Kalibracija UV Vis spektrofotometra

Spektrofotometri UV/VIS Excellence ispitani su prema postupcima koji su definirani u kombiniranom izdanju 43. Američke farmakopeje (USP 43) i 38. Američke farmakopeje pomoćnih tvari (NF 38) te 10. izdanju Europske farmakopeje. Ispitivanja se tiču sljedećih parametara:

• točnost valne duljine
• fotometrijska točnost
• fotometrijska ponovljivost
• fotometrijska linearnost*
• zalutalo svjetlo
• rezolucija.

Uz to, ispitani su i parametri koje ne zahtijeva ni Američka ni Europska farmakopeja:

• ponovljivost valne duljine
• fotometrijski šum
• ravnina bazne linije
• fotometrijski pomak.

Svi aspekti radnog učinka spektrofotometra su ispitani zahvaljujući sveobuhvatnosti ispitivanja. Naš spektrofotometar UV7 Excellence usklađen je sa strogim zahtjevima detaljnije opisanima u nastavku.

*Fotometrijska linearnost više se izričito ne spominje u 43. izdanju. Fotometrijska točnost mora se ispitati u predviđenom radnom rasponu. Stoga METTLER TOLEDO i dalje preporučuje test fotometrijske linearnosti.

Točnost valne duljine procjenjuje sposobnost instrumenta da vjerno prikaže valne duljine. Mjerenje točnosti valne duljine omogućuje određivanje pomaka ili neispravnog poravnanja osi valne duljine.

Odgovarajući referentni materijal za određivanje točnosti valne duljine treba prikazati uske i dobro definirane maksimume. Za tu se namjenu često upotrebljava otopina holmijevog oksida.

Američka i Europska farmakopeja iznose različite kriterije prihvatljivosti ovisno o referentnom materijalu koji se upotrebljava i rasponu valne duljine. Za tekuće referentne materijale primjenjivi su sljedeći kriteriji:

USP: ±1 nm ispod 400 nm; ±2 nm iznad 400 nm
Ph. Eur.: ±1 nm ispod 400 nm; ±3 nm iznad 400 nm

Prema Američkoj i Europskoj farmakopeji, preciznost valne duljine, ili ponovljivost, nije potrebna za spektrofotometre koji se temelje na nizu. Zbog nedostatka pomičnog dijela, kod instrumenata koji se temelje na nizu ne dolazi do neispravnog poravnanja između mjerenja.

Fotometrijska točnost mjera je sposobnosti instrumenta da na ispravan način izmjeri apsorbanciju i vrijednosti apsorbancije vrati na vrijednosti koje su što je bliže moguće stvarnoj vrijednosti.

Fotometrijska točnost može se odrediti mjerenjem krutih ili tekućih filtara poznatih koncentracija i vrijednosti apsorbancije te uspoređivanjem izmjerene apsorbancije s referentnim vrijednostima apsorbancije.

Otopina kalijevog dikromata (PDC) od 60 mg/L upotrebljava se za ultraljubičasti raspon, a neutralni filtar (ND) od 0,5 A pokriva vidljivi raspon. Kriteriji prihvatljivosti jednaki su za obje farmakopeje te ovise o stupnju apsorbancije referentnog materijala.

PDC: ±0,010 A ispod 1,0 A; ±1,0 % (0.010*A) iznad 1,0 A
ND: ±0,008 A ispod 1,0 A; ±0,8 % (0.008*A) iznad 1,0 A

Prema Američkoj i Europskoj farmakopeji, preciznost valne duljine, ili ponovljivost, nije potrebna za spektrofotometre koji se temelje na nizu. Zbog nedostatka pomičnog dijela, kod instrumenata koji se temelje na nizu ne dolazi do neispravnog poravnanja između mjerenja.

Fotometrijska ponovljivost, koju Američka farmakopeja naziva i fotometrijskom preciznošću, definira kapacitet spektrofotometra da vrati vrijednosti apsorbancije više mjerenja na pouzdan i ponovljiv način.

Upotrebljavaju se isti referentni materijali koji se upotrebljavaju za određivanje fotometrijske točnosti. Filtri se mjere šest puta i izračunava se standardno odstupanje svih mjerenja kako bi se procijenila ponovljivost.

Standardno odstupanje ne smije biti veće od 5 mA ispod 1 A ili 0,5 % iznad 1 A, bez obzira na upotrijebljeni referentni materijal ili raspon valne duljine.

Napomena: Europska farmakopeja ne zahtijeva fotometrijsku ponovljivost

Fotometrijska linearnost mjera je linearnosti izmjerenih vrijednosti (npr. apsorbancije) koja je proporcionalna povećanju koncentracije. To je posebno važno za kvantitativne primjene.

Fotometrijska linearnost može se odrediti s pomoću istih postupaka i filtara koji se upotrebljavaju za određivanje fotometrijske točnosti, no pri tri koncentracije upotrebljavaju se različiti filtri koji pokrivaju raspon između 0 A i 2 A.

Američka i Europska farmakopeja navode različite kriterije prihvatljivosti za fotometrijsku linearnost:

Europska farmakopeja: koeficijent korelacije R2 mora premašiti 0,999.
Američka farmakopeja: izmjerene vrijednosti svih filtara/koncentracija moraju ispuniti kriterije fotometrijske točnosti.

Zalutalo svjetlo definira se kao svjetlo koje doseže detektor, ali nije dio analize. Ono uzrokuje sustavno odstupanje pri odgovarajućoj valnoj duljini, no ne proizlazi iz doprinosa uzorka koji se mjeri. Stoga se apsorbancija uzorka mijenja zbog zalutalog svjetla i u rezultatu uzorka dolazi do sustavne pogreške.

Zalutalo svjetlo određuje se mjerenjem graničnog filtra (vodena otopina kalijevog klorida) upotrebom metode specifične valne duljine (SWM) i metode omjera otopine i filtra (SFRM).

Kriteriji prihvatljivosti Američke i Europske farmakopeje za KCl su sljedeći:

SWM: Amax ≥ 2,0 A
SFRM: Amax ≥ 0,7 A

Rezolucija definira moć razlučivanja UV Vis spektrofotometra i njegove sposobnosti da razluči susjedne strukture u spektru.

Rezolucija se određuje mjerenjem otopine toluena u n-heksanu. Za procjenu rezolucije upotrebljavaju se minimum apsorpcije i maksimum oštrog i dobro vidljivog vrha.

Američka farmakopeja navodi da omjer između minimalne i maksimalne apsorbancije kod valnih duljina od 267 i 269 nm mora premašiti 1,3 kako bi pružio dovoljno dobru rezoluciju, a kriteriji prihvatljivosti Europske farmakopeje navedeni su u zasebnoj monografiji.

Za razliku od skenirajućih UV Vis spektrofotometara, instrumenti koji se temelje na nizu nemaju fizički prorez koji mehanički definira spektralnu propusnost (SBW) instrumenta. Ekvivalentni SBW instrumenta koji se temelji na nizu može se izračunati iz rezolucije instrumenta.
Na primjer, rezolucija spektrofotometra UV7 Excellence je ≥ 1,9, što odgovara SBW od ≤ 1,0 nm.

Prethodno definirana ispitivanja mogu se provesti ručno ili automatski, no ručne metode imaju svojstven rizik od smanjene točnosti. Ručni tijekovi rada oduzimaju mnogo vremena i skloni su pogreškama. Automatizirana provjera performansi nudi sljedeće pogodnosti:

• Brži rezultati sa sljedivom dokumentacijom i provjerom rezultata.
• Pogreške za vrijeme tijeka rada i pogreške prilikom prepisivanja mogu se izbjeći, a ispitivanja se ne moraju ponavljati.
• Usklađenost s normama za integritet podataka. To je značajna prednost s obzirom na upravljanje podacima usklađeno s Agencijom za hranu i lijekove SAD-a (FDA).
• Brz povrat uloženih sredstava zahvaljujući povećanoj produktivnost i sigurnosti.

Usklađenost s propisima ključni je cilj za sve proizvođače u farmaceutskoj industriji i njihove dobavljače. Prema dobroj proizvođačkoj praksi (GMP), postupak proizvodnje i analitičke metode trebaju se provjeriti, a istovremeno je potrebna kvalifikacija opreme koja se upotrebljava u proizvodnji i kontroli kvalitete.

Tvrtka METTLER TOLEDO nudi EQPac za UV/VIS spektrofotometre Excellence kako bi korisnicima olakšala postizanje tog zahtjeva za usklađenost. EQPac servisno je rješenje posebno osmišljeno za rješavanje problema usklađenosti u današnjem zahtjevnom regulatornom okruženju. Nudi usluge profesionalne instalacije i kvalifikacije na lokaciji i s potpunom dokumentacijom kako bi osigurali usklađenost s propisima i pouzdan rad.

Saznajte više o našoj usluzi kvalifikacije opreme i našoj usluzi kalibracije UV/VIS spektrofotometra.