분광광도계용 큐벳

샘플 측정에 사용되는 큐벳은 분광광도계의 광학 시스템 중 일부입니다. 따라서 큐벳의 배치, 기하학 및 상태가 흡광도 측정의 정확도 및 정밀도에 영향을 줄 수 있으며 이를 주의 깊게 제어해야 합니다.

큐벳의 광학 경로 길이란 큐벳의 내부 벽면을 통과하는 빛의 거리입니다.

표준 분광광도계 큐벳에서 빛의 경로 또는 경로 길이는 앞면 창에서부터 뒷면 창까지의 내부 거리가 됩니다. 표준 큐벳 광학 경로 길이는 10mm입니다.

큐벳의 재질은 파장에 따라 자체적인 흡광도를 야기할 수 있습니다. 석영 큐벳은 전체 측정 범위(UV/Vis)에 걸쳐 완전히 반투명합니다. 일회용 플라스틱 큐벳은 스펙트럼의 가시 범위 내에서만 반투명한 경우가 많습니다. 따라서 큐벳 선택은 주로 Application에 달려 있습니다.

Beer-Lambert 법칙에 따르면 흡광도는 큐벳의 경로 길이 및 샘플 농도에 정비례합니다. 이상적인 경로 길이(예: 1mm~5cm)를 선택하면 희석할 필요가 없습니다. 0.2A~1.5A 범위에 있는 흡광도에서 가장 정확한 결과를 얻을 수 있습니다. 농도가 매우 높은 샘플에는 경로 길이가 매우 짧은(1mm 또는 0.1mm) 마이크로 부피 기기가 적합합니다.

최상의 측정 관행을 위해서는, 측정 간에 큐벳을 큐벳 홀더에 계속 두어야 합니다. 큐벳을 분리하는 경우 큐벳 홀더에 항상 같은 방향으로 큐벳을 배치하도록(즉, 라벨이 광원을 향하도록) 주의를 기울여야 합니다. 이렇게 하면 광학 효과가 참조 및 샘플 측정에 대해 모두 동일하도록 보장할 수 있습니다.

최상의 결과를 위해서는, 참조 및 샘플 측정에 동일한 유형의 큐벳을 사용해야 합니다.

큐벳에는 관심 스펙트럼 구간에서 투명해지는 재질로 제작된 창이 있어야 합니다.

UV 범위에서 최상의 측정 결과를 얻으려면 석영 유리 또는 SUPRASIL^® 유리와 같은 UV 투과성 유리를 사용해야 합니다.

SUPRASIL^®은 Heraeus(석영 유리)의 상표입니다

가시 범위(>400nm)의 경우 광학 유리 또는 일회용 PMMA(폴리메칠메타크릴레이트) 또는 PS(폴리스티렌) 큐벳이 흔히 사용됩니다.

폴리메틸메타크릴레이트(PMMA)로 제작되는 일회용 큐벳은 UV 범위에서 흡수하고 차단 필터로서 작용하여 UV 범위에서 측정을 부정확하게 하므로, 가시 범위 내에서 측정하는 경우에만 사용을 고려해야 합니다.

사용하기 전에 샘플을 혼합해야 하는데, 핵산 또는 단백질을 재현탁하는 경우에는 특히 샘플을 잘 혼합해 주어야 합니다. 광학 표면에 긁힘이 발생할 수 있으므로, 유리 피펫으로 큐벳을 충진하지 마십시오. 일회용 플라스틱 팁이 있는 피펫이 이상적입니다. 거품 형성을 방지하기 위해 용액이 유리 벽면을 타고 큐벳 안으로 흘러들어가도록 하십시오. 큐벳 용량의 80%를 초과하여 충진하지 마십시오.

빛이 통과하는 큐벳 창은 사용하기 전마다 세척해야 합니다. 철저한 내부 및 외부 세척을 위해서는 60% 이소프로필/탈이온수 용액을 사용하여 광학 세척용 천 또는 보풀이 없는 티슈(표면의 보풀로 인한 긁힘을 방지하기 위해)로 닦아냅니다.

흡광도가 높아지는 것을 방지하기 위해 큐벳은 사용 전후에 철저히 세척해야 합니다. 세척이 완료된 후 창을 건드리지 않도록 추가적인 주의를 기울여야 합니다. 용매 증발로 인한 큐벳 손상을 방지하기 위해 샘플은 측정 직후 제거되어야 합니다.

지문이나 그리스와 같은 잔여물이 큐벳 창에 침전되어 있는 경우 추가적인 흡수 물질 역할을 하기 때문에 흡광도가 더 높게 측정됩니다. 사용 전후에 철저히 세척하면 이를 방지할 수 있습니다. 세척이 완료된 후 창을 건드리지 않도록 추가적인 주의를 기울여야 합니다.

큐벳의 반투명한 면으로만 잡고 큐벳에 지문을 남기지 않도록 주의합니다.

광선에 큐벳을 투명한 면 쪽으로 배치하고 기준 시료(blank) 및 샘플의 큐벳 라벨이 같은 방향을 향하도록 배치합니다. 큐벳이 기울어지지 않았으며 큐벳 홀더에 완전히 고정되어 있는지 확인합니다. 큐벳이 더 이상 움직여서는 안 됩니다.

친수성 샘플의 경우 용매 증발 또는 주변 공기로부터의 수분 흡수를 제한하기 위해 일반적으로 큐벳과 함께 제공되는 뚜껑을 사용합니다.

플로우 셀은 일련의 측정을 수행한 후 항상 완전히 비워야 합니다. 광학 창의 석회화를 방지하기 위해 플로우 셀의 내부는 아세톤으로 헹구어야 하며 그 후에는 잔여 아세톤 제거를 위해 완전히 건조시켜야 합니다.

단기 보관의 경우 특수 큐벳 홀더를 사용할 수 있습니다. 장기 보관의 경우 긁힘 및 유리 표면에 먼지가 쌓이는 것을 방지하기 위해 배송된 상자를 사용해야 합니다.

최상의 측정 관행을 위해서는, 측정 간에 큐벳을 큐벳 홀더에 계속 두어야 합니다. 큐벳을 분리하는 경우 큐벳 홀더에 항상 같은 방향으로 큐벳을 배치하도록(즉, 라벨이 광원을 향하도록) 주의를 기울여야 합니다. 이렇게 하면 광학 효과가 참조 및 샘플 측정에 대해 모두 동일하도록 보장할 수 있습니다. 메틀러 토레도 Excellence 큐벳의 우수한 제조 허용 오차 덕분에 180도 흡광도 차이는 매우 미세하므로 이러한 선호 방향을 반드시 맞출 필요는 없습니다.

지문이나 그리스와 같은 잔여물이 큐벳 창에 침전되어 있는 경우 추가적인 흡수 물질 역할을 하기 때문에 흡광도가 더 높게 측정됩니다. 사용 전후에 철저히 세척하면 이를 방지할 수 있습니다. 세척이 완료된 후 창을 건드리지 않도록 추가적인 주의를 기울여야 합니다.

큐벳은 수용성 샘플을 담기 위한 작은 직사각형 튜브입니다. 투명한 재질로 만들어진 직면이 있습니다. 셀 또는 모세관이라고도 부릅니다. 큐벳은 특정 파장의 흡광도를 측정하기 위한 분광 광도 측정에서 사용됩니다.

큐벳의 광택이 나는 부분에 긁힘이나 작은 금이 보이는 경우 더 이상 측정에 사용해서는 안 됩니다. 결과의 질이 떨어지거나 큐벳이 분광광도계 안에서 깨질 수 있기 때문입니다. 큐벳을 수리하거나 붙일 때 사용되는 모든 수지 물질은 측정 품질을 떨어뜨릴 수 있습니다. 따라서 깨진 큐벳을 수리하는 것은 권장되지 않습니다.

Black 큐벳은 알 수 없는 용액을 측정하기 전 분광광도계를 교정하는 데 사용됩니다. 분광기의 판독값은 blank 큐벳과 관련이 있습니다. 먼지, 온도, 습도와 같이 판독값에 영향을 미칠 수 있는 환경 요인이 있습니다. 모든 외부 요인을 없애기 위해, blank 큐벳의 분광기 판독값은 샘플 용액 큐벳의 판독값으로부터 제거됩니다.

메틀러 토레도 광학 유리: 320~2500nm 파장, >80% 투과율, 재사용 가능, 가시 스펙트럼

메틀러 토레도 석영 유리: 200~2500nm 파장, >82% 투과율, 재사용 가능, UV-가시 스펙트럼

가장 일반적인 용량은 표준 10mm 매크로 큐벳의 3.5ml(3500µL)입니다. 큐벳 부피는 쉽게 계산할 수 있습니다. 내부 길이 x 내부 너비 x 내부 높이 x 80% = 큐벳 부피입니다.

Matched pair cuvettes이란 동일한 재질로 되어 있으며 동일한 광학 경로 길이를 가진 두 개의 큐벳을 말합니다. 지정된 제조 허용 오차로 인해, 일치된 쌍을 활용하여 비슷한 측정값을 보장합니다. 메틀러 토레도 Excellence 큐벳은 단 ±0.01mm의 제조업체 허용 오차를 보장하므로 일치가 필요하지 않습니다.