Preparação de Meios de Cultura

Os meios de cultura, também conhecidos como meios de crescimento, são misturas específicas de nutrientes e outras substâncias que ajudam no crescimento de microrganismos, como bactérias e fungos (leveduras e bolores). Os meios de cultura são usados para testes de controle de qualidade de matérias-primas não estéreis e produtos acabados, bem como para testes de contaminação microbiana (esterilidade) em aplicações como monitoramento de higiene, validação do processo de esterilização e determinação da eficácia de agentes conservantes e antimicrobianos.

Os testes de enumeração microbiana para produtos não estéreis são realizados de acordo com os procedimentos de teste harmonizados das farmacopeias da Europa, EUA e Japão. Esses testes, anteriormente conhecidos como Testes de Limite Microbiano (MLT), determinam a carga microbiológica da amostra do produto. Isso é obtido contando o número de unidades formadoras de colônias que cresceram no meio de cultura para um tamanho de amostra conhecido (UFC/g). Os critérios de aceitação são baseados na Contagem Total de Micróbios Aeróbicos (TAMC), na Contagem Total de Leveduras e Fungos (TYMC). Além disso, testes específicos são realizados para confirmar a presença ou ausência de certos microrganismos que podem ser indesejáveis.

Os ingredientes do meio de cultura variam de acordo com o teste que está sendo realizado e o microrganismo de interesse. Mais comumente, os meios de cultura são baseados em um caldo nutritivo (líquido), muitas vezes misturado com ágar e preparado em placas de Petri (podem ser semissólidas ou sólidas). Para meios enriquecidos ou seletivos, são adicionados outros componentes específicos.

A preparação do meio de cultura deve ser realizada com precisão para garantir que o crescimento microbiológico seja promovido corretamente. Os ingredientes individuais do meio de cultura (pós, géis e líquidos) devem ser pesados cuidadosamente de acordo com a receita de formulação do meio de cultura. Para os componentes principais, normalmente é utilizada uma balança de precisão com capacidade de resolução de 1 mg a 10 mg. Pode ser necessária uma balança analítica para pesar oligoelementos como cobre e zinco. Se for necessária uma quantidade menor de meio de cultura, deve-se tomar cuidado para recalcular corretamente as quantidades dos ingredientes; pode ser necessária uma balança com maior resolução para cumprir os requisitos de precisão.

A preparação precisa do meio de cultura é essencial para garantir que o crescimento microbiológico seja apoiado corretamente. Assista ao vídeo para ver como as balanças de precisão XPR da METTLER TOLEDO não apenas ajudam a garantir que os meios de crescimento sejam formulados com precisão, mas também simplificam o processo para economizar tempo e esforço.

A preparação de formulações de meios de cultura, incluindo meio de crescimento líquido e meio de cultura à base de ágar nutriente, é um procedimento comum em qualquer laboratório de microbiologia. O processo de formulação de meios de cultura envolve muitas etapas e deve ser realizado com cuidado para evitar contaminação cruzada e, em última instância, proteger a saúde dos consumidores.

1. Selecione receita de meio de cultura do banco de dados
2. Recalcule as quantidades de ingredientes de acordo com o volume do meio de cultura necessário
3. Pese os ingredientes principais no recipiente
4. Pese os ingredientes residuais em uma balança de alta precisão e adicione ao recipiente
5. Despeje água desionizada até cerca de 80% do volume necessário
6. Misture para dissolver os ingredientes; pode ser necessário um leve aquecimento
7. Verifique o pH usando um medidor de pH e ajuste, se necessário
8. Complete o meio de cultura até o volume necessário
9. Rotule o recipiente
10. Esterilize em autoclave
11. Documente os resultados

Tipos de testes de controle de qualidade microbiológica

Dependendo do tipo de produto e sua finalidade, há três categorias principais de testes de controle de qualidade microbiana que requerem o uso de meios de crescimento:

Diretrizes para exame microbiano de produtos não estéreis

Os procedimentos de teste de limites microbianos são realizados para determinar se um produto não estéril está em conformidade com as especificações fornecidas para a qualidade microbiana. Esses produtos não estéreis incluem produtos cosméticos, de saúde e farmacêuticos que podem ser ingeridos, aplicados topicamente ou inalados. A eficácia de tais produtos pode ser afetada ou mesmo eliminada pela presença de certos microrganismos; além disso, alguns microrganismos podem afetar adversamente a saúde do consumidor. Os testes de enumeração microbiana são uma série de testes que os fabricantes podem usar para ajudar a garantir que a carga microbiológica de seus produtos acabados permaneça dentro dos limites de segurança.

Embora muitos países tenham suas próprias diretrizes para estabelecer a segurança de produtos não estéreis, há uma harmonização de importantes padrões nos mercados europeu, americano e japonês, conforme mostrado na tabela abaixo.

Diretrizes para teste de esterilidade de produtos estéreis

O teste de esterilidade confirma que os produtos estão isentos da presença de microrganismos viáveis e é de vital importância para dispositivos médicos, produtos farmacêuticos, materiais de tecido e quaisquer outros materiais que se declarem estéreis ou livres de microrganismos viáveis. Além de identificar possível contaminação, o teste de esterilidade também é usado para determinar a eficácia antimicrobiana e validar os procedimentos de esterilização.

Receitas de meios de cultura complexas, juntamente com um grande número de ingredientes, podem tornar a preparação de meios de cultura um procedimento demorado e trabalhoso. Entender bem o processo é essencial para garantir a segurança do consumidor. Se você precisar de apoio com a preparação de meios de cultura ou quiser conselhos sobre tópicos como conformidade com os POPs, eletrostática ou documentação e rastreabilidade, nossa equipe de especialistas está à sua disposição. Não hesite em entrar em contato conosco para obter ajuda ou orientação.

Os meios de cultura e meios de crescimento geralmente consistem em mais de cinco ingredientes, às vezes até 30. Esses processos de formulação complexos exigem muito cuidado e atenção, e até mesmo o técnico de laboratório mais rápido pode precisar de 1,5 hora para preparar tal mistura.

Cálculos de meios de cultura

A receita de meio de cultura típica produz 1 litro de solução de meio de cultura. Quando é necessário um volume diferente de 1 litro, é preciso recalcular todas as quantidades de ingredientes de acordo e registrar todos os novos valores. Qualquer erro nos cálculos ou no registro dos novos valores pode resultar em um meio de cultura que não funciona conforme o necessário, podendo levar a consequências graves.

Resultados de pesagem e registro de peso

Ao seguir uma receita de meio de cultura ou os valores recalculados, o técnico de laboratório deve ter a certeza de que foi usada a quantidade certa de cada ingrediente e de que todos os ingredientes realmente foram adicionados. Muitas vezes, isso pode significar marcar os ingredientes de uma lista à medida que são pesados. Deve-se ter cuidado para evitar erros de transcrição ao registrar os pesos reais ou ao transferi-los para um computador. O uso de duas balanças no processo de preparação dos meios de cultura aumenta a complexidade, reduz a eficiência e aumenta o risco de erros.

Influências da pesagem

Os ingredientes do meio de cultura podem ser pesados em uma variedade de recipientes diferentes, desde barcos para pesagem até béqueres de cinco litros. Todos os recipientes, bem como a própria balança, podem estar sujeitos a influências externas, por ex. movimento do ar, cargas eletrostáticas ou o campo magnético de um agitador, o que pode dar origem a dificuldades como tarar a balança, leituras flutuantes e instáveis e tempos de estabilização mais longos. Tais desafios estendem o tempo para fazer o meio de cultura, afetando a produtividade.

As dificuldades de pesagem em um gabinete de segurança ou capela fluxo laminar

Os efeitos do movimento do ar dentro de um gabinete de segurança ou capela fluxo laminar podem ser atenuados com o uso de um protetor de vento para proteger a balança e o recipiente. Embora um protetor de vento seja uma excelente maneira de evitar erros de pesagem, há algumas desvantagens práticas:

1. Abrir e fechar as portas do protetor de vento consome tempo
2. O acesso limitado ao prato de pesagem reduz a ergonomia
3. Recipientes volumosos e/ou pesados podem ser difíceis de manusear
4. O protetor de vento é um item adicional que precisa ser limpo

Documentação

Não apenas os meios de cultura devem ser totalmente rotulados para evitar qualquer confusão, mas todos os dados relacionados aos meios de cultura devem ser registrados e armazenados com segurança para referência futura e rastreabilidade. O tratamento manual de grandes quantidades de dados é demorado e apresenta um alto risco de erro.

As Balanças de Precisão XPR da METTLER TOLEDO oferecem um alto nível de precisão e abordam muitos dos desafios da preparação de meios de cultura, simplificando processos e reduzindo a carga de trabalho dos técnicos de laboratório. Com resoluções de 0,1 mg a 100 mg e capacidade de até 10 kg, as Balanças de Precisão XPR são perfeitas para uma ampla variedade de aplicações de preparação de meios de cultura.

Receitas diretamente na balança

Até 50 receitas de preparação de meios de cultura podem ser salvas na balança como métodos de pesagem, permitindo que os técnicos acessem rapidamente a receita necessária e comecem a trabalhar. Instruções passo a passo são fornecidas no visor da balança para que os técnicos possam acompanhar facilmente em que ponto eles se encontram no processo de preparação do meio de cultura.

Cálculos automáticos e armazenamento de resultados

No início da receita do meio de cultura, o técnico simplesmente digita o volume necessário e as quantidades dos ingredientes são recalculadas automaticamente. A balança avisa o técnico para pesar cada ingrediente, salva o resultado do peso real e tara automaticamente antes que o próximo ingrediente seja adicionado. Não há necessidade de registrar os resultados manualmente e os resultados podem ser impressos automaticamente no final.

Sem necessidade de protetor de vento

Todas as Balanças de Precisão XPR são equipadas com o prato de pesagem SmartPan™. O SmartPan oferece uma estabilidade extraordinária, minimizando os efeitos das correntes de ar na célula de pesagem, tornando possível pesar com resolução de 1 mg sem um protetor de vento. O SmartPan permite que os resultados sejam entregues duas vezes mais rápido que em um prato de pesagem padrão.

• Limpeza fácil

Equipamentos limpos são essenciais para reduzir o risco de contaminação cruzada. O prato de pesagem SmartPan retém qualquer derramamento na base do prato, permitindo o descarte seguro. O prato e a base são facilmente removidos para limpeza em uma máquina de lavar louça. A capa protetora no corpo protege a balança, ajudando a evitar que respingos entrem na célula de pesagem, e sua superfície lisa é fácil de limpar e evita o acúmulo de sujeira. Tampas quimicamente resistentes estão disponíveis para o visor da balança, que podem ser simplesmente levantadas após o uso e descartadas para evitar contaminação cruzada.

Você já quis que os processos de pesagem e documentação para formulação de meios fossem menos complicados? O desafio de reproduzir a formulação otimizada de meios é familiar para você? Leia o nosso guia e saiba como instrumentos e acessórios personalizados podem ajudar um laboratório de P&D a garantir um alto grau de confiabilidade de pesagem, consistência do meio, economia geral e qualidade do produto para seus processos de formulação.

As Balanças de Precisão XPR da METTLER TOLEDO podem ser conectadas ao nosso software de laboratório LabX para criar uma solução completa de fluxo de trabalho que oferece recursos abrangentes de gerenciamento de dados. Um banco de dados centralizado fornece a todos os usuários conectados acesso aos mesmos POPs para preparação de meios de cultura, garantindo que cada técnico siga os mesmos procedimentos. O software cuida automaticamente de todos os cálculos e informações do processo. Os resultados são salvos com segurança no banco de dados e podem ser acessados a qualquer momento para análise posterior e geração de relatórios. O software praticamente elimina a necessidade de registro manual de dados – até mesmo etiquetas detalhadas podem ser impressas automaticamente.

A solução pode ser integrada aos sistemas ERP/LIMS existentes, permitindo a transferência bidirecional de receitas e resultados. Instrumentos, tarefas e usuários podem ser gerenciados de forma centralizada; os gerentes de laboratório podem monitorar o progresso das tarefas ao vivo sem a necessidade de estar presente no laboratório. Para ambientes altamente regulamentados, o software ajuda a atender aos requisitos de integridade de dados FDA ALCOA+.

Não importa se você apenas precisa de medições de pH rápidas e confiáveis ou se está cumprindo regulamentos rigorosos — a METTLER TOLEDO pode ajudá-lo.

A linha mais avançada SevenExcellence oferece uma operação intuitiva com a tela touchscreen OneClick™, permitindo que métodos salvos sejam iniciados diretamente de um atalho na tela inicial. O gerenciamento inteligente do sensor garante que seus eletrodos de pH estejam sempre nas melhores condições para resultados precisos. A linha Seven Excellence pode ser conectada ao LabX para garantir a rastreabilidade e integridade dos dados.

Para medições de pH em superfícies planas como placas de ágar, são recomendados eletrodos de superfície especializados como o InLab Surface Pro-ISM.