Améliorez vos données grâce à de bonnes pratiques de pipetage

Les liquides à forte pression de vapeur peuvent subir des variations rapides de concentration s’ils sont exposés trop longtemps à l’air. Pré-humidifiez l’embout, travaillez rapidement et gardez les récipients fermés autant que possible. Une technique d’aspiration constante, y compris la possibilité d’un pipetage inverse, peut aider à stabiliser les volumes.

Comme les pipettes à déplacement positif ne comportent pas de coussin d’air, elles sont plus précises avec les liquides à forte pression de vapeur. Elles sont donc recommandées lorsque la précision est essentielle pour l’application.

Le choix de la pipette adaptée implique d’évaluer vos besoins. Tout d’abord, de quel type d’échantillons s’agit-il ? Sont-ils aqueux ? Ou bien sont-ils visqueux, volatils, moussants, corrosifs ou dangereux ? Pour les liquides aqueux et quasi aqueux, les pipettes à déplacement d’air les plus courantes (également appelées pipettes à « coussin d’air ») constituent un bon choix. Pour les liquides visqueux, volatils et autres types de liquides atypiques, une pipette à déplacement positif serait un meilleur choix, tant pour la précision que pour la sécurité.

Quel volume allez-vous pipeter ? Combien d’échantillons devez-vous transférer d’un récipient à un autre ? Consultez ce livre blanc sur le choix des pipettes afin de comprendre quelle pipette fonctionne le mieux selon le liquide et d’autres facteurs propres à votre situation.

Les tests microfluidiques exigent une précision sans compromis. Stabilisez votre main de pipetage, utilisez des embouts de haute qualité conçus pour les volumes ultra-faibles et envisagez le pipetage inversé pour améliorer la régularité. Un étalonnage régulier, associé au contrôle de facteurs environnementaux tels que la température, contribue à la précision à ces échelles.

Les pipettes Rainin, associées à des embouts microvolumes finement conçus, offrent le contrôle précis et fiable dont vous avez besoin pour obtenir d’excellents résultats dans les expériences microfluidiques de pointe.

Lors du pipetage de solutions épaisses avec une pipette multicanaux, les bulles d’air introduisent des erreurs de volume et compliquent les mesures. Pour réduire le risque de bulles, pré-mouillez les pointes en aspirant puis en distribuant lentement 2 à 3 fois. Ensuite, aspirez lentement en vous assurant que les pointes restent entièrement immergées pendant toute l’aspiration afin de réduire les poches d’air. Le pipetage inversé peut offrir un contrôle supplémentaire avec les échantillons sujets aux bulles. 

Comme les pipettes à déplacement positif ne comportent pas de colonne d’air, les bulles risquent moins d’affecter leur précision. Lors du pipetage de nombreux aliquots de liquides qui forment des bulles, une pipette répétitive électronique comme Nanorep aidera à éviter les problèmes. Les pipettes manuelles à déplacement positif sont également utiles pour les expériences à faible débit où la précision est importante.

Lors de l’aspiration, tenez la pipette aussi verticalement que possible, en évitant tout angle supérieur à 20° par rapport à l’axe Y. Lors de la distribution, si vous touchez la paroi du récipient cible afin d’évacuer complètement tout le liquide de l’embout, il est acceptable de dépasser l’angle de 20°.

Le pipetage direct est la technique de pipetage standard et le meilleur choix pour les échantillons aqueux. Pour les échantillons visqueux et volatils, le pipetage inverse offre une meilleure précision.

Pour pipetter en mode direct, enfoncez le piston jusqu’au premier cran en maintenant la pipette hors du liquide. Plongez ensuite l’embout à 2-10 mm de profondeur dans le liquide avec lequel vous travaillez — pas plus profondément. Relâchez lentement le piston jusqu’à sa butée pour aspirer la totalité du volume de liquide. Pour distribuer dans votre récipient cible, placez la pipette dans le récipient, puis appuyez sur le piston à vitesse régulière en franchissant le premier cran jusqu’au second cran — aussi loin que possible. Le piston complètement enfoncé, faites légèrement glisser l’embout de la pipette le long de la paroi du récipient pour « essuyer l’extrémité ». Cela aide à distribuer complètement le volume total de liquide. Relâchez le piston, éjectez l’embout de pipette, mettez un nouvel embout et recommencez.

Pour pipeter en mode inverse, enfoncez complètement le piston en traversant le premier cran jusqu’au second cran — aussi loin que possible. Plongez ensuite l’embout dans le liquide et relâchez lentement et régulièrement le piston pour aspirer. Déplacez-vous vers le récipient de réception et appuyez sur le piston UNIQUEMENT JUSQU’AU PREMIER CRAN pour distribuer le volume correct. Un faible volume résiduel restera dans l’embout de la pipette. Placez la pipette au-dessus d’un récipient de rejet et de distribution, puis enfoncez le piston jusqu’au second cran, également appelé cran de « soufflage », afin de libérer tout liquide restant.

Relâchez le piston, éjectez l’embout de pipette, mettez un nouvel embout et recommencez.

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Une pipette à déplamcenet d'air peut être utilisée pour pipeter des liquides légèrement visqueux, y compris le sang. Pour obtenir une précision maximale, utilisez la technique de pipetage inverse décrite ci-dessus. Pour les liquides plus visqueux, tels que le glycérol à 85 % ou le Triton X-100, une pipette à déplacement positif offre la meilleure précision et la plus grande constance.

Les liquides légèrement volatils, tels que l’éthanol, peuvent être pipetés avec une pipette à déplacement d’air en utilisant la technique de pipetage inverse mentionnée ci-dessus. Cependant, les pipettes à déplacement positif constituent un meilleur choix pour les liquides volatils.

Si vous utilisez une pipette à déplacement d’air, pré-rincez l’embout de la pipette (aspirer et distribuer) au moins cinq fois avant de prélever votre volume. Cela permet d’équilibrer l’air à l’intérieur de la pipette, ralentissant le taux d’évaporation du liquide. L’évaporation rapide des liquides volatils dilate l’air à l’intérieur d’une pipette et force le liquide à sortir de l’embout sans qu’aucune pression ne soit exercée sur le piston, ce qui réduit la précision du volume distribué.

Les liquides volatils tels que l’acétonitrile sont généralement mieux manipulés avec une pipette à déplacement positif.

Oui, le pipetage avec des pipettes à déplacement d’air peut créer des aérosols. Les aérosols peuvent remonter à l’intérieur de la pipette et contaminer les parois internes ainsi que le piston. L’aérosolisation se produit plus facilement lorsque le piston est relâché trop rapidement pendant l’aspiration et peut également se produire dans le sens inverse, à l’extérieur de la pipette, lors d’une distribution trop rapide.

Pour minimiser la formation d’aérosols, aspirez et distribuez lentement et régulièrement. Utilisez des embouts filtrés.

Les pipettes à déplacement positif utilisent des embouts de type seringue qui empêchent l’aérosolisation. Une pipette à déplacement positif est le meilleur choix pour le pipetage de liquides dangereux et de tout liquide à viscosité ou volatilité élevée.

Les liquides très froids ou très chauds modifient la pression de l’air à l’intérieur des pipettes à déplacement d’air, ce qui entraîne un pipetage inexact.

Les pipettes à déplacement positif, avec des embouts de type seringue qui ne présentent aucune poche d’air entre le liquide et le piston, ne sont pas affectées par les différentes températures des liquides. Les pipettes à déplacement positif fournissent des résultats précis avec des liquides à une température différente de celle ambiante.

Si vous devez pipeter un liquide très chaud ou très froid avec une pipette à déplacement d’air, ne pré-rincez pas l’embout de la pipette — c’est généralement la meilleure pratique pour obtenir la plus grande précision. Aspirez et dispensez plutôt rapidement afin de minimiser l’effet de la température du liquide sur la poche d’air interne de la pipette.

Pour éviter les bulles et la formation de mousse lors du pipetage, n’immergez pas l’embout à plus de 10 mm dans le réservoir de liquide et aspirez lentement.

Le pipetage inversé offre une protection supplémentaire car, avant d’aspirer, vous enfoncez complètement le piston jusqu’au 2e cran, de sorte qu’il n’y a aucun risque d’injecter de l’air dans l’échantillon liquide. Pour en savoir plus sur le pipetage inversé, consultez cette page. 

Une pipette à déplacement positif ne crée ni bulles ni mousse lors du contact avec un liquide, car son embout de type seringue ne présente pas d’air avec lequel le liquide puisse interagir.

Décontaminez une pipette en l’essuyant avec un chiffon humide et un détergent comme l’isopropanol ou une solution de javel à 10 %. Évitez la fenêtre transparente en plastique du micromètre.

L’autoclavage peut être une autre option, mais vérifiez les spécifications de votre pipette. Si elle est autoclavable, faut-il autoclaver l’instrument entier ou seulement l’extrémité en contact avec le liquide ? Souvent, seule l’extrémité en contact avec le liquide peut être autoclavée.

Pour en savoir plus sur le nettoyage d’une pipette, procurez-vous l’affiche « Nettoyage d’une pipette ».

Les produits chimiques réactifs doivent être manipulés avec précaution. Utilisez des embouts neufs et inertes, et vaporisez régulièrement de l’éthanol sur l’extérieur de la pipette pour éliminer les éclaboussures et les résidus. Évitez tout contact de l’embout avec les surfaces et changez fréquemment les pointes de pipette pour prévenir toute contamination croisée.

Largement reconnues pour leur engagement sûr des embouts et le contrôle fluide du piston, les pipettes Rainin permettent des transferts sûrs, sans contamination, même lors du travail avec des réactifs difficiles et réactifs.

L’exactitude d’une pipette — ou justesse, comme on l’appelle désormais — correspond à la différence entre le volume moyen de toutes les mesures (4 à 10 mesures) et le volume réglé. Lorsqu’on parle de la précision d’une pipette, celle-ci s’explique comme l’écart type de l’ensemble des mesures effectuées.

L’incertitude d’une pipette est le terme quantitatif qui désigne sa précision globale. Elle est une combinaison de la justesse (une mesure de l’erreur systématique) et de la fidélité (une mesure de l’erreur aléatoire).

L’équation de l’incertitude est :

Incertitude = Erreur systématique + Erreur aléatoire * k. k (facteur de couverture ou score Z) dépend du nombre de mesures. k = 3,31 pour quatre mesures et 2 pour dix mesures.

Pour en savoir plus sur l’incertitude des pipettes et sur la manière de garantir leur exactitude, téléchargez ce livre blanc.