Dobite priročnik za pipetiranje – - METTLER TOLEDO
Vodnik

Dobite priročnik za pipetiranje –

Vodnik

ultimativno orodje znanja za prvake pipetiranja!

Maecenas faucibus mollis interdum. Donec id elit non mi porta gravida at eget metus. Nullam id dolor id nibh ultricies vehicula ut id elit.
Maecenas faucibus mollis interdum. Donec id elit non mi porta gravida at eget metus. Nullam id dolor id nibh ultricies vehicula ut id elit.

Pipetiranje je osrednji del naravoslovnih raziskav. Znanstveniki potrebujejo natančne pipete in visokokakovostne nekontaminirane konice, saj lahko le z njimi dobijo rezultate, ki jih je mogoče ponoviti.

Z našim priročnikom o pipetiranju za naravoslovne raziskave boste razumeli izbiro in oceno pipet in nasvetov, s čimer boste izboljšali zmogljivost pipetiranja in zagotovili boljše rezultate. 

V obsežnem priročniku za pipetiranje v okviru naravoslovnih raziskav so na voljo 360-stopinjski prikazi s podrobnimi opisi postopkov:

  • Ocenjevanje in izbor pipet
  • Izbira prave konice
  • Tehnike pipeitranja

Prenesite priročnik zdaj in preberite, kako lahko postanete prvak v pipetiranju!

Predogled priročnika za pipetiranje

1. Predgovor

Dobre prakse pipetiranja (Good Pipetting Practice) so zasnovane zato, da lahko raziskovalci sprejmejo premišljene odločitve glede opreme, ustreznega pipetiranja, ergonomskih tehnik, umerjanja in rutinskih opravil ter dobijo najboljše možne rezultate. Pipetiranje – ali merjenje in prenašanje – majhnih količin tekočin v mikrolitrih ali mililitrih je verjetno najpogostejše izvajana dejavnost v raziskovalnih laboratorijih, sposobnost hitrega in natančnega izvajanja te naloge pa je ključnega pomena za uspešno laboratorijsko delo. Sodobne pipete z izpodrivanjem zraka so zaradi številnih prednosti uporabljene pri večini laboratorijskega dela. So idealni instrument za učinkovito doziranje majhnih količin tekočin. S sodobnimi visokokakovostnimi pipetami in konicami lahko zagotovite visoko raven produktivnosti, hkrati pa prihranite stroške pri delovnih urah.

2. Načrtovanje projekta, potek dela in izbor

Načrtovanje projekta in potek dela

S celovitim načrtovanjem, v okviru katerega so vsi koraki poteka dela analizirani in zasnovani tako, da omogočajo največjo učinkovitost in pridobivanje podatkov, uporabiti pa jih je mogoče pri večini novih projektov. Z vidika obdelave tekočin to pomeni poglobljeno razumevanje, kakšen je začetni vzorec, kakšno analizo je treba izvesti ob koncu postopka in kakšen vzorec je treba pridobiti. Na podlagi teh lahko določite tehniko, ki jo boste uporabili, in zahtevane priprave za obdelavo tekočin (cevi, plošče itd.). Od tega so nato odvisna orodja za obdelavo tekočin, ki so najbolj primerna za potek dela. Pri vsaki dejavnosti, ki jo izvedemo s pipeto, moramo na pipeto, povezano konico in tehniko, ki jo uporabi upravljavec, gledati kot enovit sistem, s katerim lahko dobimo natančno količino zahtevane tekočine. Ključni del pri načrtovanju in izvedbi vsakega projekta ali poskusa je izbor ustrezne pipete in konice ter najbolj učinkovite tehnike.

Analiza poteka dela

V prvem koraku postopka načrtovanja je treba določiti vse korake, ki tvorijo potek poskusa – od prvotne izolacije vzorca do končnih podatkov. Sem sodijo tudi postopki priprave za podporo poteka dela, na primer priprava pufra ali izhodiščne zmesi. Nato je treba določiti sprejemljive meje odstopanja, znotraj katerih lahko s poskusom pridobimo uporabne podatke. Nekatere aplikacije in nekateri koraki so precej bolj občutljivi za odstopanje od drugih. Vsak poskus, ki na primer vključuje amplifikacijo, kot je qPCR, je lahko zelo občutljiv na raznolikost, medtem ko preprosta priprava pufra ni tako občutljiva. Izbor neoptimalne pipete in konice kot tudi slaba tehnika pipetiranja lahko močno vplivata na raznolikost rezultatov poskusa. Neoptimalno pipetiranje lahko na primer znatno negativno vpliva na vse poskusi, ki so odvisni od standardne krivulje, ustvarjene z zaporednim redčenjem standardov.

Optimizacija poteka dela

  • Zahteve za razpon prostornine in obdelavo vzorcev
  • Zahteve za obliko vsebnika vzorca/reagenta
  • Specifične zahteve za vzorec/poskus

3. Izbor ustrezne pipete

Na voljo je veliko orodij za pipetiranje, s katerimi lahko dobite optimalne rezultate in izboljšate produktivnost, poleg tega pa lahko izkoristite dodatne prednosti, kot so izboljšane ergonomske funkcije in boljša funkcionalnost za dano aplikacijo. Na voljo sta dve glavni vrsti mikropipet: pipete z izpodrivanjem zraka in pipete z izpodrivanjem. Obe vrsti določita količino izpodrinjene tekočine s premerom bata in dolžino hoda bata.

Pipete z izpodrivanjem zraka

  • Izredno natančne pri vodnih raztopinah
  • Ekonomične

Pipete z izpodrivanjem zraka so najpogostejši instrumenti za pipetiranje, ki jih je mogoče najti v laboratoriju. Te pipete uporabljamo tako, da konico pipete potopimo v tekoč vzorec, nato pa sprostimo gumb bata. Ko se bat v ohišju pipete premakne navzgor, se ustvari delni vakuum, tekoč vzorec pa se skozi konico premakne navzgor in zapolni praznino izbrane prostornine, ki jo ustvari delni vakuum.

Pipete z izpodrivanjem

  • Izredno natančne pri večini raztopin
  • Priporočeno za viskozne, goste, hlapne ali korozivne tekočine

Čeprav so uporabljene redkeje od pipet z izpodrivanjem zraka, lahko pipete z izpodrivanjem pogosto zasledimo v laboratorijskih nastavitvah. Pri teh pipetah je uporabljen bat in kapilarni sistem, ki ga je po uporabi mogoče zavreči. Z njim je mogoče vzpostaviti fizični prostor želene prostornine. Bat je v neposrednem stiku z vzorcem. Ko se bat premakne navzgor, je vzorec uvlečen v kapilaro. Pipete z izpodrivanjem omogočajo visoko raven natančnosti pri pipetiranju vodnih raztopin, vendar so priporočljive za viskozne, goste, hlapne in korozivne raztopine. Kapilare in bati, ki jih po uporabi lahko zavržete, uporabljeni v pipetah z izpodrivanjem, so dražje od konic pipet z izpodrivanjem zraka, ki jih po uporabi lahko zavržete. Če je s pipetami z izpodrivanjem zraka mogoče dobiti enake rezultate, je priporočena uporaba teh pipet.

Optimizacija poteka dela

  • Zahteve za razpon prostornine in obdelavo vzorcev
  • Elektronske enokanalne pipete
  • Večkanalne pipete
  • Sistemi visoko zmogljivega pipetiranja
  • Pipete za posebno uporabo
  • Pipete z izpodrivanjem
  • Pipete za ponavljajoče pipetiranje
  • Krmilniki za pipete
  • Sistemi za odmerjanje za namestitev na stekleničke

4. Izbor ustrezne konice: zasnova, kakovost in prileganje

Pipeto in konico, ki jo predlaga proizvajalec, je najbolje gledati kot enoten sistem, ne kot dve samostojni komponenti. Pri konicah za pipete, ki jih po besedah prodajalcev lahko uporabljamo z vsemi pipetami, je pogosto mogoče opaziti nepopolno prileganje ali pomanjkljiv dizajn, saj so zasnovane za uporabo z različnimi modeli pipet. Pri izboru konic za pipete je treba upoštevati dizajn, kakovost in prileganje.

Dizajn konice

Konice za pipete z najsodobnejšim dizajnom imajo upogljivo konico s tanko steno s fino konico ali konico z majhnim ustjem. Za pipetiranje majhnih količin (manj kot 20 μL) lahko s konicami Rainin Fine- Point™ izboljšate raven natančnosti, ki jo nudijo standardne konice za pipete z debelimi stenami ali ukrivljenim koncem. Konice FinePoint so bolj upogljive od večine drugih standardnih konic. Vzorčna tekočina lahko teče pod poljubnim kotom konice, kar omogoča popolne rezultate. To pomeni, da na konici ostane precej manj vzorca v primerjavi s konicami z debelejšimi stenami ali konicami z ukrivljenim koncem. Razlike v dizajnu konice znatno vplivajo na učinkovitost in natančnost. Ob pravilni uporabi pipet lahko računate na zagotovljeno zmogljivost in navedeno raven natančnosti, če pri tem uporabljate konice, ki jih je priporočil proizvajalec.

Kakovost konice

Najbolj opazne pomanjkljivosti kakovosti je mogoče zaslediti na ustju ali končni odprtini, kar najbolj vpliva na aspiriranje in odmerjanje vzorca. Na sliki 13 je povečava štirih konic.

Na notranji strani konice ali okoli odprtine lahko od postopka brizganja ostane majhen delec plastike.

Zaradi nepravilnosti pri postopku brizganja in oblikovanju koaksialne oblike pride zaradi nepravilnega proženja pinov v sredici kalupa po brizganju plastike. Zaradi vseh teh nepravilnosti lahko med pipetiranjem pride do izgube vzorca. Z visokokakovostnim postopkom proizvodnje je mogoče zmanjšati pogostost nepravilnosti konic in odpraviti posledične napake.

Tesnjenje konic za pipete

  • Sistem za odstranjevanje konic LTS™ LiteTouch™
  • Izbor konice
  • Specializirane konice za posebne vrste uporabe

5. Tehnike pipetiranja

S pravilno oceno aplikacije in izborom instrumentov boste znatno vplivali na rezultate raziskave. Vendar pa to niso edini dejavniki, ki jih morajo raziskovalci upoštevati, če želijo dobiti optimalne rezultate raziskave. Na rezultate vplivajo tudi drugi dejavniki, na primer pravilna tehnika pipetiranja in okoljske razmere. Natančnost je nepogrešljiva pri znanstvenih raziskavah. Na teh straneh je kratek pregled različnih vidikov tehnike pipetiranja. Ali ste vedeli, da lahko svojo natančnost izboljšate do 5 % že zgolj s tem, da upoštevate te tehnike?

Optimalni razpon prostornine

Običajni razpon delovanja za večino pipet je 10–100 % nazivne prostornine. Čeprav velja to za razpon delovanja, se bodo z zmanjšanjem nastavitev prostornine specifikacije učinkovitosti spremenile. Specifikacije natančnosti za pipeto s 100 mikrolitri so +/- 0,8 % od 50–100 % nazivne prostornine. Toda če bi pipetirali 10 μl (ali 10 % nazivne prostornine), bi bila specifikacija nenatančnosti več kot 3-krat večja oz. 2,5–3 %. Optimalna prostornina za najvišjo raven natančnosti je zato običajno 35–100 % nazivne prostornine. Če je mogoče, prostornine pipete ne nastavljajte na vrednosti, manjše od 10 % največje zmogljivosti. Za manjše količine raje uporabite pipeto z manjšo prostornino.

Globina potopitve konice

Posebej pomembno za pipete z mikroprostornino: s pravilno globino potopitve konice lahko izboljšate natančnost za največ 5 %. Konico potopite približno 1 do 2 mm, če pipetirate mikrokoličine, in 6 do 10 mm, če pipetirate večje količine. Če konico potopite prekomerno, se plin v konici stisne, zaradi česar lahko odvzamete preveč tekočine. Tekočina, ki ostane na konici, lahko prav tako popači rezultate. Če konice ne potopimo dovolj, lahko v pipeto vsesamo zrak, kar privede do nastanka zračnih mehurčkov v pipeti in netočnih količin. Pri obeh pride do nenatančne količine.

  • Aspiracija pod ustreznim kotom
  • Ohranjanje doslednosti
  • Dosledno odmerjanje vzorca
  • Predizpiranje konic
  • Preprečevanje temperaturnih nihanj
  • Dosledne nastavitve mikrometra
Thank you for visiting www.mt.com. We have tried to optimize your experience while on the site, but we noticed that you are using an older version of a web browser. We would like to let you know that some features on the site may not be available or may not work as nicely as they would on a newer browser version. If you would like to take full advantage of the site, please update your web browser to help improve your experience while browsing www.mt.com.