Kalibrácia UV Vis

Spektrofotometre UV/VIS radu Excellence sa testujú podľa postupov definovaných v liekopise USA (USP) 43 – NF 38 a v Európskom liekopise (Ph. Eur.) vydanie 10. Vykonávajú sa testy nasledujúcich parametrov:

• Presnosť vlnovej dĺžky
• Fotometrická presnosť
• Fotometrická opakovateľnosť
• Fotometrická linearita*
• Rozptýlené svetlo
• Rozlíšenie

Testujú sa tiež parametre, ktoré nevyžadujú liekopisy USP ani Ph. Eur.:

• Opakovateľnosť vlnovej dĺžky
• Fotometrický šum
• Plochosť základnej hodnoty
• Fotometrický posun

Vďaka komplexnosti testov je zaistené, že sa posudzujú všetky aspekty výkonu spektrofotometrov. Naše spektrofotometre UV7 radu Excellence vyhovujú tým najprísnejším požiadavkám, ktoré sú podrobnejšie opísané nižšie.

*Fotometrická linearita sa už v 43. vydaní výslovne neuvádza. Fotometrická presnosť sa musí testovať v zamýšľanom prevádzkovom rozsahu. Preto spoločnosť METTLER TOLEDO stále odporúča test fotometrickej linearity.

Presnosť vlnovej dĺžky hodnotí schopnosť prístroja verne reprodukovať vlnové dĺžky. Meranie presnosti vlnovej dĺžky umožňuje určiť, či dochádza k posunom alebo k nesprávnemu zarovnaniu osi vlnovej dĺžky.

Vhodné referenčné materiály na určenie presnosti vlnových dĺžok by mali vykazovať úzke a dobre definované vrcholy. Na tento účel sa často používa roztok oxidu holmia.

Liekopisy USP a Ph. Eur. uvádzajú rôzne akceptačné kritériá v závislosti od použitého referenčného materiálu a rozsahu jeho vlnových dĺžok. Pre kvapalné referenčné materiály platia tieto kritériá:

USP: ±1 nm pod 400 nm, ±2 nm nad 400 nm
Ph. Eur.: ±1 nm pod 400 nm, ±3 nm nad 400 nm

Podľa liekopisov USP a Ph. Eur. sa v prípade mriežkových spektrofotometrov nevyžaduje presnosť (alebo opakovateľnosť) vlnovej dĺžky. Vďaka absencii pohyblivých častí nedochádza k nesprávnemu zarovnaniu mriežkových prístrojov medzi meraniami.

Fotometrická presnosť je miera schopnosti prístroja správne merať absorbanciu a poskytnúť údaje o hodnotách absorbancie, ktoré sa čo najviac približujú k skutočnej hodnote.

Fotometrickú presnosť možno stanoviť meraním tuhých alebo kvapalných filtrov so známymi hodnotami koncentrácie a absorbancie, a porovnaním nameranej absorbancie s referenčnými hodnotami absorbancie.

Pre ultrafialové pásmo sa používa roztok dichrómanu draselného (PDC) 60 mg/l, zatiaľ čo viditeľný rozsah pokrýva filter s neutrálnou hustotou (ND) 0,5 A. Pre oba liekopisy platia rovnaké akceptačné kritériá, ktoré závisia od úrovne absorbancie referenčného materiálu.

PDC: ±0,010 A pod 1,0 A; ±1,0 % (0.010*A) nad 1,0 A
ND: ±0,008 A pod 1,0 A; ±0,8 % (0.008*A) nad 1,0 A

Podľa liekopisov USP a Ph. Eur. sa v prípade mriežkových spektrofotometrov nevyžaduje presnosť (alebo opakovateľnosť) vlnovej dĺžky. Vďaka absencii pohyblivých častí nedochádza k nesprávnemu zarovnaniu mriežkového prístroja medzi meraniami.

Fotometrická opakovateľnosť, ktorú liekopis USP označuje aj ako fotometrickú presnosť, definuje schopnosť spektrofotometra spoľahlivým a opakovateľným spôsobom poskytovať údaje o hodnotách absorbancie pri viacerých meraniach.

Používajú sa rovnaké referenčné materiály ako pri určovaní fotometrickej presnosti. Filtre sa merajú šesťkrát a na posúdenie opakovateľnosti sa vypočíta štandardná odchýlka naprieč všetkými meraniami.

Štandardná odchýlka nesmie prekročiť 5 mA pod 1 A alebo 0,5 % nad 1 A, bez ohľadu na použitý referenčný materiál alebo rozsah vlnových dĺžok.

Poznámka: Fotometrickú opakovateľnosť nevyžaduje liekopis Ph. Eur.

Fotometrická linearita je miera linearity nameraných hodnôt (napr. absorbancie) ako funkcie zvyšujúcej sa koncentrácie. Je obzvlášť dôležitá pre kvantitatívne aplikácie.

Fotometrická linearita sa dá určiť rovnakými postupmi a použitím rovnakých filtrov ako pri určovaní fotometrickej presnosti. Vyhodnocujú sa však tri koncentrácie a používajú sa rôzne filtre pokrývajúce rozsah od 0 A do 2 A.

Liekopisy USP a Ph. Eur. stanovujú pre fotometrickú linearitu rôzne akceptačné kritériá:

Ph. Eur.: korelačný koeficient R2 musí prekročiť hodnotu 0,999.
USP: namerané hodnoty pri všetkých koncentráciách/filtroch musia spĺňať kritériá fotometrickej presnosti.

Rozptýlené svetlo je definované ako svetlo dopadajúce na detektor, ktorý však nie je súčasťou analýzy. Spôsobuje odklon pri zodpovedajúcej vlnovej dĺžke, nepochádza však z príspevku meranej vzorky. Absorbancia vzorky je preto pozmenená rozptýleným svetlom a výsledky vzorky obsahujú systematickú chybu.

Rozptýlené svetlo sa stanovuje meraním cut-off filtra (vodný roztok chloridu draselného) pomocou metódy špecifickej vlnovej dĺžky (SWM) a metódy filtračného pomeru roztoku (SFRM).

Liekopisy USP a Ph. Eur. stanovujú pre KCl nasledujúce akceptačné kritériá:

SWM: Amax ≥ 2,0 A
SFRM: Amax ≥ 0,7 A

Rozlíšenie definuje rozlišovaciu schopnosť spektrofotometra UV Vis a jeho schopnosť rozlíšiť susediace štruktúry v spektre.

Rozlíšenie sa stanovuje meraním roztoku toluénu v n-hexáne. Na posúdenie rozlíšenia sa používa absorpčné minimum a maximum ostrého a dobre definovaného vrcholu.

V liekopise USP sa uvádza, že na zabezpečenie dostatočného rozlíšenia musí pomer medzi minimálnou a maximálnou absorbanciou pri príslušných vlnových dĺžkach 267 a 269 nm prekročiť hodnotu 1,3. V liekopise Ph. Eur. je akceptačné kritérium uvedené v samostatnej monografii.

Na rozdiel od skenovacích spektrofotometrov UV Vis nemajú mriežkové prístroje fyzickú štrbinu, ktorá by definovala spektrálnu šírku pásma (SBW) prístroja mechanicky. Ekvivalentná SBW mriežkového prístroja sa dá vypočítať z rozlíšenia prístroja.
Napríklad spektrofotometer UV7 radu Excellence má rozlíšenie ≥ 1,9, čo zodpovedá hodnote SBW ≤ 1,0 nm.

Testy definované vyššie je možné vykonať buď ručne, alebo automaticky. Pri ručných metódach však hrozí riziko zníženej presnosti. Ručné pracovné postupy sú časovo náročné a náchylné na vznik chýb. Automatizované overovanie výkonu ponúka nasledujúce výhody:

• Rýchlejšie výsledky so sledovateľnou dokumentáciou a overením výsledkov.
• Možnosť vyhnúť sa chybám pri vykonávaní pracovného postupu a prepise údajov, testy sa nemusia opakovať.
• Súlad s normami na zaistenie integrity údajov. Ide o významný prínos z hľadiska spravovania údajov v zhode s požiadavkami noriem FDA.
• Rýchla návratnosť investícií vďaka zvýšenej produktivite a bezpečnosti.

Zhoda s právnymi predpismi je hlavným cieľom všetkých farmaceutických výrobcov a ich dodávateľov. Podľa nariadení GMP je potrebné overovať výrobné procesy a analytické metódy. Vybavenie používané na výrobu a kontrolu kvality však súčasne vyžaduje kvalifikáciu.

Aby spoločnosť METTLER TOLEDO podporila zákazníkov pri plnení tejto požiadavky dodržiavania zhody s právnymi predpismi, ponúka balík EQPac pre spektrofotometre radu UV/VIS. Balík EQPac je servisné riešenie špeciálne navrhnuté na zaistenie zhody s právnymi predpismi v dnešnom náročnom prostredí regulovanom mnohými normami. Prináša plne zdokumentovanú profesionálnu inštalačnú a kvalifikačnú službu priamo na mieste inštalácie s cieľom zaistiť zhodu s právnymi predpismi a spoľahlivú prevádzku.

Prečítajte si viac o našej službe kvalifikácie zariadení a službe kalibrácie spektrofotometra UV/VIS.