La espectroscopia UV/Vis sirve para múltiples propósitos científicos e industriales, que incluyen:
Estas capacidades respaldan aplicaciones en control de calidad para productos farmacéuticos y alimenticios, así como investigación en campos como química, biología y ciencia de materiales. Esto ayuda a estudiar las propiedades de los materiales y comprender cómo interactúa la luz con diversas sustancias.
Cuando la luz UV/Vis interactúa con una muestra, puede ser absorbida o transmitida. La absorbancia mide la cantidad de luz que absorbe la muestra en una longitud de onda específica, lo que indica cuánta luz se retiene. La transmitancia (T = I/I₀) representa la fracción de luz que pasa a través de la muestra. Comprender estas propiedades es fundamental para analizar la interacción de una sustancia con la luz.
La absorbancia (A) es una cantidad adimensional comúnmente reportada en unidades de absorbancia (UA) para mayor claridad. Está matemáticamente relacionado con la transmitancia a través de la ecuación: A = -log₁₀(T).
Los resultados de la espectroscopia UV/Vis se muestran en un espectro UV/Vis, un gráfico que normalmente traza la absorbancia o la transmitancia frente a la longitud de onda (190-780 nm). Este espectro revela qué longitudes de onda fueron absorbidas y en qué medida.
Los picos en este espectro indican las longitudes de onda de máxima absorción (λmax), que son específicas de la estructura de la molécula y sirven como una "huella digital" única para la sustancia que se está analizando. La intensidad de estos picos (o la intensidad de absorción) está directamente relacionada con la concentración de las especies absorbentes, tal y como describe la Ley de Beer-Lambert.
Esta técnica básica consiste en pasar luz UV/Vis a través de una muestra y medir la luz transmitida. Podemos determinar las características de absorbancia de la muestra en todo el rango UV/Vis comparando la intensidad de la luz inicial con la intensidad de la luz transmitida.
La ley de Beer-Lambert (A = εdc) es esencial para el análisis cuantitativo. Establece que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración (c) de la sustancia absorbente y a la longitud del recorrido (d) del haz de luz a través de la muestra. El coeficiente de absorción molar (ε) es una constante específica de la sustancia. Esta ley permite la determinación precisa de las concentraciones de analitos.
Una curva de calibración es una herramienta gráfica utilizada para determinar la concentración de una sustancia dentro de una muestra. Aquí hay una descripción general paso a paso del proceso:
Para determinar la concentración de una muestra desconocida:
Las curvas de calibración son vitales para transformar las mediciones de absorbancia en valores de concentración precisos, lo que facilita un análisis cuantitativo certero.
La espectroscopia UV/Vis también puede proporcionar información sobre las propiedades electrónicas de los materiales, como los semiconductores. Al analizar el borde de absorción en el espectro, la energía de la banda prohibida se puede estimar utilizando técnicas como el gráfico de Tauc. Este análisis ayuda a caracterizar la energía requerida para excitar electrones dentro del material.
¿Tiene curiosidad por conocer el funcionamiento interno de un espectrofotómetro UV/Vis? Este vídeo desglosa el funcionamiento de estos instrumentos y muestra la tecnología FastTrack de METTLER TOLEDO para obtener resultados rápidos, precisos y fiables.
Disuelva su muestra en un disolvente adecuado y colóquela en un recipiente transparente especial (cubeta). Además, prepare una cubeta de referencia (llamada en blanco) con disolvente puro.
La máquina hace brillar un haz de luz UV y visible a través de la muestra y la referencia.
Una parte de la máquina (monocromador) actúa como un filtro, seleccionando un color específico (longitud de onda) de luz a la vez para pasar a través de la muestra. Luego repite esto para todas las longitudes de onda en el rango UV / Vis.
Un detector mide cuánta luz pasa a través de la muestra y cuánta pasa a través de la referencia en cada longitud de onda.
La máquina compara la cantidad de luz que pasó a través de la muestra con la cantidad que pasó a través de la referencia. Esto nos dice cuánta luz absorbió la muestra en cada longitud de onda.
Luego, la máquina crea un gráfico (el espectro UV / Vis) que representa cuánta luz absorbió la muestra en cada longitud de onda diferente. Esto ayuda a identificar y cuantificar las sustancias en la muestra.
Un espectrofotómetro UV/Vis típico consta de varios componentes clave:
El detector es un componente crucial responsable de convertir la energía luminosa que ha pasado a través de la muestra y la referencia en una señal eléctrica medible. La intensidad de la luz transmitida es inversamente proporcional a la absorbancia de la muestra en una longitud de onda específica. El detector mide estas intensidades para calcular los valores de absorbancia para el espectro UV/Vis, y su sensibilidad y rango de longitud de onda influyen en el rendimiento y la aplicabilidad del espectrofotómetro .
Estos instrumentos miden la transmitancia de la luz una longitud de onda a la vez. Una rejilla de difracción separa la luz en las longitudes de onda que la componen, y un solo detector mide la luz que pasa a través de la muestra en cada longitud de onda seleccionada. Este proceso se repite en todo el rango deseado para construir el espectro completo.
Estos instrumentos iluminan la muestra con todo el espectro de luz UV/Vis simultáneamente. La muestra absorbe diferentes longitudes de onda al mismo tiempo, y la luz transmitida se difracta mediante una rejilla en una serie de detectores múltiples (como fotodiodos). Cada detector de la matriz mide la intensidad de una banda estrecha específica de longitudes de onda al mismo tiempo. Este diseño permite una adquisición mucho más rápida del espectro UV/Vis completo en comparación con los instrumentos de escaneo.
La cubeta es un componente clave de un espectrofotómetro, que mantiene la muestra líquida en la trayectoria de la luz. Debe estar hecho de material transparente a las longitudes de onda utilizadas, lo que garantiza mediciones precisas. La longitud de la trayectoria, o la distancia que recorre la luz a través de la muestra, también es importante, ya que las cubetas estándar suelen tener una longitud de trayectoria de 10 mm, aunque puede oscilar entre 1 mm y 50 mm según la aplicación.
Estas son el tipo más común y son adecuadas para la mayoría de las muestras. Por lo general, tienen dimensiones externas de 12,5 mm x 12,5 mm y una altura de 45 mm, con dimensiones internas de 10 mm x 10 mm, lo que da como resultado una longitud de trayectoria estándar de 10 mm.
Estas cubetas tienen una longitud de trayectoria superior a 10 mm y se utilizan cuando una muestra está demasiado diluida, lo que requiere una longitud de trayectoria más larga para aumentar la señal de absorbancia y mejorar la sensibilidad. También son útiles cuando una muestra puede vaporizarse o sufrir un cambio químico durante la medición, ya que la trayectoria más larga permite una mayor interacción con el haz de luz.
Las cubetas con una longitud de trayectoria inferior a 10 mm se utilizan cuando la absorbancia de una muestra es muy alta y la dilución es difícil o indeseable. La longitud de trayectoria más corta ayuda a mantener la absorbancia dentro del rango medible (lineal) del instrumento.
Estas cubetas están diseñadas específicamente para analizar volúmenes de muestra muy pequeños. Por ejemplo, algunas microcubetas cuentan con una longitud de trayectoria óptica de 10 milímetros y están hechas de vidrio de cuarzo fundido. Son adecuadas para mediciones en el rango ultravioleta y visible, cubriendo longitudes de onda entre 200 nm y 2500 nm, y pueden manejar volúmenes de muestra de alrededor de 700 μL.
Son adecuados para mediciones en el rango ultravioleta y visible, cubriendo longitudes de onda entre 170 nm y 2700 nm, y requieren un pequeño volumen de muestra de 440 μL. Estas celdas son confiables y reutilizables.
Para obtener mediciones precisas y fiables de UV/Vis, especialmente en el control de calidad clínico, farmacéutico e industrial, un espectrofotómetro debe funcionar dentro de sus límites de rendimiento especificados. Por lo tanto, la verificación periódica del rendimiento es esencial y todos los resultados de la calibración deben documentarse y almacenarse meticulosamente.
La calibración implica verificar y ajustar la precisión del instrumento en las siguientes áreas. Estas comprobaciones se realizan con regularidad y se realizan ajustes si las lecturas se encuentran fuera de los límites aceptables, por lo que es esencial mantener registros de estas calibraciones.
Asegurarse de que el color de luz seleccionado sea correcto mediante el uso de materiales de referencia estándar.
Confirmar que el instrumento mide con precisión la cantidad de luz absorbida o transmitida a través de soluciones estándar.
Comprobación de cualquier luz no deseada que pueda provocar errores de medición.
Verificar la capacidad del instrumento para distinguir entre colores de luz muy espaciados.
Asegurando una lectura cero estable y precisa.
Prueba de rendimiento | Material de referencia certificado (CRM) | Parámetro de prueba del instrumento | Criterios de aceptación | |
USP 42 NF 37 | Ph. Eur. 10 | |||
Precisión de longitud de onda y repetibilidad | Ho(ClO4)3: 4 % Ho2O3 en 10 % v/v HClO4 En blanco: Aire | 14 longitudes de onda (240 nm – 650 nm) Xe: 2 longitudes de onda (260,6, 528,6 nm) | UV (200 – 400 nm): ± 1 nm Vis (400 – 780 nm): ± 2 nm (S.D.) < 0,5 nm | UV (< 400 nm): ± 1 nm Vis (> 400 nm): ± 3 nm |
Precisión fotométrica y repetibilidad** | K2Cr2O7 en 0,001 M HClO4 En blanco: 0,001 M HClO4 | 60 mg/L 0 A – 2 A, 235, 257, 313, 350 nm | Para absorbancia ≤ 1A Precisión : ± 0.010A Repetibilidad: S.D. ≤ 0,005 A Para absorbancia > 1A Precisión: ± 1% Repetibilidad: S.D. ≤ 0,5% | Precisión: ± 0,010 A o ± 1 %, lo que sea mayor |
Ácido nicotínico en 0,1 M HCl En blanco: 0,1 M HCl | 12 mg/L 0,26 A – 1,6 A 213, 261 nm | |||
Linealidad fotométrica | K2Cr2O7 en 0,001 M HClO4 En blanco: 0,001 M HClO4 | 6 – 200 mg/L, hasta 3,0 A, 235, 257, 313, 350 nm | Todos los filtros medidos cumplen con los criterios de aceptación de precisión fotométrica | R2> 0,999 |
Ácido nicotínico en 0,1 M HCl En blanco: 0,1 M HCl | 6 – 60 mg/L, hasta 2,5 A 213, 261 nm | |||
Luz parásita según el procedimiento A (SFRM) | 1,2 % p/v KCl/H2O; Longitud de trayectoria de 10 mm En blanco: 1,2 % c/v KCl/H2O, longitud de trayectoria de 5 mm | Amáx . a 198 nm | ≥ 0,7 A | (NA) |
Luz parásita según el procedimiento B (SWM) | 1,2 % p/v KCl/H2O; Longitud de trayectoria de 10 mm En blanco: H2O, longitud de trayectoria de 10 mm | Amáx . a 198 nm | ≥ 2,0 A | ≥ 2,0 A |
Resolución | 0,02 % v/v tolueno en n-hexano En blanco: n-hexano/ n-heptano (Ph. Eur. 10) | Amáx., 269/Amín., 267 | >1.3 | Los niveles se indican en la monografía respectiva |
** No hay especificación de repetibilidad fotométrica (precisión) en Ph. Eur. S.D. - Desviación estándar | ||||
Garantiza la seguridad del consumidor al evaluar la calidad y composición de los alimentos, centrándose en atributos como el color, el sabor y el aroma. También emplea técnicas analíticas para identificar contaminantes y adulterantes.
Un análisis riguroso es vital para verificar la pureza, concentración e identidad de los medicamentos. El monitoreo de la estabilidad de los medicamentos también es esencial para garantizar la eficacia a lo largo del tiempo en condiciones ambientales variables.
Evalúa la seguridad y eficacia del producto mediante el análisis de la fotoestabilidad de los filtros UV, la caracterización de partículas y la medición de índices de color. También detecta la adulteración y cuantifica los colorantes y antioxidantes para satisfacer las expectativas de los consumidores.
Caracteriza el petróleo crudo, calcula las fracciones de asfaltenos, formula índices de contenido aromático, determina el contenido de azufre y calcula los factores de solubilidad.
Determina las propiedades químicas, evalúa la calidad del producto final, estudia la composición del polímero, califica el agua, determina la pureza y la eficiencia del teñido, analiza la degradación fotocatalítica y los residuos de pesticidas.
Determina la concentración y pureza de ácidos nucleicos y proteínas, monitorea cultivos de células microbianas, estudia la desnaturalización y cinética de proteínas y analiza muestras biológicas como plasma sanguíneo y suero.
La espectroscopia UV/Vis se utiliza en una gran variedad de aplicaciones que abarcan diversas industrias, desde productos farmacéuticos hasta monitoreo ambiental.
El grupo de soporte de mercado de METTLER TOLEDO ofrece una biblioteca de aplicaciones UV/Vis descargables. Estas aplicaciones probadas y comprobadas incluyen notas y métodos que se pueden importar directamente a sus instrumentos.
Ya sea que esté trabajando en investigación y desarrollo, control de calidad o fabricación, nuestra página web es el recurso de referencia para todas sus necesidades de espectrofotometría UV/Vis. Explore nuestra colección hoy y descubra los últimos estándares y protocolos para garantizar el más alto nivel de precisión y exactitud en sus mediciones.
Los espectrofotómetros de microvolumen facilitan el análisis de volúmenes de muestras extremadamente pequeñas, tan bajas como 1 μL, lo cual es esencial en campos como el análisis biomolecular. Estos instrumentos utilizan tecnología de fibra óptica para dirigir la luz a través de una pequeña gota de muestra colocada en un pedestal. La corta longitud de recorrido permite mediciones precisas de muestras concentradas sin necesidad de dilución.
Específicamente, la espectrofotometría de microvolúmenes mide con precisión la pureza y concentración de ácidos nucleicos mediante la evaluación de la absorbancia a 260 nm y el cálculo de la relación A260 / A280, que indica contaminación de proteínas. También admite la cuantificación de proteínas a través de la absorbancia a 280 nm, lo que permite un control de calidad confiable en flujos de trabajo de biología molecular como PCR y secuenciación.
Ventajas | Desventajas |
Fácil de operar y los experimentos son rápidos. | Información estructural detallada limitada. |
Costo relativamente bajo para instrumentación y análisis. | Puede carecer de especificidad en mezclas complejas debido a la superposición de bandas. |
Aplicable a una amplia gama de analitos y campos. | La sensibilidad puede ser insuficiente para algunos analitos. |
Útil para el análisis cuantitativo con curvas de calibración. | Susceptible a los efectos de matriz. |
Puede proporcionar información cualitativa (λmax) | Pueden ocurrir desviaciones de la Ley Beer-Lambert. |
A menudo no es destructivo para la muestra. | Proporciona información limitada sobre el entorno molecular. |
Buena sensibilidad para absorber fuertemente analitos. | No todas las sustancias se absorben fuertemente en la región UV/Vis. |
Permite la integración de procesos como, por ejemplo, en el análisis multiparamétrico. | Solo funciona con muestras translúcidas y no turbias. |
Bajo costo por muestra/análisis | |
Tamaño reducido |
Lograr una buena exactitud y precisión en las mediciones UV/Vis requiere tomar precauciones para evitar errores. Estas son algunas fuentes típicas de error que deben tenerse en cuenta:
Optimice sus mediciones espectrofotométricas UV/Vis identificando posibles problemas. Realice nuestra rápida comprobación de riesgos UV/Vis para evaluar sus prácticas actuales y recibir recomendaciones personalizadas para mejorar.
Logre resultados más confiables con GUVP™ minimizando posibles errores. Aprenda cómo hacerlo en nuestro folleto "Resultados confiables para espectroscopia UV/VIS".
Tipo de espectroscopía | Tipo de radiación | Interacciones | Onda de longitud |
Espectroscopia de rayos gamma | Rayos gamma | Núcleos atómicos | < 0.1 nm |
Espectroscopia de fluorescencia de rayos X | Rayos X | Electrones de capa interna | 0.01 – 2.0 nm |
Espectroscopia UV al vacío | Ultravioleta (UV) | Ionización | 2.0 – 200 nm |
Espectroscopia UV/Visible | UV/Visible | Electrones de valencia | 200 – 800 nm |
Espectroscopia Infrarroja y Raman | Infrarroja | Vibraciones moleculares | 0.8 – 300 mm |
Espectroscopia de microondas | Microondas | Rotaciones moleculares | 1 mm – 30 cm |
Espectroscopia de resonancia de espín electrónico | Spin del electrón | ||
Espectroscopia de resonancia magnética nuclear | Ondas de radio | Spin nuclear | 0.6 – 10 |
Las diferentes técnicas espectroscópicas se diferencian principalmente por la radiación que utilizan, la interacción entre la energía y el material, y el tipo de material y aplicaciones para las que se emplean. Las técnicas espectroscópicas comúnmente usadas para el análisis químico son la espectroscopia atómica, la espectroscopía ultravioleta y visible (espectroscopía UV-Vis), la espectroscopia infrarroja, la espectroscopia Raman y la resonancia magnética nuclear.
Para leer un espectro UV/Vis, se analiza el gráfico de absorbancia (o a veces transmitancia) frente a la longitud de onda. Los puntos clave en los que centrarse incluyen:
Al interpretar estas características, puede identificar compuestos, determinar la concentración y estudiar las propiedades moleculares.
La espectroscopia UV/Vis suele cubrir el rango de longitud de onda de 190 nm a 780 nm.
Más específicamente:
Los espectrofotómetros UV/VIS Excellence de METTLER TOLEDO se extienden más allá de la región del infrarrojo cercano, alcanzando los 1100 nm.
La espectroscopia UV/Vis es importante porque permite el análisis cualitativo y cuantitativo de las sustancias midiendo su absorción de luz ultravioleta y visible.
Este método ayuda a determinar la concentración de analitos, estudiar la cinética química, evaluar la pureza, realizar mediciones objetivas del color y analizar las estructuras moleculares. Sus aplicaciones cubren una amplia gama de campos, incluida la química, la biología, la ciencia ambiental y la ciencia de los materiales, lo que la convierte en una herramienta versátil y esencial para el análisis.
La espectroscopia UV/Vis mide la luz absorbida por una muestra para determinar su concentración e identificar compuestos. Este proceso implica la eliminación de la luz.
Por el contrario, la espectroscopia de fluorescencia mide la luz emitida por una muestra después de que absorbe la luz, generalmente a una longitud de onda más larga. Esta técnica se centra en la reemisión de luz, proporcionando una sensibilidad mucho mayor para moléculas fluorescentes específicas.
Para preparar una muestra para la espectroscopia UV/Vis, deberá manipular sus cubetas y soluciones con cuidado:
Para determinar la concentración de una solución desconocida mediante espectroscopia UV/Vis, siga estos pasos:
Este método se basa en la Ley de Beer-Lambert, que establece que la absorbancia A = εbc, donde ε es la absortividad molar, b es la longitud del camino y c es la concentración.
La absorción de la luz ultravioleta da como resultado transiciones electrónicas de niveles de energía más bajos a niveles de energía más altos. La absorción de radiación ultravioleta en moléculas orgánicas está restringida a ciertos grupos funcionales (cromóforos) que contienen electrones de valencia de baja energía de excitación. Las transiciones/interacciones moleculares que tienen lugar debido a la absorción UV son:
Estas transiciones necesitan un grupo insaturado en la molécula para proporcionar los electrones π.
Las transiciones de σ (enlace) a σ* (antienlace) requieren una mayor energía y, por lo tanto, no se pueden detectar mediante espectroscopia UV-Vis.
Considere un grupo funcional que contiene átomos con uno o más pares solitarios de electrones que no absorben radiación ultravioleta / visible. Sin embargo, cuando este grupo funcional se une a un cromóforo, altera la intensidad y la longitud de onda de absorción. Este fenómeno se llama auxocromo o grupo de mejora del color.
La presencia de un auxocromo provoca el cambio de posición de un pico o señal a una longitud de onda más larga, lo que se denomina desplazamiento batocrómico o rojo. Los grupos funcionales que contribuyen a los grupos batocómicos son sustituyentes como los grupos metilo, hidroxilo, alcoxi, halógeno y amino.
El auxocromo que provoca el cambio de posición de un pico o señal a una longitud de onda más corta se denomina desplazamiento hipsocrómico o azul. En realidad, la combinación de cromóforo y auxocromo se comporta como un nuevo cromóforo que tiene un máximo de absorción diferente (λmax). Por ejemplo, el benceno muestra λmáx . a 256 nm, mientras que la anilina muestra λmáx . a 280 nm. Por lo tanto, el grupo NH2 actúa como un auxocromo y provoca el cambio de λmax a un valor mayor.
| Instrumento | Resolución espectral | SBW Equivalente (nm) |
| UV5 | > 1.5 | < 2.0 |
| UV5Bio | > 1.5 | < 2.0 |
| UV5Nano | > 1.7 | < 1.5 |
| UV7 | > 1.9 | ≤ 1.0 |
La tabla muestra la resolución de los espectrofotómetros UV/VIS Excellence de METTLER TOLEDO, que se mide utilizando tolueno en hexano, y el ancho de banda espectral (SBW) equivalente.
El ancho de banda espectral (SBW) de un espectrofotómetro está relacionado con la anchura física de la rendija y la dispersión óptica del sistema monocromador. La resolución es la capacidad de un instrumento para separar la luz en regiones de longitud de onda finitas y distintas y para distinguir cada región finita. El ancho de banda espectral se usa típicamente para instrumentos de escaneo, mientras que la resolución se usa para instrumentos de matriz.
Para la mayoría de los propósitos cuantitativos de farmacopea, un ancho de banda espectral inferior a 2 nm es suficiente y el criterio de aceptación para la relación es 1.3. La resolución espectral puede usarse para compararla con el ancho de banda espectral.
| Fuente de luz | Rango de Longitud de Onda (nm) | Región | Tiempo de vida |
| Lámpara de filamento de tungsteno | 350 – 2500 | Vis + IR | 3,000 hr |
| Lámpara de arco de deuterio | 190 – 400 | UV | 1,000 hr |
| Lámpara de hidrógeno | 190 – 400 | UV | 1,000 hr |
| Lámpara de destello de xenón | 190 – 1100 | UV + Vis + NIR | 5,500 hr* |
* Corresponde a destellos de 50 Hz en operación constante.
La mejor fuente de luz sería aquella que proporcione buena intensidad con bajo ruido en todas las longitudes de onda del ultravioleta y visible, y que ofrezca estabilidad durante un largo período. Existe una variedad de fuentes de luz que se emplean comúnmente, como se mencionó anteriormente.
Las rejillas de difracción son generalmente mejores que los prismas para dividir diferentes longitudes de onda porque:
Resolución espectral más alta: Las rejillas pueden proporcionar una resolución espectral mucho más alta debido a su capacidad para producir múltiples órdenes de difracción nítidos, lo que permite una separación más fina de longitudes de onda poco espaciadas.
Dispersión lineal: La separación angular entre las longitudes de onda en una rejilla está más relacionada linealmente con la longitud de onda, lo que facilita el análisis y la calibración de espectros en comparación con la dispersión no lineal de los prismas.
Sin limitaciones de dispersión de material: Los prismas se basan en la dispersión del material (variación del índice de refracción con la longitud de onda), lo que puede limitar el rendimiento, especialmente en ciertos rangos de longitud de onda. Las rejillas utilizan efectos de interferencia, que no están limitados por las propiedades del material.
Amplio rango de longitud de onda: Las rejillas pueden funcionar de manera eficiente en una gama más amplia de longitudes de onda, incluidas las ultravioleta y el infrarrojo, mientras que los prismas tienen limitaciones de absorción y dispersión.
En general, las rejillas de difracción proporcionan una separación de longitud de onda más precisa y versátil que los prismas, por lo que se utilizan comúnmente en espectrómetros e instrumentos ópticos.
Las moléculas se pueden analizar mediante espectroscopia UV/Vis si poseen algún grupo funcional o conjugación, o si producen un complejo de color. Como los compuestos inorgánicos no contienen ningún grupo funcional o conjugación, el método común para analizarlos es por reacción con un compuesto adecuado. Esto produce un complejo de color cuya absorbancia se puede medir fotométricamente en la región visible y correlacionarse con su concentración real. Por ejemplo, el hierro se analiza comúnmente mediante una reacción con 1, 10-fentrolina para producir un complejo de color rojo. La absorbancia del complejo se mide a 570 nm para estimar la concentración de hierro.
A continuación se presenta la principal diferencia entre un espectrofotómetro de haz simple y uno de doble haz.
La división del haz en un espectrofotómetro de doble haz se logra de dos maneras:
El análisis de una muestra sólida se realiza principalmente estimando su absorbancia, transmitancia y reflectancia. Los parámetros comunes determinados para los polímeros sólidos incluyen % de transmitancia, longitud de onda de corte e índice de amarillez. La muestra está montada en un soporte diseñado específicamente para muestras sólidas y las lecturas se toman de la misma manera que para muestras líquidas. Un portamuestras sólido permite medir muestras sólidas como películas o vidrio.
La temperatura afecta los valores de absorbancia. Diferentes disolventes experimentan diferentes interacciones a diferentes temperaturas. Los parámetros de la solución que cambian debido a los cambios de temperatura son:
Los parámetros de rendimiento óptico como el ruido fotométrico, la precisión/repetibilidad de la longitud de onda, la repetibilidad fotométrica y la luz parásita no se ven afectados por la temperatura dentro de un rango de 10 a 40 °C.
Mientras que los parámetros ópticos como la resolución fotométrica (relación tolueno/hexano) y las longitudes de onda de precisión fotométrica (K2Cr2O7 en HClO4) muestran una dependencia de la temperatura que oscila entre 0,014 y -0,034/unidad dentro de 10 – 40 °C.
La luz parásita se define como la luz que llega al detector que no proviene de la fuente de luz del instrumento y no sigue la trayectoria óptica, lo que provoca una desviación en la longitud de onda correspondiente. Por lo tanto, la intensidad de la luz medida por el detector es más alta de lo que realmente debería ser. Por el contrario, esto también significa que la absorbancia medida es menor que la absorbancia real porque se reduce por la contribución de la luz parásita. Este efecto es más prominente a valores de absorbancia más altos (altas concentraciones de muestra).
Descargue el documento técnico para obtener más información sobre el origen y la medición precisa de la luz parásita:
El compartimento de muestras de los espectrofotómetros de matriz UV/Vis está abierto debido al hecho de que los instrumentos de matriz utilizan óptica inversa y la detección simultánea de todas las longitudes de onda del espectro.
Anika Adams is Senior Product Manager for UV/Vis Spectrophotometers at METTLER TOLEDO, where she focuses on driving innovation and optimizing customer workflows. With a degree in business administration and experience spanning software development, mechanical engineering, and production, Anika brings a multidisciplinary perspective to the laboratory business. Her expertise lies in automating and enhancing customer processes, ensuring both product excellence and customer satisfaction.
