Кюветы для спектрофотометров

Кювета используется для анализа образца и является частью оптической системы спектрофотометра. По этой причине положение, геометрия и состояние кюветы может влиять на точность измерения коэффициента поглощения, и это влияние необходимо тщательно контролировать.

Длина оптического пути кюветы — это расстояние между внутренними стенками кюветы, которое проходит свет.

Для стандартной кюветы спектрофотометра ход луча света или длина пути определяется как внутреннее расстояние от переднего до заднего окна. Длина оптического пути стандартной кюветы — 10 мм.

Материал кюветы может также поглощать свет в зависимости от длины волны. Кюветы из кварца абсолютно прозрачны во всем диапазоне измерений (в видимой и УФ-областях). Прозрачность одноразовых пластиковых кювет очень часто ограничена видимой областью спектра. Таким образом, выбор кюветы в основном зависит от области применения.

В соответствии с законом Ламберта — Бера, коэффициент поглощения прямо пропорционален длине пути кюветы и концентрации образца. Выбор наиболее подходящей длины пути (от 1 мм до 5 мм) исключает необходимость в разбавлении. Коэффициент поглощения в диапазоне от 0,2 до 1,5 A обеспечивает наиболее точные результаты. Микрообъемный прибор с очень короткой длиной пути (1 мм или 0,1 мм) идеально подходит для анализа образцов с высокой концентрацией.

Надлежащая практика предписывает, чтобы кювета оставалась в держателе между измерениями. В случае снятия обязательно помещайте кювету в держатель той же стороной (этикеткой к источнику света). Это обеспечит одинаковый оптический эффект при измерении эталона и образца.

Чтобы получить наилучшие результаты при измерении в эталоне и образце, необходимо использовать кюветы одного типа.

Кюветы включают окна из материала, который должен быть прозрачным в изучаемой области спектра.

Для наилучших результатов измерений в УФ-области спектра следует использовать прозрачное для ультрафиолета стекло — например, кварцевое стекло SUPRASIL^®.

SUPRASIL^® — торговая марка компании Heraeus (кварцевое стекло).

Для измерений в видимой области спектра (>400 нм) чаще всего используются кюветы из оптического стекла или одноразовые кюветы из полиметилметакрилата (PMMA) или полистирола (PS).

Одноразовые кюветы из полиметилметакрилата поглощают свет в УФ-области спектра и играют роль отсекающего фильтра. По этой причине результаты измерений в этом диапазоне будут неточными. Такие кюветы следует использовать только для исследований в видимой области.

Хорошо перемешайте образец перед анализом, особенно если он содержит нуклеиновые кислоты или белки. Не используйте для наполнения кювет стеклянные пипетки — они могут поцарапать оптическую поверхность. Для этой цели лучше всего подойдут пипетки с одноразовыми пластиковыми наконечниками. Во избежание появления пузырьков направляйте раствор в кювету так, чтобы он стекал по стенке. Не наполняйте кювету более чем на 80 % от ее объема.

Окна кюветы, через которые проходит свет, необходимо очищать перед каждым использованием. Для тщательной внутренней и внешней очистки следует применять 60%-й раствор изопропанола / деионизированной воды, специальную ткань для оптики или салфетку без ворса, который может поцарапать стеклянную поверхность.

Чтобы не допустить завышения показаний поглощения, тщательно очищайте кюветы до и после использования. Избегайте прикасаться к окнам по окончании очистки. Образец следует удалять сразу после измерения, так как испаряющийся растворитель может повредить кювету.

Причиной завышенного коэффициента поглощения могут быть остаточные вещества (следы пальцев, жир и т. д.) на окнах кюветы. Они усиливают поглощение света. Во избежание этого явления выполняйте тщательную очистку кюветы до и после использования. Также избегайте прикасаться к окнам по окончании очистки.

Держите кювету только за матовые поверхности, стараясь не оставлять на них следы пальцев.

Разместите кювету так, чтобы луч света попадал на прозрачную сторону. Этикетки кювет с холостой пробой и образцом должны смотреть в одном направлении. Убедитесь, что кювета не накренена и хорошо зафиксирована в держателе. После этого не двигайте ее.

Крышка, которая поставляется вместе с кюветой, предназначена для того, чтобы уменьшить испарение растворителя или поглощение воды из окружающего воздуха при работе с гидрофильными образцами.

После каждой серии измерений проточную ячейку необходимо полностью опорожнить. Чтобы избежать накопления солей кальция на оптическом окне, промойте проточную ячейку ацетоном, затем тщательно высушите для удаления его остатков.

Для краткосрочного хранения предлагаются специальные держатели кювет. Для долгосрочного хранения следует использовать оригинальную упаковку во избежание появления царапин и накопления пыли на поверхности стекла.

Надлежащая практика предписывает, чтобы кювета оставалась в держателе между измерениями. В случае снятия обязательно помещайте кювету в держатель той же стороной (этикеткой к источнику света). Это обеспечит одинаковый оптический эффект при измерении эталона и образца. Благодаря превосходным допускам МЕТТЛЕР ТОЛЕДО кюветы Excellence не обязательно размещать определенным образом, поскольку отклонения коэффициента поглощения на разных сторонах незначительны.

Остаточные вещества (следы пальцев, жир и т. д.) на окнах кюветы могут стать причиной завышенных показателей поглощения, поскольку они усиливают поглощение света. Во избежание этого явления выполняйте тщательную очистку кюветы до и после использования. Также избегайте прикасаться к окнам по окончании очистки.

Кювета — это небольшой сосуд прямоугольной формы для водных образцов. Его прямые стенки изготовлены из прозрачного материала. Другое название кювет — ячейки или капилляры. Кюветы применяются в спектрофотометрических исследованиях для определения коэффициента поглощения на конкретной длине волны.

Если на отполированной области кюветы имеются царапины или мелкие трещины, ее не следует использовать для дальнейших измерений, поскольку результаты будут искажены. Кювета также может разбиться внутри спектрофотометра. Смолистые вещества, которые могут использоваться для восстановления и склеивания кюветы, повлияют на достоверность результатов. По этой причине ремонт поврежденной кюветы не рекомендуется.

Кювету с холостой пробой используют для калибровки спектрофотометра перед анализом неизвестного раствора. Дальнейшие показания спектрографа сравнивают со значениями, полученными для этой кюветы. На показания могут влиять различные факторы окружающей среды — например, запыленность, температура и влажность. Чтобы исключить это влияние, показания для каждой кюветы с образцом раствора уменьшают на показания кюветы с холостой пробой.

Оптическое стекло МЕТТЛЕР ТОЛЕДО: длина волны 320–2500 нм; коэффициент пропускания > 80 %; многоразового использования; видимая область спектра

Кварцевое стекло МЕТТЛЕР ТОЛЕДО: длина волны 200–2500 нм; коэффициент пропускания > 82 %; многоразового использования; видимая и УФ-области спектра

Обычный объем стандартной макрокюветы 10 мм: 3,5 мл (3500 мкл). Рассчитать этот параметр очень легко по следующей формуле: внутр. длина x внутр. ширина x внутр. высота x 80 % = объем кюветы.

Точно подобранная пара кювет — это две кюветы из идентичного материала с одинаковой длиной оптического пути. С учетом допусков, заданных производителем, такие пары сосудов обеспечивают сопоставимость результатов измерений. Кюветы МЕТТЛЕР ТОЛЕДО Excellence изготавливаются с допуском ±0,01 мм и поэтому не нуждаются в подборе пары.