Kyveta na spektrofotometrické meranie je malá, číra hranatá nádobka dostupná vo vyhotoveniach z rôznych materiálov v rôznych rozmeroch a úrovniach kvality. Sklené kyvety sa používajú na meranie vo viditeľnom spektre od 320 do 2500 nm. Kremenné kyvety poskytujú presné výsledky v celom UV a viditeľnom spektre od 200 do 2500 nm. Čím menšia výrobná tolerancia, tým lepšie a opakovanejšie sú merania.
Kyvety Standard a Excellence sú k dispozícii s dĺžkou optickej dráhy (OPL) 10 a 50 mm a v dvoch sklených verziách: z optického skla (O) pre viditeľné spektrum a z kremenného skla (Q) na rozšírené meranie v UV spektre. Portfólio dopĺňajú špeciálne mikrokyvety a prietokové kyvety pre potreby rôznych aplikácií a automatizácie.
Kyvety Excellence zaisťujú vynikajúcu rovnobežnosť okienok s malou toleranciou dĺžky optickej dráhy – len ±0,01 mm. Vďaka tomu poskytujú presnosť potrebnú vo farmaceutických a výskumných aplikáciách.
Kyvety Standard aj Excellence sú určené na dlhodobé používanie. Vďaka tomu sú šetrné k životnému prostrediu a zároveň aj k vášmu rozpočtu, lebo nemusíte stále nakupovať jednorazové plastové kyvety.
Poskytujeme servis a podporu pre meracie zariadenia po celú dobu životnosti od inštalácie cez preventívnu údržbu a kalibráciu až po opravy zariadení.
Kyveta používaná na meranie vzorky je súčasťou optického systému spektrofotometra. Preto môže mať pozícia, geometria a stav kyvety vplyv na presnosť a precíznosť merania absorbancie a tieto charakteristiky treba starostlivo kontrolovať.
Dĺžka optickej dráhy kyvety je vzdialenosť, ktorú svetlo prejde cez vnútorné steny kyvety.
Na bežnej spektrometrickej kyvete je dĺžkou optickej dráhy vnútorná vzdialenosť od predného okienka po zadné. Štandardná dĺžka optickej dráhy kyvety je 10 mm.
Materiál kyvety môže v závislosti od vlnovej dĺžky vyvolať svoju vlastnú absorbanciu. Kremenné kyvety sú úplne priehľadné v celom rozsahu merania (UV/VIS). Jednorazové plastové kyvety sú často priehľadné len vo viditeľnom rozsahu spektra. Preto výber kyvety závisí hlavne od aplikácie.
Podľa Lambertovho-Beerovho zákona je absorbancia priamo úmerná dĺžke optickej dráhy kyvety a koncentrácii vzorky. Výberom ideálnej dĺžky optickej dráhy (napr. od 1 do 5 mm) možno eliminovať potrebu riedenia. Najpresnejšie výsledky možno získať pri absorbancii v rozsahu od 0,2 do 1,5 A. V prípade vzoriek s vysokou koncentráciou je ideálny mikroobjemový prístroj s veľmi krátkou optickou dráhou (1 alebo 0,1 mm).
Podľa osvedčeného postupu merania by kyveta mala medzi jednotlivými meraniami ostať v držiaku. Ak sa vyberie, treba dávať pozor, aby sa vždy vrátila späť do držiaka v tom istom smere, t. j. etiketou smerom k zdroju svetla. Tým sa zabezpečí, že budú optické účinky pri referenčnom meraní a pri meraní vzorky identické.
Na dosiahnutie dobrých výsledkov je potrebné vykonať referenčné meranie a meranie vzorky pomocou toho istého typu kyvety.
Kyvety musia mať okienka vyrobené z materiálu, ktorý je priehľadný v cieľovej oblasti spektra.
Najlepšie výsledky merania v UV spektre dosiahnete pri použití UV priehľadného skla, ako je kremenné sklo alebo sklo SUPRASIL®.
SUPRASIL® je ochranná známka spoločnosti Heraeus (kremenné sklo).
Vo viditeľnom rozsahu (>400 nm) sa často používa optické sklo alebo jednorazové kyvety z PMMA (polymetylmetakrylátu) alebo PS (polystyrénu).
Jednorazové kyvety vyrobené z polymetylmetakrylátu absorbujú svetlo v UV spektre a pôsobia ako cut-off filter, meranie v UV rozsahu je preto nepresné a do úvahy by sa mali brať iba výsledky merania vo viditeľnom rozsahu.
Pred použitím vzorku zamiešajte, najmä ak resuspendujete nukleové kyseliny alebo proteíny. Neplňte kyvety pomocou sklených pipiet – mohlo by dôjsť k poškrabaniu optického povrchu. Ideálne sú pipety s jednorazovými plastovými špičkami. Nechajte roztok natiecť do kyvety po sklenej stene tak, aby nevznikli bublinky. Neplňte kyvetu na viac ako 80 % jej objemu.
Okienka kyvety, cez ktoré prechádza svetlo, je potrebné vyčistiť pred každým použitím. Na dôkladné vyčistenie zvnútra aj zvonku použite 60 % izopropanol/deionizovaný vodný roztok a povrch utrite čistiacou handričkou na optiku alebo inou handričkou bez žmolkov (aby nedošlo k poškrabaniu).
Aby nedochádzalo k vyššej absorbancii, kyvety je potrebné dôkladne vyčistiť pred použitím aj po ňom. Dávajte pozor najmä na to, aby ste sa po vyčistení už nedotýkali okienok. Vzorku ihneď po meraní odstráňte, aby nedošlo k poškodeniu kyvety odparovaním rozpúšťadiel.
Vyššia absorbancia sa nameria, ak sú na okienkach kyvety usadené zvyšky, napríklad odtlačky prstov alebo mastnota, ktoré pôsobia ako ďalšie absorpčné zložky. Možno tomu predísť dôkladným vyčistením pred aj po použití. Dávajte veľký pozor najmä na to, aby ste sa po vyčistení už nedotýkali okienok.
Kyvety držte len za nepriehľadné steny a dávajte pozor, aby ste na nich nenechali odtlačky prstov.
Kyvetu umiestnite priehľadnou stranou do svetelného lúča a dbajte pri tom, aby etiketa na prázdnej kyvete aj na kyvete so vzorkou bola otočená v tom istom smere. Dávajte pozor, aby kyveta nebola šikmo a aby bola úplne posadená v držiaku. Kyveta sa už potom nesmie hýbať.
Viečko, ktoré sa obyčajne dodáva spolu s kyvetou, sa používa na obmedzenie vyparovania vzoriek alebo absorpcie vody z okolitého vzduchu v prípade hydrofilných vzoriek.
Prietokové články treba po každej sérii meraní úplne vyprázdniť. Aby na optickom okienku nedošlo ku kalcifikácii, vnútro prietokového článka prepláchnite acetónom a potom riadne osušte tak, aby sa odstránili všetky zvyšky acetónu.
Na krátkodobé uloženie sú k dispozícii špeciálne držiaky na kyvety. Dlhodobejšie by sa kyvety mali skladovať v dodanom balení, aby sa sklený povrch nepoškrabal a nezaprášil.
Podľa osvedčeného postupu merania by kyveta mala medzi jednotlivými meraniami ostať v držiaku. Ak sa vyberie, treba dávať pozor, aby sa vždy vrátila späť do držiaka v tom istom smere, t. j. etiketou smerom k zdroju svetla. Tým sa zabezpečí, že budú optické účinky pri referenčnom meraní a pri meraní vzorky identické. Vďaka vynikajúcim výrobným toleranciám kyviet METTLER TOLEDO Excellence táto preferovaná orientácia nie je nevyhnutná, lebo rozdiely v absorbancii pri otočení o 180° sú zanedbateľné.
Ak sú na okienkach kyvety usadené zvyšky, napríklad odtlačky prstov alebo mastnota, pôsobia ako ďalšie absorpčné zložky a nameria sa vyššia absorbancia. Možno tomu predísť dôkladným vyčistením pred aj po použití. Dávajte veľký pozor najmä na to, aby ste sa po vyčistení už nedotýkali okienok.
Kyveta je malá hranatá skúmavka na vodné vzorky. Má rovné steny vyrobené z číreho, priehľadného materiálu. Niekedy sa volajú aj články alebo kapiláry. Kyvety sa používajú pri spektrofotometrickom meraní na určovanie absorbancie pri konkrétnej vlnovej dĺžke.
Ak sa na vyleštenom okienku kyvety nachádzajú škrabance alebo drobné prasklinky, nemala by sa viac používať na meranie, lebo výsledky sa skreslia alebo sa kyveta môže vnútri spektrofotometra rozbiť. V prípade opravy živicou alebo lepidlom by sa narušila kvalita merania. Preto sa oprava poškodených kyviet neodporúča.
Prázdna kyveta sa používa na kalibráciu spektrofotometra pred meraním neznámeho roztoku. Hodnota zo spektrografu sa odčítava vzhľadom na hodnotu prázdnej kyvety. Odčítanú hodnotu môžu totiž ovplyvniť rôzne faktory prostredia, napríklad prach, teplota alebo vlhkosť. Na elimináciu všetkých vonkajších faktorov sa od výsledkov merania vzorky v kyvete odčítajú výsledky prázdnej kyvety.
Optické sklo METTLER TOLEDO: vlnová dĺžka 320 – 2500 nm, transmisia >80 %, opakovane použiteľné, viditeľné spektrum
Kremenné sklo METTLER TOLEDO: vlnová dĺžka 200 – 2500 nm, transmisia >82 %, opakovane použiteľné, UV VIS spektrum
Najčastejšie sú štandardné 10 mm makrokyvety s objemom 3,5 ml (3500 µl). Objem kyvety možno vypočítať jednoducho: vnútorná dĺžka × vnútorná šírka × vnútorná výška × 80 % = objem kyvety.
Kalibrovaný pár kyviet sú dve kyvety z rovnakého materiálu, ktoré majú rovnakú dĺžku optickej dráhy. Vzhľadom na stanovené výrobné tolerancie sa kalibrovaním páru kyviet zabezpečujú porovnateľné výsledky. Kyvety METTLER TOLEDO sa vyrábajú s toleranciami len ±0,01 mm, a preto ich nie je potrebné kalibrovať ako pár.