Spectrophotomètre UV VIS

La spectroscopie UV VIS est une technique simple et couramment utilisée fondée sur l'absorption de la lumière dans un échantillon donné. En fonction de la quantité de lumière et de la longueur d'onde absorbées par l'échantillon, des informations précieuses peuvent être obtenues, telles que la concentration ou la pureté de l'échantillon, par exemple dans le spectre de la caféine ci-dessous. De plus, chaque substance absorbant la lumière de façon différente, une relation unique et spécifique existe entre la substance et son spectre UV VIS. C'est ainsi que la spectrophotométrie permet d'identifier une substance.

Un spectrophotomètre UV VIS mesure l'intensité de la lumière qui traverse une solution échantillon dans une cuve et la compare à l'intensité de la lumière avant qu'elle traverse l'échantillon. Les principaux composants d'un spectrophotomètre UV VIS sont une source lumineuse, un support d'échantillon, un dispositif dispersif pour séparer les différentes longueurs d'onde de la lumière et un détecteur approprié (par exemple, un détecteur à photodiodes).

Il existe cinq raisons principales de mesurer les spectres UV VIS :

• Les spectres UV VIS permettent d'identifier les composants d'un échantillon. Plus précisément, la position du pic, et dans une certaine mesure le profil du spectre, permettent d'identifier certains composés.
  
• Les pics d'absorption peuvent servir à quantifier l'échantillon analysé. Par exemple, la concentration de l'échantillon peut être calculée à partir de la valeur de l'absorbance du pic.
  
• Grâce à la relation entre l'absorbance et la concentration de l'échantillon, les spectrophotomètres UV VIS sont utilisés pour l'analyse quantitative dans les segments de marché tels que les biotechnologies, les produits pharmaceutiques ou cosmétiques, les aliments et les boissons, la chimie et l'analyse de l'eau.
  
• Le spectre peut révéler certaines propriétés physiques des molécules de l'échantillon et permettre de calculer le coefficient d'extinction de l'échantillon, de calculer le point de fusion des protéines et acides nucléiques en mesurant les spectres UV VIS à différentes températures et de déterminer la vitesse d'une réaction en étudiant les spectres d'absorption en fonction du temps.
  
• La position et le profil des pics dans le spectre peuvent fournir des informations sur l'environnement microscopique des molécules de l'échantillon.

• La longueur d'onde fixe est l'application la plus simple d'un spectrophotomètre. Il s'agit d'une mesure d'une ou plusieurs longueurs d'onde et le résultat peut être donné en absorbance ou en transmission.
  
• La quantification ou la détermination de la concentration d'une substance par un spectrophotomètre UV VIS se fonde sur la loi de Beer-Lambert, qui établit que l'absorbance d'une solution est directement proportionnelle à la concentration de la substance absorbante dans la solution et au chemin optique de la cuve. Il est ainsi possible d'utiliser un spectrophotomètre UV VIS pour déterminer la concentration d'un échantillon.
  
• Les mesures spectrales en scan déterminent l'absorbance ou la transmission d'un échantillon sur une plage de longueurs d'onde spécifiée ou sur l'ensemble du spectre, généralement de 190 à 1 100 nm. L'analyse la plus courante consiste ensuite à détecter les pics et les vallées.
  
• Un spectrophotomètre UV VIS est souvent utilisé pour surveiller l'évolution de la concentration d'un réactif ou d'un produit en mesurant l'absorbance dans le temps à une longueur d'onde spécifique. Ces méthodes cinétiques sont souvent utilisées pour étudier la vitesse de réaction enzymatique ou pour déterminer la concentration de certains glucides, tels que le glucose, le fructose ou le lactose.

• Un spectrophotomètre à balayage mesure chaque longueur d'onde séparément, ce qui prend beaucoup plus de temps. Un spectrophotomètre à barrettes de diodes mesure l'ensemble du spectre en un court laps de temps, car toutes les longueurs d'onde sont mesurées par le détecteur à barrettes de diodes.
  
• Un spectrophotomètre à balayage balaie le spectre avec des éléments à rotation mécanique, ce qui peut causer des erreurs de reproductibilité de longueur d'onde. Un instrument de spectroscopie à balayage nécessite donc un réétalonnage périodique pour garantir une mesure précise de la longueur d'onde. Un spectrophotomètre à barrettes de diodes n'étant pas constitué de pièces optiques mobiles, il n'y a pas d'écarts de performances dans le temps dus aux imprécisions mécaniques.
  
• Un spectrophotomètre à barrettes de diodes ne nécessite pas de compartiment d'échantillon fermé, car sa conception optique le rend insensible à la lumière ambiante.

Notre gamme de spectrophotomètres a été conçue pour plusieurs segments de l'industrie :

• Les spectrophotomètres UV5Bio et UV5Nano sont généralement utilisés dans le secteur pharmaceutique, les sciences de la vie, les biotechnologies et la recherche publique.
  
• Les spectrophotomètres UV7 et UV5 sont généralement utilisés dans le secteur pharmaceutique, les aliments et les boissons, la chimie, la cosmétique, la pétrochimie et la recherche publique.

Un spectrophotomètre microvolume effectue des mesures en utilisant de faibles volumes d'échantillon (seulement 1 microlitre). Grâce à la technologie LockPath du spectrophotomètre UV5Nano de METTLER TOLEDO, qui permet de paramétrer la longueur du trajet optique sur 0,1 ou 1 mm, il est également possible de mesurer des échantillons fortement concentrés sans dilution.

• Les spectrophotomètres UV5Nano et UV5Bio de METTLER TOLEDO offrent de nombreuses applications dans le secteur des sciences de la vie :
  
  • Analyse qualitative de l'ADN, de l'ARN et des protéines
    
  • Analyse quantitative de l'ADN, de l'ARN et des protéines
    
  • Essais de BCA, Bradford, Lowry et autres protéiniques colorimétriques
    
  • Colorants préconfigurés et possibilité d'ajouter des colorants personnalisés
    
  • Calculateur d'oligonucléotides pour déterminer la concentration d'oligonucléotides d'ADN et d'ARN
    
  • OD600 pour les cellules vivantes
    
• De plus, les spectrophotomètres UV5Bio et UV7 offrent des méthodes cinétiques pour mesurer la cinétique enzymatique
  
• Pour en savoir plus sur les applications dans le secteur des sciences de la vie avec les spectrophotomètres METTLER TOLEDO, téléchargez la boîte à outils Sciences de la vie.

METTLER TOLEDO propose le module CertiRef™, une solution de vérification des performances qui constitue le moyen le plus efficace de déterminer si votre spectrophotomètre respecte les réglementations des pharmacopées. Cet accessoire réalise des tests automatiques pour vérifier la précision et la répétabilité des longueurs d'onde, la précision et la répétabilité photométriques, la résolution, la lumière diffuse, le bruit et la dérive photométriques, et la planéité de la ligne de base.

Le logiciel LabX® de METTLER TOLEDO permet une plus grande flexibilité pour les utilisateurs grâce à des flux de travail personnalisés qui répondent précisément à leurs besoins. Il élimine les erreurs de calcul et de transcription. Il assure également l'intégrité des données, car toutes les informations sont stockées dans une base de données sécurisée, y compris les vérifications des performances.Grâce à une sécurité renforcée, notamment au travers de signatures électroniques et de gestion des comptes utilisateurs, il facilite le respect de la réglementation 21 CFR Part 11 de la FDA.