UV/Vis spektroskopija služi več znanstvenim in industrijskim namenom, vključno z:
Te zmogljivosti podpirajo aplikacije pri nadzoru kakovosti farmacevtskih izdelkov in živilskih izdelkov ter raziskave na področjih, kot so kemija, biologija in znanost o materialih. To pomaga pri preučevanju lastnosti materiala in razumevanju, kako svetloba medsebojno deluje z različnimi snovmi.
Ko UV/Vis svetloba medsebojno deluje z vzorcem, se lahko absorbira ali prenaša. Absorbanca meri količino svetlobe, ki jo vzorec absorbira pri določeni valovni dolžini, in kaže, koliko svetlobe se zadrži. Prehodnost (T = I/I₀) predstavlja delež svetlobe, ki prehaja skozi vzorec. Razumevanje teh lastnosti je temeljnega pomena za analizo interakcije snovi s svetlobo.
Absorbanca (A) je brezrazsežna količina, ki se zaradi jasnosti običajno navaja v enotah absorbance (AU). Matematično je povezan s prepustnostjo skozi enačbo: A = -log₁₀(T).
Rezultati UV/Vis spektroskopije so prikazani v UV/Vis spektru, grafu, ki običajno prikazuje absorpcijo ali prepustnost glede na valovno dolžino (190-780 nm). Ta spekter razkriva, katere valovne dolžine so bile absorbirane in v kolikšni meri.
Vrhovi v tem spektru označujejo valovne dolžine največje absorpcije (λmax), ki so specifične za strukturo molekule in služijo kot edinstven "prstni odtis" za analizirano snov. Intenzivnost teh vrhov (ali intenzivnost absorpcije) je neposredno povezana s koncentracijo absorpcijskih vrst, kot je opisano v Beer-Lambertovem zakonu.
Ta osnovna tehnika vključuje prehod UV/Vis svetlobe skozi vzorec in merjenje prehodne svetlobe. Značilnosti absorpcije vzorca lahko določimo v območju UV/Vis s primerjavo začetne intenzivnosti svetlobe z intenzivnostjo prehodne svetlobe.
Beer-Lambertov zakon (A = εdc) je bistvenega pomena za kvantitativno analizo. Navaja, da je absorbanca neposredno sorazmerna s koncentracijo (c) absorpcijske snovi in dolžino poti (d) svetlobnega žarka skozi vzorec. Molarni absorpcijski koeficient (ε) je konstanta, značilna za snov. Ta zakon omogoča natančno določanje koncentracij analita.
Umeritvena krivulja je grafično orodje, ki se uporablja za ugotavljanje koncentracije snovi v vzorcu. Tukaj je pregled postopka po korakih:
Za določanje koncentracije neznanega vzorca:
Kalibracijske krivulje so bistvenega pomena za pretvorbo meritev absorbance v natančne vrednosti koncentracije, s čimer se olajša natančna kvantitativna analiza.
UV/Vis spektroskopija lahko zagotovi tudi vpogled v elektronske lastnosti materialov, kot so polprevodniki. Z analizo absorpcijskega roba v spektru lahko ocenimo energijo pasovne vrzeli z uporabo tehnik, kot je Taucov graf. Ta analiza pomaga opredeliti energijo, potrebno za vzbujanje elektronov v materialu.
Vas zanima notranje delovanje UV/Vis spektrofotometra? V tem videoposnetku je opisano, kako ti instrumenti delujejo, in je predstavljena tehnologija FastTrack podjetja METTLER TOLEDO za hitre, natančne in zanesljive rezultate.
Vzorec raztopite v ustreznem vehiklu in ga položite v posebno prozorno posodo (kiveto). Pripravite tudi referenčno kiveto (imenovano slepa) s čistim topilom.
Naprava sveti žarek UV in vidne svetlobe skozi vzorec in referenco.
Del stroja (monokromator) deluje kot filter, ki izbere eno določeno barvo (valovno dolžino) svetlobe naenkrat, da preide skozi vzorec. Nato to ponovi za vse valovne dolžine v območju UV/Vis.
Detektor meri, koliko svetlobe prehaja skozi vzorec in koliko skozi referenco na vsaki valovni dolžini.
Naprava primerja količino svetlobe, ki je šla skozi vzorec, s količino, ki je šla skozi referenco. To nam pove, koliko svetlobe je vzorec absorbiral na vsaki valovni dolžini.
Naprava nato ustvari graf (UV/Vis spekter), ki prikazuje, koliko svetlobe je vzorec absorbiral pri vsaki različni valovni dolžini. To pomaga identificirati in količinsko opredeliti snovi v vzorcu
Tipičen UV/Vis spektrofotometer je sestavljen iz več ključnih komponent:
Detektor je ključna komponenta, ki je odgovorna za pretvorbo svetlobne energije, ki je šla skozi vzorec in referenco, v merljiv električni signal. Intenzivnost prehodne svetlobe je obratno sorazmerna z absorbanco vzorca pri določeni valovni dolžini. Detektor meri te intenzivnosti za izračun vrednosti absorbance za UV/Vis spekter, njegova občutljivost in razpon valovnih dolžin pa vplivata na zmogljivost in uporabnost spektrofotometra .
Ti instrumenti merijo prepustnost svetlobe eno valovno dolžino naenkrat. Difrakcijska rešetka loči svetlobo na valovne dolžine, en sam detektor pa meri svetlobo, ki prehaja skozi vzorec pri vsaki izbrani valovni dolžini. Ta postopek se ponovi v želenem območju, da se zgradi celoten spekter.
Ti instrumenti hkrati osvetljujejo vzorec s celotnim spektrom UV/Vis svetlobe. Vzorec absorbira različne valovne dolžine hkrati, prehodna svetloba pa se difraktira z rešetko na niz več detektorjev (kot so fotodiode). Vsak detektor v nizu hkrati meri intenzivnost določenega ozkega pasu valovnih dolžin. Ta zasnova omogoča veliko hitrejše pridobivanje celotnega UV/Vis spektra v primerjavi z instrumenti za skeniranje.
Kiveta je ključni sestavni del spektrofotometra, ki drži tekoči vzorec v svetlobni poti. Izdelan mora biti iz materiala, ki je prozoren za uporabljene valovne dolžine, kar zagotavlja natančne meritve. Pomembna je tudi dolžina poti ali razdalja, ki jo svetloba potuje skozi vzorec, saj imajo standardne kivete običajno dolžino poti 10 mm, čeprav se lahko giblje od 1 mm do 50 mm , odvisno od uporabe.
To so najpogostejše vrste in so primerne za večino vzorcev. Običajno imajo zunanje dimenzije 12,5 mm x 12,5 mm in višino 45 mm, z notranjimi dimenzijami 10 mm x 10 mm, kar ima za posledico standardno dolžino poti 10 mm.
Te kivete imajo dolžino poti večjo od 10 mm in se uporabljajo, kadar je vzorec preveč razredčen, kar zahteva daljšo dolžino poti, da se poveča signal absorbance in izboljša občutljivost. Uporabne so tudi, kadar lahko vzorec med merjenjem izhlapi ali se kemično spremeni, saj daljša pot omogoča večjo interakcijo s svetlobnim žarkom.
Kivete z dolžino poti manj kot 10 mm se uporabljajo, kadar je absorbanca vzorca zelo visoka in je redčenje težko ali nezaželeno. Krajša dolžina poti pomaga ohranjati absorbanco v merljivem (linearnem) območju instrumenta.
Te kivete so posebej zasnovane za analizo zelo majhnih volumnov vzorcev. Na primer, nekatere mikro kivete imajo optično pot dolžine 10 milimetrov in so izdelane iz taljenega kremenovega stekla. Primerni so za meritve v ultravijoličnem in vidnem območju, pokrivajo valovne dolžine med 200 nm in 2500 nm in lahko obdelujejo volumne vzorcev okoli 700 μL.
Primerni so za meritve v ultravijoličnem in vidnem območju, pokrivajo valovne dolžine med 170 nm in 2700 nm in zahtevajo majhen volumen vzorca 440 μL. Te celice so zanesljive in za večkratno uporabo.
Za natančne in zanesljive meritve UV/Vis, zlasti pri kliničnem, farmacevtskem in industrijskem nadzoru kakovosti, mora spektrofotometer delovati v določenih mejah učinkovitosti. Zato je redno preverjanje učinkovitosti bistvenega pomena, vsi rezultati kalibracije pa morajo biti natančno dokumentirani in shranjeni.
Kalibracija vključuje preverjanje in prilagajanje točnosti instrumenta na naslednjih področjih. Ti pregledi se izvajajo redno in se izvedejo prilagoditve, če odčitki presegajo sprejemljive meje, zato je nujno voditi evidenco o teh kalibracijah.
Zagotavljanje, da je izbrana barva svetlobe pravilna z uporabo standardnih referenčnih materialov.
Potrditev, da instrument natančno meri količino svetlobe, ki se absorbira ali prenaša skozi standardne raztopine.
Preverjanje neželene svetlobe, ki bi lahko povzročila napake pri merjenju.
Preverjanje sposobnosti instrumenta za razlikovanje med tesno razporejenimi barvami svetlobe.
Zagotavljanje stabilnega in natančnega ničelnega odčitka.
Preskus zmogljivosti | Certificirani referenčni material (CRM) | Preskusni parameter instrumenta | Merila sprejemljivosti | |
USP 42 NF 37 | Doktorat Eur. 10 | |||
Natančnost valovne dolžine in Ponovljivosti | Ho(ClO4)3: 4 % Ho2O3 in 10 % v/v HClO4 Prazno: Zrak | 14 valovnih dolžin (240 nm – 650 nm) Xe: 2 valovni dolžini (260,6, 528,6 nm) | UV (200 – 400 nm): ± 1 nm Vis (400 – 780 nm): ± 2 nm (S.D.) < 0,5 nm | UV (< 400 nm): ± 1 nm Vis (> 400 nm): ± 3 nm |
Fotometrične natančnost in Ponovljivosti** | K2Cr2O7 in 0,001 M HClO4 Prazno: 0,001 M HClO4 | 60 mg/l 0 A – 2 A, 235, 257, 313, 350 nm | Za absorbanco ≤ 1A Natančnost: ± 0,010A Ponovljivosti: S.D. ≤ 0,005 A Za absorpcijo > 1A Natančnost: ± 1% Ponovljivosti: S.D. ≤ 0,5% | Točnost: ± 0,010 A ali ± 1 %, kar je večje |
Nikotinska kislina v 0,1 M HCl Prazno: 0,1 M HCl | 12 mg/l 0,26 A – 1,6 A 213, 261 NM | |||
Fotometrična linearnost | K2Cr2O7 in 0,001 M HClO4 Prazno: 0,001 M HClO4 | 6 – 200 mg/l, do 3,0 A, 235, 257, 313, 350 nm | Vsi izmerjeni filtri izpolnjujejo merila sprejemljivosti fotometrične natančnosti | R2> 0,999 |
Nikotinska kislina v 0,1 M HCl Prazno: 0,1 M HCl | 6 – 60 mg/l, do 2,5 A 213, 261 NM | |||
Razpršena svetloba v skladu s postopkom A (SFRM) | 1,2 % m/v KCl/V2O; Dolžina poti 10 mm Slepo: 1,2 % m/v KCl/V2O, dolžina poti 5 mm | Največ pri 198 nm | ≥ 0,7 A | (NA) |
Razpršena svetloba v skladu s postopkom B (SWM) | 1,2 % m/v KCl/V2O; Dolžina poti 10 mm Prazno: H2O, dolžina poti 10 mm | Največ pri 198 nm | ≥ 2,0 A | ≥ 2,0 A |
Resolucija | 0,02 % v/v toluena v n-heksanu Prazno: n-heksan/ n-heptan (Ph. Eur. 10) | Anajveč,269/Amin,267 | >1.3 | Ravni so navedene v ustrezni monografiji |
** Ni specifikacije fotometrične ponovljivosti (natančnosti) v Eur. S.D. - Standardni odklon | ||||
Zagotavlja varnost potrošnikov z ocenjevanjem kakovosti in sestave hrane, s poudarkom na lastnostih, kot so barva, okus in aroma. Uporablja tudi analitične tehnike za prepoznavanje onesnaževal in pretvorb.
Stroga analiza je ključnega pomena za preverjanje čistosti, koncentracije in identitete zdravil. Spremljanje stabilnosti zdravil je prav tako bistvenega pomena za zagotovitev učinkovitosti skozi čas v različnih okoljskih pogojih.
Ocenjuje varnost in učinkovitost izdelkov z analizo fotostabilnosti UV filtrov, karakterizacijo delcev in merjenjem barvnih indeksov. Prav tako zaznava ponarejanje in količinsko določa barvila in antioksidante, da izpolni pričakovanja potrošnikov.
Karakterizira surovo nafto, izračunava asfaltenske frakcije, oblikuje indekse aromatske vsebnosti, določa vsebnost žvepla in izračunava faktorje topnosti.
Določa kemijske lastnosti, ocenjuje kakovost končnega izdelka, preučuje sestavo polimerov, kvalificira vodo, določa čistost in učinkovitost barvanja, analizira fotokatalitično razgradnjo in ostanke pesticidov.
Določa koncentracijo in čistost nukleinskih kislin in beljakovin, spremlja mikrobne celične kulture, preučuje denaturacijo in kinetiko beljakovin ter analizira biološke vzorce, kot sta krvna plazma in serum.
UV/Vis spektroskopija se uporablja v številnih aplikacijah, ki segajo v različnih panogah, od farmacevtskih izdelkov do spremljanja okolja.
Skupina za podporo trgu podjetja METTLER TOLEDO ponuja knjižnico UV/Vis aplikacij, ki jih je mogoče prenesti. Te preizkušene in preizkušene aplikacije vključujejo opombe in metode, ki jih lahko neposredno uvozite v svoje instrumente.
Ne glede na to, ali delate na področju raziskav in razvoja, nadzora kakovosti ali proizvodnje, je naša spletna stran vir za vse vaše potrebe po UV/Vis spektrofotometriji. Prebrskajte našo zbirko še danes in odkrijte najnovejše standarde in protokole, da zagotovite najvišjo raven natančnosti in natančnosti pri meritvah.
Mikrovolumenski spektrofotometri omogočajo analizo izjemno majhnih volumnov vzorcev, ki so le 1 μL, kar je bistvenega pomena na področjih, kot je biomolekularna analiza. Ti instrumenti uporabljajo tehnologijo optičnih vlaken za usmerjanje svetlobe skozi majhno kapljico vzorca, ki je nameščena na podstavku. Kratka dolžina poti omogoča natančne meritve koncentriranih vzorcev brez potrebe po redčenju.
Natančneje, mikrovolumenska spektrofotometrija natančno meri čistost in koncentracijo nukleinske kisline z oceno absorbance pri 260 nm in izračunom razmerja A260/A280, ki kaže na kontaminacijo beljakovin. Podpira tudi kvantifikacijo beljakovin z absorpcijo pri 280 nm, kar omogoča zanesljiv nadzor kakovosti v molekularno-bioloških delovnih procesih, kot sta PCR in sekvenciranje.
Prednosti | Slabosti |
Enostaven za uporabo in poskusi so hitri. | Omejene podrobne strukturne informacije. |
Relativno nizki stroški za instrumente in analizo. | Lahko primanjkuje specifičnosti v kompleksnih mešanicah zaradi prekrivajočih se pasov. |
Uporablja se za širok spekter analitov in polj. | Občutljivost je lahko nezadostna za nekatere analite. |
Uporabno za kvantitativno analizo z umeritvenimi krivuljami. | Dovzetni za učinke matrike. |
Lahko zagotovi nekaj kvalitativnih informacij (λmax) | Lahko pride do odstopanj od Beer-Lambertovega zakona. |
Pogosto neuničujoče za vzorec. | Zagotavlja omejene informacije o molekularnem okolju. |
Dobra občutljivost za močno absorbirajoče analite. | Vse snovi se ne absorbirajo močno v UV/Vis regiji. |
Omogoča integracijo procesov, kot je npr. v večparametrski analizi. | Deluje samo s prosojnimi, nemotnimi vzorci. |
Nizki stroški na vzorec/analizo | |
Majhen odtis |
Doseganje dobre natančnosti in natančnosti pri meritvah UV/Vis zahteva previdnostne ukrepe, da se izognemo napakam. Tukaj je nekaj tipičnih virov napak, ki jih je treba upoštevati:
Optimizirajte spektrofotometrične meritve UV/Vis tako, da prepoznate morebitne težave. Opravite naš hiter UV/Vis pregled tveganja, da ocenite svoje trenutne prakse in prejmete prilagojena priporočila za izboljšave.
Dosezite zanesljivejše rezultate z GUVP™ tako, da zmanjšate morebitne napake. Več informacij najdete v naši brošuri »Zaupanja vredni rezultati za UV/VIS spektroskopijo«.
Type of Spectroscopy | Type of Radiation | Interactions | Wavelength |
ϒ-ray spectroscopy | Y-rays | Atomic nuclei | < 0.1 nm |
X-ray fluorescence spectroscopy | X-rays | Inner shell electrons | 0.01 – 2.0 nm |
Vacuum UV spectroscopy | Ultraviolet (UV) | Ionization | 2.0 – 200 nm |
UV/Vis spectroscopy | UV/Vis | Valance electrons | 200 – 800 nm |
Infrared & Raman spectroscopy | Infrared | Molecular vibrations | 0.8 – 300 mm |
Microwave spectroscopy | Microwaves | Molecular rotations | 1 mm – 30 cm |
Electron spin resonance spectroscopy | Electron spin | ||
Nuclear magnetic resonance spectroscopy | Radio waves | Nuclear spin | 0.6 – 10 |
The different spectroscopic techniques are mainly differentiated by the radiation they use, the interaction between the energy and the material, and the type of material and applications they are used for. The spectroscopic techniques commonly used for chemical analysis are atomic spectroscopy, ultraviolet and visible spectroscopy (UV Vis spectroscopy), infrared spectroscopy, Raman spectroscopy and nuclear magnetic resonance.
Za branje UV/Vis spektra analizirate graf absorpcije (ali včasih prepustnosti) v primerjavi z valovno dolžino. Ključne točke, na katere se je treba osredotočiti, vključujejo:
Z razlago teh lastnosti lahko identificirate spojine, določite koncentracijo in preučite molekularne lastnosti.
UV/Vis spektroskopija običajno pokriva območje valovnih dolžin od 190 nm do 780 nm.
Natančneje:
Spektrofotometri UV/VIS Excellence podjetja METTLER TOLEDO segajo še dlje v bližnje infrardeče območje in dosežejo 1100 nm.
UV/Vis spektroskopija je pomembna, ker omogoča kvalitativno in kvantitativno analizo snovi z merjenjem njihove absorpcije ultravijolične in vidne svetlobe.
Ta metoda pomaga določiti koncentracijo analitov, preučevati kemijsko kinetiko, oceniti čistost, izvajati objektivne meritve barve in analizirati molekularne strukture. Njegove aplikacije pokrivajo širok spekter področij, vključno s kemijo, biologijo, znanostjo o okolju in znanostjo o materialih, zaradi česar je vsestransko in bistveno orodje za analizo.
UV/Vis spektroskopija meri svetlobo, ki jo absorbira vzorec, da določi njegovo koncentracijo in identificira spojine. Ta proces vključuje odstranjevanje svetlobe.
Nasprotno pa fluorescenčna spektroskopija meri svetlobo, ki jo oddaja vzorec, potem ko absorbira svetlobo, običajno pri daljši valovni dolžini. Ta tehnika se osredotoča na ponovno emisijo svetlobe, kar zagotavlja veliko večjo občutljivost za specifične fluorescentne molekule.
Če želite pripraviti vzorec za UV/Vis spektroskopijo, boste morali skrbno ravnati s kivetami in raztopinami:
Če želite določiti koncentracijo neznane raztopine z uporabo UV/Vis spektroskopije, sledite tem korakom:
Ta metoda se opira na Beer-Lambertov zakon, ki navaja, da je absorpcija A = εbc, kjer je ε molska absorpcija, b dolžina poti in c koncentracija.
Absorpcija UV svetlobe povzroči elektronske prehode iz nižjih energijskih ravni v višje energijske ravni. Absorpcija ultravijoličnega sevanja v organskih molekulah je omejena na določene funkcionalne skupine (kromofore), ki vsebujejo valenčne elektrone z nizko energijo vzbujanja. Molekularni prehodi / interakcije, ki se pojavijo zaradi absorpcije UV žarkov, so:
Ti prehodi potrebujejo nenasičeno skupino v molekuli, da zagotovijo π elektronov.
Prehodi σ (vezave) v σ* (anti-vezni) zahtevajo večjo energijo in jih zato ni mogoče zaznati z uporabo UV Vis spektroskopije.
Razmislite o funkcionalni skupini, ki vsebuje atome z enim ali več osamljenimi pari elektronov, ki ne absorbirajo ultravijoličnega / vidnega sevanja. Ko pa je ta funkcionalna skupina pritrjena na kromofor, spremeni intenzivnost in valovno dolžino absorpcije. Ta pojav se imenuje auksokrom ali skupina za izboljšanje barve.
Prisotnost auksokroma povzroči premik položaja vrha ali signala na daljšo valovno dolžino, ki se imenuje batokromni ali rdeči premik. Funkcionalne skupine, ki prispevajo k batokromnim skupinam, so substituenti, kot so metil, hidroksil, alkoksi, halogen in amino skupine.
Auksokrom, ki povzroči premik položaja vrha ali signala na krajšo valovno dolžino, se imenuje hipsokromni ali modri premik. Pravzaprav se kombinacija kromoforja in auksokroma obnaša kot nov kromofor, ki ima različne maksimume absorpcije (λmax). Na primer, benzen kaže λmax pri 256 nm, medtem ko anilin kaže λmax pri 280 nm. Zato skupina NH2 deluje kot auksokrom in povzroči premik λmax na večjo vrednost.
| Instrumen | Spectral resolution | Equivalent SBW (nm) |
| UV5 | > 1.5 | < 2.0 |
| UV5Bio | > 1.5 | < 2.0 |
| UV5Nano | > 1.7 | < 1.5 |
| UV7 | > 1.9 | ≤ 1.0 |
The table shows the resolution of METTLER TOLEDO's UV/VIS Excellence spectrophotometers, which is measured using toluene in hexane, and the equivalent SBW.
The spectral bandwidth (SBW) of a spectrophotometer is related to the physical slit-width and optical dispersion of the monochromator system. Resolution is the ability of an instrument to separate light into finite, distinct wavelength regions and to distinguish each finite region. Spectral bandwidth is typically used for scanning instruments, whereas resolution is typically used for array instruments.
For most pharmacopeia quantitative purposes, a spectral bandwidth of less than 2 nm is sufficient and the acceptance criteria for the ratio is 1.3. Spectral resolution can be used for comparison with spectral bandwidth.
| Light Source | Wavelength Range (nm) | Region | Lifetime |
| Tungsten filament lamp | 350 – 2500 | Vis + IR | 3,000 hr |
| Deuterium arc lamp | 190 – 400 | UV | 1,000 hr |
| Hydrogen lamp | 190 – 400 | UV | 1,000 hr |
| Xenon flash lamp | 190 – 1100 | UV + Vis + NIR | 5,500 hr* |
* Corresponds to 50 Hz flashes at constant operation
The best light source would be one that provides good intensity with low noise across all ultraviolet and visible wavelengths and offers stability over a long period. There is a range of light sources which are commonly employed as mentioned above.
Difrakcijske rešetke so na splošno boljše od prizme za delitev različnih valovnih dolžin, ker:
Višja spektralna ločljivost: Rešetke lahko zagotovijo veliko višjo spektralno ločljivost zaradi svoje sposobnosti, da proizvedejo več ostrih difrakcijskih vrst, kar omogoča natančnejše ločevanje tesno razporejenih valovnih dolžin.
Linearna disperzija: Kotna ločitev med valovnimi dolžinami v rešetki je bolj linearno povezana z valovno dolžino, kar olajša analizo in umerjanje spektrov v primerjavi z nelinearno disperzijo prizm.
Brez omejitev disperzije materiala: Prizme se zanašajo na disperzijo materiala (sprememba lomnega količnika z valovno dolžino), ki lahko omeji zmogljivost, zlasti v določenih razponih valovnih dolžin. Rešetke uporabljajo interferenčne učinke, ki niso omejeni z lastnostmi materiala.
Širok razpon valovnih dolžin: Rešetke lahko učinkovito delujejo v širšem razponu valovnih dolžin, vključno z ultravijolično in infrardečo, medtem ko imajo prizme omejitve absorpcije in disperzije.
Na splošno difrakcijske rešetke zagotavljajo natančnejše in vsestransko ločevanje valovnih dolžin kot prizme, zato se pogosto uporabljajo v spektrometrih in optičnih instrumentih.
Molekule se lahko analizirajo z uporabo UV/Vis spektroskopije, če imajo kakršno koli funkcionalno skupino ali konjugacijo ali če proizvajajo barvni kompleks. Ker anorganske spojine ne vsebujejo nobene funkcionalne skupine ali konjugacije, je običajna metoda za njihovo analizo reakcija z ustrezno spojino. Tako nastane barvni kompleks, katerega absorpcijo je mogoče fotometrično izmeriti v vidnem območju in povezati z njegovo dejansko koncentracijo. Na primer, železo se običajno analizira z reakcijo z 1, 10-fentrolinom, da se proizvede kompleks rdeče barve. Absorbanca kompleksa se meri pri 570 nm, da se oceni koncentracija železa.
Sledi glavna razlika med enojnim in dvosnopožnim spektrofotometrom.
Delitev žarka v spektrofotometru z dvojnim snopom se doseže na dva načina:
Analiza trdnega vzorca se izvaja predvsem z oceno njegove absorbance, prepustnosti in odbojnosti. Skupni parametri, določeni za trdne polimere, vključujejo % prepustnosti, mejno valovno dolžino in indeks rumenkaste. Vzorec se namesti na držalo, posebej zasnovano za trdne vzorce, odčitki pa se odčitajo na enak način kot za tekoče vzorce. Trdno držalo za vzorec omogoča merjenje trdnih vzorcev, kot so filmi ali steklo.
Temperatura vpliva na vrednosti absorpcije. Različna topila so podvržena različnim interakcijam pri različnih temperaturah. Parametri raztopine, ki se spreminjajo zaradi temperaturnih sprememb, so:
Na parametre optične zmogljivosti, kot so fotometrični šum, natančnost/ponovljivost valovne dolžine, fotometrična ponovljivost in razpršena svetloba, temperatura v območju od 10 do 40 °C ne vpliva.
Medtem ko optični parametri, kot so fotometrična ločljivost (razmerje toluen/heksan) in valovne dolžine fotometrične natančnosti (K2Cr2O7 v HClO4), kažejo temperaturno odvisnost od 0,014 do -0,034 / enoto znotraj 10 - 40 °C.
Potepuška svetloba je opredeljena kot svetloba, ki doseže detektor, ki ni iz svetlobnega vira instrumenta in ne sledi optični poti, kar povzroči odstopanje pri ustrezni valovni dolžini. Zato je intenzivnost svetlobe, ki jo meri detektor, višja, kot bi dejansko morala biti. Nasprotno pa to pomeni tudi, da je izmerjena absorbanca nižja od dejanske absorbance, ker se zmanjša s prispevkom razpršene svetlobe. Ta učinek je izrazitejši pri višjih vrednostih absorbance (visoke koncentracije vzorca).
Prenesite belo knjigo, če želite izvedeti več o izvoru in natančnem merjenju razpršene svetlobe:
Prostor za vzorce v spektrofotometrih z nizom UV/Vis je odprt zaradi dejstva, da instrumenti z nizom uporabljajo obratno optiko in hkratno zaznavanje vseh valovnih dolžin spektra.
Anika Adams is Senior Product Manager for UV/Vis Spectrophotometers at METTLER TOLEDO, where she focuses on driving innovation and optimizing customer workflows. With a degree in business administration and experience spanning software development, mechanical engineering, and production, Anika brings a multidisciplinary perspective to the laboratory business. Her expertise lies in automating and enhancing customer processes, ensuring both product excellence and customer satisfaction.
