Kuvet untuk Spektrofotometer

Kuvet yang digunakan untuk mengukur sampel adalah bagian dari sistem optik spektrofotometer. Oleh sebab itu, posisi, geometri, dan kondisi kuvet dapat berpengaruh pada akurasi maupun presisi pengukuran penyerapan dan harus secara cermat dikontrol.

Panjang jalur optik kuvet adalah panjang cahaya yang masuk melalui dinding interior kuvet.

Pada kuvet spektrometer standar, jalur atau panjang jalur cahaya akan menjadi jarak internal mulai dari jendela depan hingga jendela belakang. Panjang jalur optik kuvet standar adalah 10 mm.

Setiap bahan kuvet memiliki sifat penyerapan masing-masing, tergantung panjang gelombang. Kuvet kuarsa sepenuhnya dapat tembus cahaya di seluruh kisaran pengukuran (UV/Vis). Kuvet plastik sekali pakai seringkali hanya tembus cahaya pada kisaran spektrum yang terlihat. Oleh sebab itu, pemilihan kuvet bergantung sepenuhnya pada aplikasi.

Berdasarkan hukum Beer-Lambert, penyerapan berbanding lurus dengan panjang jalur kuvet dan konsentrasi sampel. Memilih panjang jalur yang ideal (misalnya, dari 1 mm hingga 5 cm) dapat meniadakan kebutuhan akan pelarutan. Penyerapan yang berada di kisaran 0,2 A hingga 1,5 A memberikan hasil terakurat. Instrumen mikrovolume dengan panjang jalur sangat pendek, (1 mm atau 0,1 mm) merupakan instrumen yang ideal untuk sampel berkonsentrasi tinggi.

Untuk praktik pengukuran terbaik, kuvet harus tetap dipasang di dudukan kuvet setiap kali pengukuran dilakukan. Jika dilepas, pastikan untuk memasangnya secara hati-hati pada posisi arah yang sama dalam dudukan kuvet, yakni label menghadap ke arah sumber cahaya. Hal ini untuk memastikan efek optik tetap sama untuk pengukuran referensi dan sampel.

Untuk hasil terbaik, pengukuran referensi dan sampel harus dilakukan menggunakan jenis kuvet yang sama.

Kuvet harus memiliki jendela yang terbuat dari bahan transparan pada area spektral penting.

Untuk hasil pengukuran terbaik dalam kisaran UV, kaca transparan UV harus digunakan, seperti kaca kuarsa atau kaca SUPRASIL^®.

SUPRASIL^® adalah merek dagang Heraeus (Kaca Kuarsa)

Untuk kisaran yang terlihat (>400 nm), kuvet kaca optik atau PMMA (Polimetillmetakrilat) ataupun PS (Polistirena) sekali pakai sering kali digunakan.

Kuvet sekali pakai, yang terbuat dari polimetillmetakrilat, menyerap dalam kisaran UV dan bertindak seperti penyaring cut-off, sehingga membuat pengukuran dalam kisaran UV tidak akurat. Karena itu, kuvet ini hanya digunakan untuk pengukuran dalam kisaran yang terlihat.

Campurkan sampel dengan baik sebelum digunakan, terutama saat proses suspensi ulang asam nukleat atau protein. Jangan gunakan pipet kaca untuk mengisi kuvet, karena dapat menggores permukaan optik. Sebaiknya gunakan pipet dengan ujung plastik sekali pakai. Biarkan larutan mengalir di dinding kaca ke dalam kuvet agar gelembung tidak terbentuk. Jangan sampai pengisian melebihi kapasitas 80%.

Jendela kuvet, tempat cahaya masuk dan keluar, harus dibersihkan sebelum digunakan. Untuk pembersihan bagian dalam dan luar secara menyeluruh, gunakan larutan 60% air isopropanol/deionisasi, lalu seka dengan kain pembersih kaca optik atau tisu tanpa serat (agar permukaan tidak tergores oleh serat).

Untuk menghindari penyerapan lebih tinggi, kuvet harus secara menyeluruh dibersihkan sebelum dan setelah digunakan. Setelah pembersihan selesai, pastikan untuk memasangnya secara hati-hati agar jendela tidak tersentuh. Sampel harus segera dikeluarkan setelah pengukuran untuk menghindari kerusakan pada kuvet akibat uap larutan.

Hasil penyerapan lebih tinggi terjadi jika residu, seperti sidik jari atau minyak, terkumpul pada jendela kuvet karena adanya komponen penyerapan tambahan. Hal ini dapat dihindari dengan pembersihan secara menyeluruh sebelum dan setelah penggunaan. Setelah pembersihan selesai, pastikan untuk memasangnya secara hati-hati agar jendela tidak tersentuh.

Pegang kuvet hanya pada sisi yang buram dan pastikan sidik jari tidak tertinggal pada kuvet.

Tempatkan kuvet dengan sisi transparan menghadap sorotan cahaya, untuk memastikan label kuvet kosong dan sampel menghadap ke arah yang sama. Pastikan kuvet tidak miring dan terpasang sepenuhnya di dudukan kuvet. Kuvet harus terpasang dengan kencang.

Agar dapat membatasi penguapan larutan atau penyerapan air dari udara sekitar pada saat mengukur sampel hidrofilik, gunakan penutup yang disertakan bersama kuvet.

Sel aliran harus selalu dikosongkan sepenuhnya setelah beberapa kali pengukuran. Untuk menghindari pengapuran pada jendela optik, bagian dalam sel aliran harus dibilas dengan aseton, lalu dikeringkan secara ekstensif agar dapat membersihkan residu aseton.

Untuk penyimpanan jangka pendek, dudukan kuvet khusus tersedia. Untuk penyimpanan jangka panjang, kotak yang disertakan harus digunakan agar permukaan kaca tidak tergores dan debu tidak terkumpul.

Untuk praktik pengukuran terbaik, kuvet harus tetap dipasang di dudukan kuvet setiap kali pengukuran dilakukan. Jika dilepas, pastikan untuk memasangnya secara hati-hati pada posisi arah yang sama dalam dudukan kuvet, yakni label menghadap ke arah sumber cahaya. Hal ini untuk memastikan efek optik tetap sama untuk pengukuran referensi dan sampel. Berkat toleransi produksi yang luar biasa dari kuvet Excellence METTLER TOLEDO, penentuan orientasi posisi ini tidak diperlukan karena perbedaan penyerapan hingga 180 derajat tidak akan terlalu berpengaruh.

Jika residu, seperti sidik jari atau minyak, terkumpul pada jendela kuvet, hasil akan menunjukkan penyerapan lebih tinggi karena adanya komponen penyerapan tambahan. Hal ini dapat dihindari dengan pembersihan secara menyeluruh sebelum dan setelah penggunaan. Setelah pembersihan selesai, pastikan untuk memasangnya secara hati-hati agar jendela tidak tersentuh.

Kuvet adalah tabung segi empat kecil untuk menyimpan sampel cair. Kuvet memiliki sisi lurus yang terbuat dari bahan transparan dan bening. Beberapa menyebutnya sebagai sel atau kapiler. Kuvet digunakan dalam pengukuran spektrofotometrik untuk mengukur penyerapan panjang gelombang tertentu.

Jika terdapat goresan atau retak kecil pada bagian kaca kuvet, maka kuvet tidak boleh lagi digunakan untuk pengukuran selanjutnya karena hasil dapat menjadi buruk atau kuvet dapat pecah di dalam spektrofotometer. Setiap bahan resin yang digunakan untuk memperbaiki atau merekatkan kaca kuvet dapat mengurangi kualitas pengukuran. Oleh sebab itu, memperbaiki kuvet yang rusak tidak disarankan.

Kuvet kosong digunakan untuk mengkalibrasi pembacaan spektrofotometer sebelum mengukur larutan yang tidak diketahui. Pembacaan spektrograf tergantung pada kuvet kosong. Terdapat faktor lingkungan yang dapat mempengaruhi pembacaan, seperti debu, suhu, dan kelembapan. Untuk meniadakan semua faktor eksternal, pembacaan spektrograf dengan kuvet kosong dihapus dari pembacaan kuvet larutan sampel

Kaca Optik METTLER TOLEDO: Panjang gelombang 320-2500 nm; laju transmisi >80%; dapat digunakan berkali-kali; Spektrum Terlihat

Kaca Kuarsa METTLER TOLEDO: Panjang gelombang 200-2500 nm; laju transmisi >82%; dapat digunakan berkali-kali; Spektrum UV Terlihat

Kapasitas paling umum adalah 3,5 ml (3500 µL) untuk kuvet makro 10 mm standar. Volume kuvet dapat dengan mudah dihitung: panjang bagian dalam x lebar bagian dalam x tinggi bagian dalam x 80% = volume kuvet

Pasangan kuvet yang cocok adalah dua kuvet berbahan sama yang memiliki panjang jalur optik yang sama. Karena toleransi produksi yang ditentukan, pasangan kuvet yang cocok memastikan pengukuran akan memberikan hasil yang setara. Kuvet Excellence METTLER TOLEDO memastikan toleransi produksi hanya ± 0,01 mm, sehingga tidak diperlukan pencocokan.