UV Vis Kalibrasyonu

UV/VIS Excellence spektrofotometreleri, ABD Farmakopesi (USP) 43 - NF 38 ve Avrupa Farmakopesinde (Ph. Eur.) (10. Sayı) tanımlanan prosedürlere göre test edilir. Testler, aşağıdaki parametreleri kapsar:

• Dalga boyu doğruluğu
• Fotometrik doğruluk
• Fotometrik tekrarlanabilirlik
• Fotometrik doğrusallık*
• Dağınık ışık
• Çözünürlük

Ayrıca, ABD ve Avrupa Farmakopelerinin ikisinin de zorunlu kılmadığı parametreler de test edilir:

• Dalga boyu tekrarlanabilirliği
• Fotometrik parazit
• Taban düzlüğü
• Fotometrik sapma

Testlerin kapsamlı olması, spektrofotometre performansının tüm yönlerinin değerlendirilmesini sağlar. UV7 Excellence spektrofotometrelerimiz, aşağıda daha ayrıntılı olarak açıklanan mutlak (değişmez) gereksinimlere uygundur.

*Fotometrik doğrusallıktan artık 43. baskıda açıkça bahsedilmiyor. Fotometrik doğruluk, amaçlanan çalışma aralığı üzerinde test edilmelidir. Bu nedenle METTLER TOLEDO, fotometrik doğrusallık testini önermeye devam etmektedir.

Dalga boyu doğruluğu, cihazın dalga boylarını doğru şekilde üretebilme özelliğini değerlendirir. Dalga boyu doğruluğunun ölçümü, dalga boyu ekseninde sapma veya kaymalar olup olmadığını belirlemeye izin verir.

Dalga boyu doğruluğunun belirlenmesi için uygun referans materyallerinin dar ve belirgin pik noktaları göstermesi gerekir. Bu amaç için genellikle bir holmiyum oksit çözeltisi kullanılır.

ABD ve Avrupa Farmakopelerinde, kullanılan referans materyaline ve dalga boyu aralıklarına bağlı olarak farklı kabul kriterler belirtilir. Sıvı referans materyalleri için aşağıdaki kriterler geçerlidir:

ABD Farmakopesi: 400 nm'nin altında ±1 nm; 400 nm'nin üstünde ±2 nm
Avrupa Farmakopesi: 400 nm'nin altında ±1 nm; 400 nm'nin altında ±3 nm

ABD ve Avrupa Farmakopelerine göre, dizi tabanlı spektrofotometreler için dalga boyu hassasiyeti veya tekrarlanabilirlik gerekli değildir. Hareketli parçalar olmadığından, dizi tabanlı cihazlarda ölçümler arasında sapma olmaz.

Fotometrik doğruluk, cihazın absorbansı doğru bir şekilde ölçme ve absorbans değerlerini gerçek değere olabildiğince yakın bir şekilde verme özelliğine ilişkin bir ölçüdür.

Fotometrik doğruluk, bilinen konsantrasyon ve absorbans değerlerindeki katı veya sıvı filtrelerin ölçülmesi ve ölçülen absorbansın referans absorbans değerleri ile karşılaştırılmasıyla belirlenebilir.

Ultraviyole aralığı için 60 mg/L'lik bir potasyum dikromat (PDC) çözeltisi kullanılırken, 0,5 A nötr yoğunluklu (ND) bir filtre de görünen aralığı kapsar. Kabul kriterleri her iki farmakope için de aynıdır ve referans materyalinin absorbans seviyesine bağlıdır.

PDC: 1,0 A'nın altında ±0,010 A; 1,0 A'nın üstünde ±%1,0 (0.010*A)
ND: 1,0 A'nın altında ±0,008 A; 1,0 A'nın üstünde ±%0,8 (0.008*A)

ABD ve Avrupa Farmakopelerine göre, dizi tabanlı spektrofotometreler için dalga boyu hassasiyeti veya tekrarlanabilirlik gerekli değildir. Hareketli parçalar olmadığından, dizi tabanlı cihazlarda ölçümler arasında sapma olmaz.

ABD Farmakopesi tarafından fotometrik hassasiyet olarak da adlandırılan fotometrik tekrarlanabilirlik, bir spektrofotometrenin bir defadan fazla ölçümde absorbans değerlerini güvenilir ve tekrarlanabilir bir şekilde verebilme özelliğini tanımlar.

Fotometrik doğruluğu belirlemede kullanılan referans materyallerinin aynısı kullanılır. Filtreler altı kez ölçülür ve tekrarlanabilirliği değerlendirmek için tüm ölçümlerdeki standart sapma hesaplanır.

Kullanılan referans materyaline veya dalga boyu aralığına bakılmaksızın, 1 A'nın altında 5 mA veya 1 A'nın üstünde %0,5'i aşmayacak standart sapma.

Not: Avrupa Farmakopesi, fotometrik tekrarlanabilirlik gerektirmez.

Fotometrik doğrusallık, artan konsantrasyonun bir fonksiyonu olarak, ölçülen değerlerin (örneğin, absorbans) doğrusallığına ilişkin bir ölçüdür. Bu, özellikle nicel uygulamalar için önemlidir.

Fotometrik doğrusallık, fotometrik doğruluğu belirlemek için kullanılanlarla aynı olan prosedürler ve filtrelerle belirlenebilir, ancak üç konsantrasyonda 0 A ile 2 A aralığını kapsayan farklı filtreler kullanılır.

ABD ve Avrupa Farmakopelerinde, fotometrik doğrusallık için farklı kabul kriterleri mevcuttur:

Avrupa Farmakopesi: Korelasyon katsayısı R2, 0,999'u geçmelidir.
ABD Farmakopesi: Tüm konsantrasyonda/filtrelerde ölçülen değerler fotometrik doğruluk kriterlerini karşılamalıdır.

Dağınık ışık, analizin bir parçası olmayan dedektöre ulaşan ışık olarak tanımlanır. Bu, karşılık gelen dalga boyunda bir sapmaya neden olur, ancak bu durum ölçülen numuneden kaynaklanmaz. Bu nedenle, numunenin absorbansı dağınık ışık tarafından değiştirilir ve numune sonuçlarında sistematik bir hata olur.

Dağınık ışık, hem spesifik dalga boyu metodu (SWM) hem de çözelti filtre oranı metodu (SFRM) kullanılarak bir kesme filtresinin (sulu bir potasyum klorür çözeltisi) ölçülmesiyle belirlenir.

KCl (Potasyum Klorür) için ABD ve Avrupa Farmakopeleri tarafından belirtilen kabul kriterleri aşağıdaki gibidir:

SWM: Maks. A ≥ 2,0 A
SFRM: Maks. A ≥ 0,7 A

Çözünürlük, bir UV Vis spektrofotometresinin çözme gücünü ve bir spektrumdaki bitişik yapıları çözme özelliğini tanımlar.

Çözünürlük, n-Heksan içinde bir Toluen çözeltisi ölçülerek belirlenir. Çözünürlüğün değerlendirilmesi için dik ve iyi çözülmüş bir pik noktasının minimum ve maksimum absorbans değeri kullanılır.

ABD Farmakopesi 267 ve 269 nm'lik ilgili dalga boylarında minimum ve maksimum absorbans arasındaki oranın yeterli çözünürlüğü sağlamak için 1,3'ü aşması gerektiğini belirtirken; Avrupa Farmakopesi kabul kriterleri farklı bir monografta belirtilmiştir.

UV Vis tarama spektrofotometrelerinin aksine, dizi tabanlı cihazlarda mekanik olarak cihazın spektral bant genişliğini (SBW) tanımlayan fiziksel bir yarık yoktur. Dizi tabanlı bir cihazın eşdeğer SBW değeri, cihazın çözünürlüğünden hesaplanabilir.
Örneğin, UV7 Excellence spektrofotometresinin çözünürlüğü SBW ≤ 1,0 nm'ye karşılık gelen ≥ 1,9'dur.

Yukarıda tanımlanan testler manuel veya otomatik olarak yapılabilir, ancak manuel metotlarda doğal olarak doğruluk seviyesinin azalması riski vardır. Manuel iş akışları zaman alır ve hataya meyillidir. Otomatik performans doğrulamasının avantajları aşağıda sıralanmıştır:

• İzlenebilir belgeler ve sonuç doğrulaması sayesinde daha hızlı sonuçlar.
• İş akışı proses ve veri aktarma hataları önlenebilir, testlerin tekrarlanması gerekmez.
• Veri bütünlüğü standartlarıyla uyumluluk. Bu, İlaç ve Gıda Dairesi (FDA) ile uyumlu veri yönetimi açısından önemli bir avantajdır.
• Verimlilik ve güvenlikteki artış sayesinde hızlı yatırım getirisi.

Mevzuata uygunluk, tüm ilaç üreticileri ve bunların tedarikçileri için temel bir hedeftir. GMP'ye göre; üretim süreçlerinin ve analitik metotların doğrulanması gerekirken, üretim ve kalite kontrolünde kullanılan cihazlar için de kalifikasyon gerekir.

METTLER TOLEDO, bu uyumluluk gereksinimini karşılamada müşterilere destek olmak üzere Excellence UV/VIS Spektrofotometreleri için EQPac'i sunmaktadır. EQPac, günümüzün zorlu mevzuat dünyasında uyumlulukla ilgili endişeleri gidermek için özel olarak tasarlanmış bir hizmet çözümüdür. Mevzuata uygunluğu ve güvenilir çalışmayı sağlamak için yerinde, eksiksiz şekilde belgelenmiş, profesyonel bir kurulum ve kalifikasyon hizmeti sunar.

Cihaz kalifikasyonu hizmetimiz ile UV/VIS spektrofotometre kalibrasyonu hizmetimiz hakkında daha fazla bilgi edinin.