UV/VIS spectrofotometer

UV/VIS spectroscopie is een eenvoudige en veelgebruikte techniek op basis van de absorptie van licht in een monster. De hoeveelheid licht en de golflengte die door het monster worden geabsorbeerd, verschaffen waardevolle informatie, zoals de concentratie of de zuiverheid van een monster. Raadpleeg het cafeïne UV spectrum hieronder. Aangezien elke stof op een unieke wijze licht absorbeert, bestaat er bovendien een specifieke relatie tussen de stof en het bijbehorende  UV/VIS spectrum. Spectrofotometrie wordt zodoende gebruikt om een stof te identificeren.

Een UV/VIS spectrofotometer meet de intensiteit van het licht dat door een monsteroplossing in een kuvet passeert en vergelijkt deze waarde met de intensiteit van het licht voordat het door het monster passeerde. De hoofdcomponenten van een UV/VIS spectrofotometer zijn een lichtbron, een monsterhouder, een apparaat dat de verschillende golflengtes van het licht scheidt en een geschikte detector, zoals een fotodiode-detector.

Er zijn vijf redenen waarom UV/VIS spectra worden gemeten:

• UV/VIS spectra identificeren de componenten van een monsteroplossing. Het zijn vooral de piekposities, en tot op zekere hoogte ook het spectrumprofiel, die de specifieke stoffen identificeren.
  
• De absorptiepieken kunnen worden gebruikt om het onderzochte monster te kwantificeren. De monsterconcentratie kan bijvoorbeeld worden berekend op basis van de absorptiewaarde van de piek.
  
• Vanwege de relatie tussen de absorptie en de monsterconcentratie wordt een UV/VIS spectrofotometer gebruikt voor kwantitatieve analysetechnieken in marktsegmenten, zoals voor de analyse van biotechnologische en farmaceutische producten, cosmetica, voedingsmiddelen en dranken, chemische stoffen en water.
  
• Het spectrum kan specifieke fysieke eigenschappen van de monstermoleculen identificeren en maakt het zodoende mogelijk om de extinctiecoëfficiënt van het monster te berekenen, het smeltpunt van eiwitten en nucleïnezuren te berekenen door de UV/VIS spectra bij verschillende temperaturen te meten, en de snelheid van een reactie te bepalen door de absorptiespectra als functie van tijd te monitoren.
  
• De positie en het profiel van de pieken in het spectrum kunnen informatie leveren over de microscopische omgeving van de monstermoleculen.

• Het meten van een vaste golflengte is de eenvoudigste toepassing van een spectrofotometer. Dit is een enkele of meervoudige golflengtemeting en het resultaat kan worden weergegeven als de absorptie- of transmissiewaarde.
  
• De kwantificering of concentratiebepaling van een stof door een UV/VIS spectrofotometer is gebaseerd op de Wet van Lambert-Beer, die stelt dat de absorptie van een oplossing rechtevenredig is met de concentratie van de absorberende stof in de oplossing en de weglengte van de kuvet. Zo wordt een UV/VIS spectrofotometer gebruikt om de concentratie van een monster te bepalen.
  
• Spectrale scanmetingen bepalen de absorptie of transmissie van een monster in een bepaald golflengtebereik of in het volledige spectrumbereik, doorgaans van 190 tot 1100 nm. De meest toegepaste daaropvolgende analyse is het opsporen van pieken en dalen.
  
• Een UV/VIS spectrofotometer wordt vaak gebruikt om de verandering van de concentratie van het reagens of van het product te controleren door het meten van de absorptie bij een specifieke golflengte gedurende een bepaalde periode. Deze kinetische methoden worden vaak gebruikt om onderzoek te doen naar enzymreactiesnelheden of om de concentratie van bepaalde koolhydraten te bepalen, zoals glucose, fructose en lactose.

• Een scan-spectrofotometer meet elke golflengte afzonderlijk, wat aanzienlijk langer duurt. Een array-spectrofotometer meet het volledige spectrum in een korte tijd, omdat alle golflengtes door de array-detector worden gemeten.
  
• Een scan-spectrofotometer scant het spectrum met mechanisch roterende onderdelen. Dit kan fouten bij de reproduceerbaarheid van de golflengte veroorzaken. Een scannend spectroscopie instrument moet daarom regelmatig opnieuw gekalibreerd worden om de nauwkeurigheid van de golflengte te garanderen. Een array-spectrofotometer heeft geen bewegende optische onderdelen, wat betekent dat er ook na verloop van tijd geen afwijkende prestaties voorkomen als gevolg van mechanische onnauwkeurigheden.
  
• Een array-spectrofotometer heeft geen gesloten monsterbehuizing nodig, omdat de meter dankzij het optische ontwerp ongevoelig is voor omgevingslicht.

Ons spectrofotometrie-portfolio is speciaal ontworpen voor diverse takken van industrie:

• De UV5Bio en UV5Nano spectrofotometers worden gewoonlijk gebruikt in de farmaceutische industrie, voor life sciences, biotech en in het onderwijs.
  
• De UV7 en UV5 spectrofotometers worden gewoonlijk gebruikt in de farmaceutische industrie, voor voedingsmiddelen en dranken, chemische stoffen, cosmetica, petrochemicaliën en in het onderwijs.

Een micro-volume spectrofotometer voert metingen uit met kleine monsterhoeveelheden (van slechts 1 microliter, bijvoorbeeld). Sterk geconcentreerde monsters kunnen ook worden gemeten zonder verdere verdunning, dankzij de LockPath-technologie van de UV5Nano van METTLER TOLEDO, waarvan de weglengte op 0,1 of 1 mm kan worden ingesteld.

• De UV5Nano en UV5Bio spectrofotometers van METTLER TOLEDO zijn geschikt voor allerlei life science toepassingen, zoals:
  
  • De kwalitatieve analyse van DNA, RNA en eiwitten
    
  • De kwantitatieve analyse van DNA, RNA en eiwitten
    
  • BCA, Bradford, Lowry en andere colorimetrische eiwitonderzoeken
    
  • Vooraf geconfigureerde kleurstoffen en optioneel de toevoeging van aangepaste kleurstoffen
    
  • Oligo-calculator voor de bepaling van de concentratie van DNA- en RNA-oligo’s
    
  • OD600 voor levende cellen
    
• Bovendien bieden de UV5Bio en de UV7 spectrofotometers kinetische methoden voor enzymkinetiek
  
• Download de Life Science Toolbox voor meer informatie over life science toepassingen met spectrofotometers van METTLER TOLEDO.

METTLER TOLEDO biedt een oplossing voor prestatieverificatie in de vorm van een CertiRef™. Dit is de meest efficiënte manier om te controleren of uw spectrofotometer compliant is met de farmacopee. Dit accessoire voert automatisch tests uit op de nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid van de golflengte, op de fotometrische nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid, de resolutie, het strooilicht, de fotometrische ruis en drift, en de platheid van de basislijn.

De LabX software van METTLER TOLEDO biedt gebruikers meer flexibiliteit bij het aanmaken van workflows die precies aan de wensen van de gebruiker zijn aangepast. Berekenings- en transcriptiefouten behoren tot het verleden. Ook wordt de data-integriteit gegarandeerd doordat alle informatie in een beveiligde database wordt opgeslagen, inclusief alle prestatieverificaties en services. Met beveiligingsfuncties zoals elektronische handtekeningen en gebruikersbeheer wordt aan 21 CFR Part 11 van de FDA voldaan.