Espectrofotómetro UV-VIS

La espectroscopia UV-VIS es una técnica sencilla y de uso común que se basa en la absorción de luz en una muestra concreta. En función de la cantidad de luz y la longitud de onda absorbidas por la muestra, se puede obtener información valiosa, como la concentración o la pureza de una muestra, por ejemplo, en el siguiente espectro de cafeína. Además, debido a que cada sustancia absorbe la luz de forma distinta, existe una relación única y específica entre la sustancia y su espectro UV-VIS. La espectrofotometría se puede usar para identificar una sustancia.

Un espectrofotómetro UV-VIS mide la intensidad de la luz que atraviesa una solución de muestra en una cubeta y la compara con la intensidad de la luz antes de atravesar la muestra. Los componentes principales de un espectrofotómetro UV-VIS son una fuente de luz, un portamuestras, un dispositivo de dispersión para separar las distintas longitudes de onda de la luz y un detector adecuado, por ejemplo, un detector de fotodiodo.

Existen cinco motivos principales por las que se miden los espectros UV-VIS:

• Los espectros UV-VIS identifican los componentes presentes en una solución de muestra. De forma más precisa, la posición óptima y, en cierta medida, el perfil del espectro, permiten identificar compuestos específicos.
  
• Los picos de absorción se pueden usar para cuantificar la muestra investigada. Por ejemplo, la concentración de la muestra se puede calcular a partir del valor de absorbancia del pico.
  
• Un espectrofotómetro UV-VIS, que se basa en la relación entre la absorbancia y la concentración de la muestra, se usa en técnicas de análisis cuantitativo en segmentos de mercado como los de biotecnología, productos farmacéuticos, productos cosméticos, alimentos y bebidas, química y análisis del agua.
  
• El espectro revela propiedades físicas específicas de las moléculas de la muestra y hace que resulte posible calcular el coeficiente de extinción de la muestra y el punto de fusión de proteínas y ácidos nucleicos al medir los espectros UV-VIS a temperaturas diferentes, así como determinar la velocidad de reacción al controlar los espectros de absorción como una función de tiempo.
  
• El perfil y la posición de los picos en el espectro pueden proporcionar información acerca del entorno microscópico de las moléculas de muestra.

• La longitud de onda fija es la aplicación más sencilla de un espectrofotómetro. Se trata de una medición de una sola longitud de onda o de varias; el resultado se puede considerar como absorbancia o transmitancia.
  
• La cuantificación o la determinación de la concentración de una sustancia mediante un espectrofotómetro UV-VIS se basa en la ley Lambert-Beer, según la cual la absorbancia de una solución es directamente proporcional a la concentración de la sustancia absorbente en ella y el paso de luz de la cubeta. Por ello, un espectrofotómetro UV-VIS puede usarse para determinar la concentración de una muestra.
  
• Las mediciones de escaneo del espectro determinan la absorbancia y la transmitancia de una muestra en un intervalo de longitudes de onda de muestra específico o en un rango completo de espectro, generalmente de 190 a 1100 nm. El siguiente análisis más habitual es la detección de picos y valles.
  
• Un espectrofotómetro UV-VIS se suele usar para controlar el cambio de la concentración del reactante o del producto mediante la medición de la absorbancia en una longitud de onda concreta con el transcurso del tiempo. Estos métodos cinéticos se usan a menudo para estudiar velocidades de reacción enzimática o para determinar la concentración de carbohidratos específicos como la glucosa, la fructosa o la lactosa.

• Un espectrofotómetro de barrido mide cada longitud de onda por separado, lo que conlleva una duración significativamente más larga. Un espectrofotómetro de red de diodos mide el espectro completo en poco tiempo, ya que el detector de diodos mide todas las longitudes de ondas.
  
• Un espectrofotómetro de barrido escanea el espectro con elementos giratorios mecánicos. Esto puede provocar errores en la reproducibilidad de la longitud de onda. Por ello, un instrumento de espectroscopia de barrido requiere una recalibración habitual para asegurar la exactitud de la longitud de onda. Un espectrofotómetro de red de diodos no incluye ninguna pieza óptica móvil, por lo que no se producen desviaciones de rendimiento provocadas por imprecisiones mecánicas con el paso del tiempo.
  
• Un espectrofotómetro de red de diodos no requiere un compartimento de muestras cerrado, ya que es inmune a la iluminación ambiental debido a su diseño óptico.

Nuestra gama de espectrofotometría se ha diseñado para adaptarse a varios segmentos de la industria:

• Los espectrofotómetros UV5Bio y UV5Nano se suelen usar con productos farmacéuticos, en ciencias de la vida, en biotecnología y en el ámbito académico.
  
• Los espectrofotómetros UV7 y UV5 se suelen usar con productos farmacéuticos, en el segmento de alimentos y bebidas, en química, con productos cosméticos, en biotecnología en la industria petroquímica y en el ámbito académico.

Un espectrofotómetro de microvolúmenes realiza mediciones mediante volúmenes pequeños de muestra (tan reducidos como 1 microlitro). Las muestras muy concentradas también pueden medirse sin necesidad de diluciones adicionales gracias a la tecnología LockPath del UV5Nano de METTLER TOLEDO, que puede configurar el paso de luz entre 0,1 y 1 mm.

• Los espectrofotómetros UV5Nano y UV5Bio de METTLER TOLEDO ofrecen una amplia variedad de aplicaciones de ciencias de la vida, entre ellas:
  
  • Análisis cualitativo de ADN, ARN y proteínas
    
  • Análisis cuantitativo de ADN, ARN y proteínas
    
  • BCA, Bradford, Lowry y otros ensayos proteicos clorométricos
    
  • Colorantes configurados previamente y la opción de añadir colorantes personalizados
    
  • Calculadora de oligonucleótidos para la determinación de la concentración de oligonucleótidos de ADN y ARN
    
  • DO600 para las células vivas
    
• De forma adicional, los espectrofotómetros UV5Bio y UV7 ofrecen métodos cinéticos para desarrollar cinética enzimática
  
• Para más información sobre las aplicaciones de ciencias de la vida de los espectrofotómetros de METTLER TOLEDO, descárguese el conjunto de herramientas de ciencias de la vida.

METTLER TOLEDO ofrece una solución de verificación de rendimiento con la unidad CertiRef™, que constituye la forma más eficaz de comprobar si su espectrofotómetro funciona según las normativas de la farmacopea. Este accesorio realiza pruebas de exactitud de longitud de onda y repetibilidad, exactitud fotométrica y repetibilidad, resolución, luz parasitada, deriva y ruido fotométrico y planicidad de línea de base de forma automática.

El software LabX de METTLER TOLEDO permite que los usuarios dispongan de una mayor flexibilidad mediante la creación de flujos de trabajo personalizados para responder a las necesidades del usuario de forma exacta. Se evitan por completo el cálculo y la transcripción de errores. También asegura la integridad de los datos, ya que almacena toda la información en una base de datos segura, entre ella, todos los servicios y verificaciones de rendimiento. Con funciones de seguridad como las firmas electrónicas y la administración de usuarios, ayuda a ajustarse a las normativas 21 CFR parte 11 de la FDA.