Kyvetter för spektrofotometrar

Kyvetten som används för att mäta ett prov är en del av spektrofotometerns optiska system. Därför kan kyvettens position, geometri och skick ha en inverkan på exaktheten och noggrannheten för absorberingsmätningar och ska därmed kontrolleras med omsorg.

En kyvetts optiska banlängd är avståndet mellan ljuset som går igenom en kyvetts invändiga väggar.

På en spektrometerkyvett av standardtyp kommer ljusbanan eller banlängden vara det invändiga avståndet från fram- till bakfönstret. Den optiska banlängden för en standardkyvett är 10 mm.

Kyvettens material kan orsaka dess egen absorbering beroende på våglängden. Kvartskyvetter är helt genomskinliga över hela mätningsområdet (UV/Vis). Ganska ofta är engångskyvetter i plast endast genomskinliga i spektrumets synliga intervall. Därför beror kyvettvalet huvudsakligen på applikationen.

Enligt Beer-Lambert-lagen, är absorbering direkt proportionell till kyvettens banlängd och provets koncentration. Genom att välja den perfekta banlängden (t.ex. från 1 mm till 5 cm) kan man slippa utspädningar. Absorbering inom intervallet 0,2 A till 1,5 A genererar de mest noggranna resultaten. Ett mikrovolyminstrument med mycket kort banlängd (1 mm eller 0,1 mm) är perfekt för mycket koncentrerade prover.

För bästa mätningspraxis ska kyvetten förbli i kyvetthållaren mellan mätningarna. Om den tas bort ska man vara försiktig med att alltid positionera kyvetten i samma riktning som kyvetthållaren, dvs. med etiketten riktad mot ljuskällan. Detta säkerställer att de optiska effekterna är identiska för både referens- och provmätningar.

För bästa resultat måste referens- och provmätningar utföras med samma typ av kyvett.

Kyvetter måste ha fönster tillverkade i ett material som är genomskinligt inom det spektrum man är intresserad av.

För bäst resultat för mätningar inom UV-intervallet, måste man använda UV-genomskinligt glas, till exempel kvartsglas eller SUPRASIL^®-glas.

SUPRASIL^® är ett varumärke tillhörande Heraeus (kvartsglas)

För synligt intervall (>400 nm) används ofta optiskt glas eller engångskyvetter av typen PMMA (polymetylmetakrylat) eller PS (polystyren).

Engångskyvetter tillverkade i polymetylmetakrylat absorberar i UV-intervallet och agerar som ett bortkopplingsfilter och gör mätningar i UV-intervallet felaktigt och ska endast tas i beaktning för mätningar inom det synliga intervallet.

Blanda provet ordentligt innan användning, särskilt när nukleinsyror eller proteiner suspenderas på nytt. Undvik att använda glaspipetter för att fylla kyvetten då de kan repa den optiska ytan. Pipetter med engångsspetsar i plast passar perfekt. Låt lösningen rinna längs glasväggen in i kyvetten för att undvika bubbelbildning. Överfyll inte över 80 % av dess kapacitet.

En kyvetts fönster, genom vilket ljuset passerar, måste rengöras före varje användning. För noggrann invändig och utvändig rengöring ska du använda en 60 % isopropanol/avjoniserad vattenlösning och torka av med en optisk rengöringstrasa eller luddfri trasa (för att undvika att ludd repar ytan).

För att undvika högre absorberingar ska kyvetter rengöras ordentligt före och efter användning. Man måste vara mycket noga med att inte nudda fönstren efter rengöringen är klar. Provet ska tas bort omgående efter att mätningen för att undvika eventuell skada på kyvetten från avdunstande lösningar.

Högre absorberingar mäts om rester som fingeravtryck eller fett finns lagrade på kyvettfönstret, då det finns ytterligare absorberingskomponenter. Detta kan undvikas genom omfattande rengöring före och efter användning. Man måste vara mycket noga med att inte nudda fönstren efter rengöringen är klar.

Håll endast i kyvetten på de frostade sidorna och var försiktig med att inte lämna några fingeravtryck på kyvetten.

Positionera kyvetten med den genomskinliga sidan i ljusstrålen och säkerställ att blankprovet och provkyvettetiketten är riktade åt samma håll. Se till att kyvetten inte är vinklad och att den sitter helt fast i kyvetthållaren. Kyvetten får inte röra på sig mer.

För att begränsa avdunstning av lösning eller vattenabsorbering från rumsluften, utifall hydrofilprover, ska du använda locket som vanligtvis medföljer kyvetten.

Flödescellen måste alltid vara helt tömd efter ett antal mätningar. För att undvika förkalkning på det optiska fönstret, ska insidan av flödescellen sköljas med aceton och därefter torkas ordentligt för att ta bort eventuella acetonrester.

För kortsiktig lagring, finns det särskilda kyvetthållare. För långsiktig användning ska man använda den medföljande lådan för att undvika repor och damm på glasytan.

För bästa mätningspraxis ska kyvetten förbli i kyvetthållaren mellan mätningarna. Om den tas bort ska man vara försiktig med att alltid positionera kyvetten i samma riktning som kyvetthållaren, dvs. med etiketten riktad mot ljuskällan. Detta säkerställer att de optiska effekterna är identiska för både referens- och provmätningar. Tack vare METTLER TOLEDO Excellence-kyvetternas enastående tillverkningstoleranser krävs inte den föredragna riktningen då absorberingsskillnader på 180 grader är marginella.

Högre absorberingar mäts om rester som fingeravtryck eller fett finns lagrade på kyvettfönstret, då det finns ytterligare absorberingskomponenter. Detta kan undvikas genom omfattande rengöring före och efter användning. Man måste vara mycket noga med att inte nudda fönstren efter rengöringen är klar.

En kyvett är ett litet rektangulärt rör för att hålla vattenbaserade prover. Det har raka sidor tillverkade i klart, genomskinligt material. En del kallar dem även celler eller kapillärer. Kyvetter används i spektrofotometriska mätningar för att mäta absorberingen i en specifik våglängd.

Om en kyvett visar repor eller mindre sprickor i det polerade fältet ska det inte användas för ytterligare mätningar då resultatet blir fördärvat eller så kan kyvetten gå sönder inuti spektrofotometern. Allt hartsmaterial som används för att reparera eller limma kyvetten skulle påverka mätningskvaliteten. Därför rekommenderas det inte att reparera en kyvett som gått sönder.

En blank kyvett används för att kalibrera spektrofotometerns avläsningar innan du mäter en okänd lösning. Avläsningen av spektrografen är relativ till den blanka kyvetten. Det finns miljöfaktorer som kan påverka avläsningen, till exempel damm, temperatur och luftfuktighet. För att eliminera alla de externa faktorerna tas spektrografens avläsningar av den blanka kyvetten bort från avläsningarna från provlösningskyvetten

METTLER TOLEDO optiskt glas: 320 – 2500 nm våglängd; >80 % överföringshastighet; återanvändbar; synligt spektrum

METTLER TOLEDO kvartsglas: 200 – 2500 nm våglängd; >82 % överföringshastighet; återanvändbar; UV-synligt spektrum

Den vanligaste kapaciteten är 3,5 ml (3500 µL) i en standard 10 mm makrokyvett. Volymen för en kyvett kan enkelt beräknas: invändig längd x utvändig bredd x invändig höjd x 80 % = kyvettvolym

En matchad parkyvett beskriver två kyvetter av samma material som har samma optiska banlängd. På grund av tilldelade tillverkningstoleranser säkerställer matchade par jämförbara mätningar. METTLER TOLEDO Excellence-kyvetter säkerställer tillverkningstoleranser på endast ± 0.01 mm , och behöver därmed ingen matchning.