší než skutečná absorbance, protože je snížena příspěvkem rozptýleného světla. Tento efekt je výraznější při vyšších hodnotách absorbance (vysoké koncentrace vzorku).
Stáhněte si bílou knihu a zjistěte více o původu a přesném měření rozptýleného světla:
Prostor pro vzorky ve spektrofotometrech UV/Vis array je otevřený vzhledem k tomu, že přístroje s polem používají reverzní optiku a současnou detekci všech vlnových délek spektra.
Anika Adams is Senior Product Manager for UV/Vis Spectrophotometers at METTLER TOLEDO, where she focuses on driving innovation and optimizing customer workflows. With a degree in business administration and experience spanning software development, mechanical engineering, and production, Anika brings a multidisciplinary perspective to the laboratory business. Her expertise lies in automating and enhancing customer processes, ensuring both product excellence and customer satisfaction.
