Unaprijedite točnost svojih podataka dobrom praksom pipetiranja

Tekućine pod visokim tlakom pare mogu uzrokovati brze promjene koncentracije ako su predugo izložene zraku. Prethodno navlažite nastavak, radite brzo i držite posude zatvorene kad god je to moguće. Dosljedna tehnika aspiracije, uključujući mogućnost obrnutog pipetiranja, može pomoći u stabilizaciji volumena.

Budući da pipete s pozitivnim pomakom nemaju zračni razmak, preciznije su s tekućinama s visokim tlakom pare. Stoga se preporučuju ako je točnost ključna za primjenu. 

Odabir prave pipete uključuje procjenu vaših zahtjeva. Prvo, kakve uzorke pipetirate? Jesu li vodeni? Ili su viskozni, hlapljivi, pjenasti, korozivni ili opasni? Za vodene i gotovo vodene tekućine dobar su izbor najčešće pipete s istiskivanjem zraka (koje se nazivaju i pipete sa zračnim jastucima). Za viskozne, hlapljive i druge neobične vrste tekućina, pipeta s pozitivnim pomakom bila bi bolji izbor i zbog točnosti i sigurnosti. 

Koji ćete volumen pipetirati? Koliko uzoraka trebate prenijeti s jedne posude na drugu? Pogledajte ovu studiju o odabiru pipeta da biste saznali koja pipeta najbolje funkcionira ovisno o tekućini i drugim čimbenicima jedinstvenim za vašu situaciju.

Mikrofluidni testovi zahtijevaju beskompromisnu točnost. Stabilizirajte ruku za pipetiranje, upotrijebite visokokvalitetne nastavke dizajnirane za iznimno male količine i razmislite o obrnutom pipetiranju za poboljšanu konzistenciju. Redovita kalibracija, zajedno s kontrolom čimbenika okoliša poput temperature, podržava točnost na ovim ljestvicama. 

Rainin pipete, uparene s fino dizajniranim nastavcima za mikrovolumen, nude preciznu i pouzdanu kontrolu koja vam je potrebna za postizanje izvrsnih rezultata u vrhunskim mikrofluidnim eksperimentima.

Prilikom pipetiranja gustih otopina višekanalnom pipetom, mjehurići zraka uzrokuju pogreške volumena i kompliciraju mjerenja. Kako biste smanjili rizik od mjehurića, prethodno navlažite nastavke polako aspiriranjem i doziranjem 2-3 puta. Zatim polako aspirirajte, pazeći da su nastavci potpuno uronjeni tijekom izvlačenja kako biste smanjili zračne džepove. Obrnuto pipetiranje može pružiti dodatnu kontrolu u uzorcima sklonim mjehurićima. 

Budući da pipete s pozitivnim pomakom nemaju zračni razmak, manja je vjerojatnost da će mjehurići utjecati na njihovu točnost. Prilikom pipetiranja mnogih alikvota tekućina koje tvore mjehuriće, elektronička repetitorska pipeta kao što je Nanorep pomoći će u izbjegavanju problema. Ručne pipete s pozitivnim pomakom korisne su i kod eksperimenata s manjom propusnošću u kojima je točnost važna.

Prilikom usisavanja držite pipetu što bliže okomitoj osi i izbjegavajte kut veći od 20° od osi Y. Prilikom doziranja, ako dodirujete stijenku ciljne posude kako biste u potpunosti izvukli svu tekućinu iz nastavka, u redu je prekoračiti kut od 20°.

Pipetiranje prema naprijed standardna je tehnika pipetiranja i najbolji izbor za vodene uzorke. Za viskozne i hlapljive uzorke reverzno pipetiranje pruža bolju točnost.

Za prosljeđivanje pipete gurnite klip prema dolje do prvog graničnika dok držite pipetu izvan tekućine. Zatim uronite nastavak 2-10 mm duboko u tekućinu s kojom radite – ne dublje. Polako otpustite klip do potpunog izvlačenja kako biste usisali cijeli volumen tekućine. Za doziranje u ciljnu posudu, pomaknite pipetu u posudu, a zatim ravnomjerno pritisnite klip kroz prvi graničnik sve do drugog zaustavljanja – dokle god klip ide. Dok je klip potpuno pritisnut, lagano povucite nastavak pipete uz stijenku posude kako biste "dodirnuli". To pomaže u potpunom doziranju punog volumena tekućine. Otpustite klip, izbacite nastavak pipete, umetnite novi nastavak pipete i ponovite.

Za obrnutu pipetu gurnite klip do kraja kroz prvi graničnik do drugog graničnika – do kraja klipa. Zatim uronite nastavak u tekućinu i polako i ravnomjerno otpustite klip za aspiraciju. Pomaknite se do prihvatne posude i pritisnite klip SAMO DO PRVOG ZAUSTAVLJANJA kako biste dozirali točan volumen. Mali preostali volumen ostat će u nastavku pipete. Pomaknite pipetu preko posude za odbacivanje i doziranje i pritisnite klip do kraja do drugog graničnika, koji se naziva i graničnik za ispuhavanje, kako biste oslobodili preostalu tekućinu. 

Otpustite klip, izbacite nastavak pipete, umetnite novi nastavak pipete i ponovite.

Tražite više savjeta o tehnikama pipetiranja? Nabavite ovaj korisni poster za svoj laboratorij već danas! 

Pipeta za istiskivanje zraka može se koristiti za pipetiranje blago viskoznih tekućina, uključujući krv. Da biste postigli maksimalnu točnost, upotrijebite gore opisanu tehniku obrnutog pipetiranja. Za viskoznije tekućine, kao što je 85% glicerol ili Triton X-100, pipeta s pozitivnim pomakom nudi najbolju točnost i konzistenciju.

Blago hlapljive tekućine kao što je etanol mogu se pipetirati pipetom za istiskivanje zraka primjenom gore navedene tehnike obrnutog pipetiranja. Međutim, pipete s pozitivnim istisnom bolji su izbor za hlapljive tekućine. 

Ako upotrebljavate pipetu za istiskivanje zraka, prethodno isperite nastavak pipete (usisavajte i dozirajte) najmanje pet puta prije pipetiranja volumena. Time se uravnotežuje zrak unutar pipete, usporavajući brzinu isparavanja tekućine. Brzo isparavanje hlapljivih tekućina širi zrak unutar pipete i istiskuje tekućinu iz nastavka bez ikakvog pritiska na klip, a to smanjuje točnu isporuku volumena.

S hlapljivim tekućinama kao što je acetonitril općenito je bolje rukovati pipetom s pozitivnim istiskivanjem.

Da, pipetiranje pipetama za istiskivanje zraka može stvoriti aerosole. Aerosoli se mogu uzdići u unutrašnjost pipete i kontaminirati unutarnje zidove i klip. Aerosolizacija se događa lakše kada se klip prebrzo otpusti tijekom aspiracije, a može se dogoditi i u suprotnom smjeru izvan pipete s pretjerano brzim doziranjem. 

Da biste smanjili aerosole, aspirirajte i dozirajte polako i ravnomjerno. Koristite filtrirane savjete. 

Pipete s pozitivnim pomakom koriste nastavke u obliku štrcaljke koji sprječavaju aerosolizaciju. Pipeta s pozitivnim pomakom najbolji je izbor za pipetiranje opasnih tekućina i svih tekućina povišene viskoznosti ili hlapljivosti.

Vrlo hladne ili vruće tekućine mijenjaju tlak zraka u pipetama za istiskivanje zraka, što dovodi do netočnog pipetiranja. 

Na pipete s pozitivnim pomakom, s nastavcima u obliku štrcaljke koji nemaju zračni džep između tekućine i klipa, ne utječu različite temperature tekućina. Pipete s pozitivnim pomakom daju točne rezultate s tekućinama koje nisu sobne temperature.

Ako morate pipetirati vrlo vruću ili hladnu tekućinu pipetom za istiskivanje zraka, nemojte prethodno ispirati nastavak pipete – to je obično najbolja praksa za najveću točnost. Umjesto toga, brzo usisavajte i dozirajte kako biste smanjili učinak temperature tekućine na unutarnji zračni razmak pipete.

Kako biste izbjegli mjehuriće i pjenjenje tijekom pipetiranja, nemojte uranjati nastavak više od 10 mm u spremnik za tekućinu i polako usisavajte.

Obrnuto pipetiranje nudi dodatnu zaštitu jer prije usisavanja do kraja pritisnete klip do 2. graničnika, tako da nema šanse za ubrizgavanje zraka u tekući uzorak. Za više informacija o obrnutom pipetiranju posjetite ovu stranicu. 

Pipeta s pozitivnim pomakom ne stvara mjehuriće ili pjenu u interakciji s tekućinom jer njezin nastavak u obliku štrcaljke ne predstavlja zrak s kojim tekućina može stupiti u interakciju.

Dekontaminirajte pipetu brisanjem mokrom krpom i deterdžentom poput izopropanola ili 10% otopine izbjeljivača. Izbjegavajte prozirni plastični prozor mikrometra.

Autoklaviranje može biti još jedna opcija, ali provjerite specifikacije instrumenta pipete. Ako se može autoklavirati, je li cijeli instrument autoklaviran ili samo tekući nastavak?  Često se može autoklavirati samo tekući nastavak.

Za više informacija o čišćenju pipete nabavite plakat Čišćenje pipete A .

S reaktivnim kemikalijama mora se postupati pažljivo. Koristite svježe, inertne nastavke i redovito prskajte vanjsku stranu pipete etanolom kako biste uklonili prskanje i ostatke. Spriječite kontakt nastavcima s površinama i često mijenjajte nastavke za pipete kako biste spriječili unakrsni kontakt.

Široko cijenjene zbog sigurnog zahvaćanja nastavka i glatkog upravljanja klipom, Rainin pipete omogućuju siguran prijenos bez kontaminacije čak i pri radu s izazovnim, reaktivnim reagensima.

Točnost pipeta - ili istinitost, kako se sada naziva - razlika je između srednjeg volumena svih mjerenja (4-10 mjerenja) i zadanog volumena. Kada se raspravlja o preciznosti pipete, to se objašnjava kao standardna devijacija svih provedenih mjerenja. 

Nesigurnost pipete kvantitativni je izraz za njezinu ukupnu točnost. To je kombinacija istinitosti (mjera sustavne pogreške) i preciznosti (mjera slučajne pogreške). 

Jednadžba za neizvjesnost je: 

Nesigurnost = sustavna pogreška + slučajna pogreška * k. k (faktor pokrivenosti ili Z-rezultat) ovisi o broju mjerenja. k=3,31 za četiri mjerenja i 2 za deset mjerenja.

Dodatne informacije o nesigurnosti pipeta i osiguravanju točnosti potražite u ovoj studiji.