Obtenga el manual de pipeteo: - METTLER TOLEDO
Guía

Obtenga el manual de pipeteo:

Guía

la herramienta definitiva de conocimientos para los expertos en pipeteo.

Maecenas faucibus mollis interdum. Donec id elit non mi porta gravida at eget metus. Nullam id dolor id nibh ultricies vehicula ut id elit.
Maecenas faucibus mollis interdum. Donec id elit non mi porta gravida at eget metus. Nullam id dolor id nibh ultricies vehicula ut id elit.

El pipeteo constituye un elemento central de los trabajos de investigación de las ciencias de la vida. Para obtener resultados reproducibles, los científicos precisan pipetas exactas y puntas de gran calidad y libres de contaminación.

Con nuestro manual de pipeteo para ciencias de la vida, podrá comprender los procedimientos de selección y evaluación de pipetas y puntas, lo que le permitirá mejorar su rendimiento de pipeteo y le garantizará mejores resultados. 

El manual de pipeteo para ciencias de la vida proporciona una visión completa con descripciones detalladas sobre:

  • Evaluación y selección de pipetas
  • Selección de la puntas adecuadas
  • Técnicas de pipeteo

Descárguese el manual ahora y descubra cómo convertirse en un experto en pipeteo.

Previsualización del manual de pipeteo

1.Prólogo

El fin de Good Pipetting Practice es ayudar a que los investigadores tomen decisiones informadas sobre el equipo, las técnicas adecuadas relativas al pipeteo y la ergonomía, la calibración y el funcionamiento rutinario, para obtener los mejores resultados posibles. El pipeteo (medición y transferencia) de pequeños volúmenes de líquido en el rango de microlitros y mililitros es probablemente la actividad más practicada en los laboratorios de investigación. Ser capaz de desempeñar esta tarea rápidamente y con precisión es un requisito previo indispensable para realizar un buen trabajo en el laboratorio. Las pipetas de desplazamiento de aire modernas se usan para la mayor parte del trabajo de laboratorio debido a sus numerosas ventajas: son el instrumento idóneo para dosificar a la perfección pequeñas cantidades de líquido. Es posible obtener un alto nivel de productividad, con su correspondiente ahorro en horas de mano de obra, al usar pipetas y puntas de alta calidad modernas.

2.Planificación del proyecto, flujo de trabajo y selección

Planificación del proyecto y flujo de trabajo

La mayoría de los proyectos nuevos se beneficiarán de un proceso de planificación completo en el que todos los pasos del flujo de trabajo se analizan para lograr el máximo nivel de eficacia y generación de datos. Desde el punto de vista de la manipulación de líquidos, es necesario entender el tipo de muestra inicial, el análisis del punto final necesario y la productividad de muestreo. A su vez estos factores dictarán las técnicas usadas y los formatos de manipulación de líquidos necesarios (tubos, placas, etc.). Posteriormente, esto determina las herramientas de manipulación de líquidos óptimas para el flujo de trabajo. Para cualquier actividad o acción de pipeteo, tanto la pipeta como la punta asociada y la técnica del operario deberán considerarse como un único sistema para proporcionar el volumen exacto de líquido necesario. Elegir la pipeta y la punta correctas y, a continuación, usar la técnica más eficaz es una parte integral del diseño y la implementación de cualquier proyecto o experimento.

Análisis del flujo de trabajo

El primer paso del proceso es identificar todos los pasos que componen un flujo de trabajo experimental, desde el aislamiento de muestras inicial hasta la producción de datos finales. Esto también incluirá todos los pasos de preparación necesarios para llevar a cabo el flujo de trabajo: p. ej., la preparación de soluciones tampón o mezclas maestras. Seguidamente, identifique cuánta variabilidad es tolerable para que el experimento pueda producir datos adecuados. Algunas aplicaciones y algunos pasos son mucho más sensibles a la variabilidad experimental que otros; por ejemplo, cualquier experimento en el que se use amplificación, como qPCR, puede ser muy sensible a la variabilidad, mientras que un paso de preparación de una solución tampón sencillo quizás no lo sea. La elección de una pipeta, una punta y una técnica de pipeteo con unas características inferiores a las adecuadas puede ser el mayor causante de la variabilidad experimental: p. ej., los experimentos que dependan de una curva estándar generada a través de la dilución en serie de estándares pueden verse gravemente afectados por un pipeteo de nivel inferior al requerido.

Optimización del flujo de trabajo

  • Requisitos de rango de volumen y productividad de muestreo
  • Requisitos de formato de contenedores de muestras/reactivos
  • Requisitos específicos de muestras/ensayos

3.Selección de la pipeta adecuada

Hay múltiples herramientas de pipeteo disponibles que permiten lograr resultados óptimos y una mayor productividad, a la vez que ofrecen ventajas adicionales como características ergonómicas mejoradas y una mejor funcionalidad para una aplicación concreta. Existen dos tipos principales de micropipetas: de desplazamiento de aire y de desplazamiento directo. Ambas determinan el volumen de líquido dosificado usando el diámetro del émbolo y la longitud del recorrido del émbolo.

Pipetas de desplazamiento de aire

  • Extremadamente exactas con soluciones acuosas
  • Económicas

Las pipetas de desplazamiento de aire son los instrumentos de pipeteo más habituales en el laboratorio. Estas pipetas se usan colocando el extremo de la punta en la muestra líquida y, a continuación, soltando el botón pulsador. Se crea un vacío parcial cuando el émbolo de la pipeta sube por el cuerpo de la pipeta, y la muestra líquida sube hasta la punta para llenar el hueco del volumen seleccionado creado por el vacío parcial.

Pipetas de desplazamiento directo

  • Extremadamente exactas con la mayoría de las soluciones
  • Recomendadas para líquidos viscosos, densos, volátiles o corrosivos

Si bien no son tan habituales como las pipetas de desplazamiento de aire, las pipetas de desplazamiento directo suelen verse con frecuencia en entornos de laboratorio. Estas pipetas usan un sistema desechable de émbolos y capilares para crear un hueco físico del volumen seleccionado. El émbolo entra en contacto directo con la muestra, y cuando el émbolo sube, la muestra se introduce en el capilar. Las pipetas de desplazamiento directo ofrecen una exactitud y una precisión elevadas al pipetear soluciones acuosas, pero se recomiendan para su uso con soluciones viscosas, densas, volátiles y corrosivas. Los capilares y émbolos desechables usados con una pipeta de desplazamiento directo son más caros que las puntas desechables de las pipetas de desplazamiento de aire, por lo que se recomiendan las pipetas de desplazamiento de aire cuando vayan a ofrecer los mismos resultados.

Optimización del flujo de trabajo

  • Requisitos de rango de volumen y productividad de muestreo
  • Pipetas monocanal electrónicas
  • Pipetas multicanal
  • Sistemas de pipeteo de alto rendimiento
  • Pipetas especializadas
  • Pipetas de desplazamiento directo
  • Pipetas repetidoras
  • Controladores de pipetas
  • Dosificadores para botella

4.Elección de la punta correcta: diseño, calidad e idoneidad

Lo más adecuado es considerar la pipeta y su punta recomendada por el fabricante como un único sistema, no como dos componentes individuales. Las puntas de pipetas que se anuncian como aptas para todas las pipetas a menudo presentan problemas en cuanto a idoneidad o diseño, ya que están diseñadas para ajustarse a una amplia gama de modelos de pipetas. Al seleccionar puntas de pipetas, las características que debe tener en cuenta son el diseño, la calidad y la idoneidad.

Diseño de la punta

El diseño más avanzado en puntas de pipetas es la punta de paredes finas flexible con un punto fino o un orificio de punta pequeño. Para el pipeteo de pequeños volúmenes (menos de 20 µl), las puntas FinePoint™ de Rainin mejoran la exactitud y la precisión de las puntas de pipetas estándar que tienen paredes gruesas o extremos biselados. Las puntas FinePoint son más flexibles que la mayoría de puntas estándar, y permiten que la muestra líquida fluya por cualquier ángulo de la punta para un suministro completo. Es decir, se retiene una cantidad mucho menor de la muestra en la punta en comparación con lo que ocurre con las puntas de paredes gruesas o extremos biselados. Las diferencias en el diseño de la punta afectan al rendimiento, la exactitud y la precisión. Sin embargo, cuando las pipetas se usan correctamente, ofrecen un rendimiento garantizado con la exactitud y la precisión especificadas, siempre que se usen las puntas recomendadas por el fabricante.

Calidad de la punta

Los defectos de calidad más graves se producen en el orificio o la abertura del extremo, donde pueden afectar en especial a la aspiración y la dosificación de la muestra. La figura 13 muestra cuatro extremos de puntas en una vista ampliada.

El flash es una rebaba de plástico residual que puede aparecer tras el proceso de moldeo en el interior de la punta o alrededor de la abertura.

Los defectos de moldeo y los defectos coaxiales son el resultado de un cocimiento inadecuado de los pasadores de machos de moldeo después de haber inyectado el plástico. Todos estos defectos originan una pérdida de muestra durante el pipeteo. Un proceso de fabricación de alta calidad minimizará la aparición de defectos en las puntas y los errores derivados.

Sellado de la punta de la pipeta

  • Sistema de expulsión de puntas LTS™ LiteTouch™
  • Selección de las puntas
  • Puntas especializadas para aplicaciones especiales

5.Técnicas de pipeteo

La evaluación correcta de su aplicación y, por lo tanto, la selección de sus instrumentos influirán en los resultados de su investigación significativamente. Sin embargo, estos no son los únicos aspectos que los investigadores deberían tener en cuenta para obtener resultados óptimos en sus investigaciones. Otros elementos como la técnica de pipeteo correcta y las condiciones ambientales también influyen en los resultados. La exactitud y la precisión son esenciales en la investigación científica, y las páginas siguientes le ofrecen una breve visión general de los diferentes temas relativos a las técnicas de pipeteo. Por ejemplo, ¿sabía que simplemente con seguir estas técnicas, su exactitud y su precisión podrían aumentar en hasta un 5 %?

Rango de volumen óptimo

El rango de funcionamiento normal de la mayoría de las pipetas es del 10-100 % del volumen nominal. Aunque se considera que este es el rango de funcionamiento, las especificaciones del rendimiento cambian a medida que disminuye el ajuste de volumen. Las especificaciones de exactitud de una pipeta de 100 microlitros son del +/- 0,8 % del 50-100 % del volumen nominal. Sin embargo, si marca el ajuste de volumen como 10 µl (o el 10 % del volumen nominal), la especificación de inexactitud sería más de 3 veces mayor, o el 2,5-3 %. Por lo tanto, el volumen óptimo para la mayor exactitud y la mayor precisión suele ser el 35-100 % del volumen nominal. Evite configurar el volumen de una pipeta como menos del 10 % de su máximo. En lugar de esto, cambie a una pipeta de menor volumen para volúmenes menores.

Profundidad de inmersión de la punta

En el caso de las pipetas de microvolumen es especialmente importante la correcta profundidad de inmersión de la punta, que puede mejorar la precisión en hasta un 5 %. La punta debe estar sumergida 1 o 2 mm en las pipetas de microvolumen y hasta 6 o 10 mm en las pipetas de gran volumen. Si la punta se sumerge demasiado, el volumen de gas de la punta se comprime y provoca que se aspire demasiado líquido. El líquido retenido en la superficie de la punta también puede distorsionar los resultados. Si la punta no se sumerge lo suficiente, puede entrar aire, con lo que pueden formarse burbujas de aire y los volúmenes pueden volverse inexactos. En ambos casos, el volumen no sería exacto.

  • Aspiración con el ángulo correcto
  • Mantenimiento de la homogeneidad
  • Dosificación sistemática de muestras
  • Consejos sobre preenjuague
  • Cómo evitar la variación de la temperatura
  • Configuración coherente del micrómetro
 
 
 
 
 
 
 
Thank you for visiting www.mt.com. We have tried to optimize your experience while on the site, but we noticed that you are using an older version of a web browser. We would like to let you know that some features on the site may not be available or may not work as nicely as they would on a newer browser version. If you would like to take full advantage of the site, please update your web browser to help improve your experience while browsing www.mt.com.