Szerezze meg Pipettázási kézikönyvünket – - METTLER TOLEDO
Guide

Szerezze meg Pipettázási kézikönyvünket –

Guide

a lehető legjobb tudástár a pipettázás mestereinek!

Maecenas faucibus mollis interdum. Donec id elit non mi porta gravida at eget metus. Nullam id dolor id nibh ultricies vehicula ut id elit.
Maecenas faucibus mollis interdum. Donec id elit non mi porta gravida at eget metus. Nullam id dolor id nibh ultricies vehicula ut id elit.

A pipettázás az élettudományi kutatómunka központi részét képezi. A reprodukálható eredmények érdekében a kutatóknak pontos pipettákra és jó minőségű, szennyeződésmentes pipettahegyekre van szükségük.

A „Pipettázás az élettudományokban” című kézikönyvünk segítségével megértheti a pipetták és pipettahegyek kiválasztásának és értékelésének elveit, így a pipettázás is jobban fog menni, és garantáltan jobb eredményeket fog kapni. 

A „Pipettázás az élettudományokban” című kézikönyvünk teljes áttekintést nyújt, és részletes leírást ad az alábbiakról:

  • értékelés és a pipetták kiválasztása;
  • a megfelelő pipettahegyek kiválasztása;
  • pipettázási technikák;

Töltse le az útmutatót most, és megtudhatja, hogyan válhat Ön is a pipettázás mesterévé!

A Pipettázási kézikönyv előnézete

1.Előszó

A Helyes Pipettázási Gyakorlat (Good Pipetting Practice) célja a kutatók informálása a berendezésről, a megfelelő pipettázásról és ergonomikus technikákról, valamint a kalibrálásról és rutin használatról, hogy a lehető legjobb eredményt kapják. Kis térfogatú folyadékok pipettázása – vagy kimérése és átvitele – a mikroliteres és milliliteres tartományban valószínűleg a leggyakoribb tevékenység a kutatólaboratóriumokban, és ezen feladat gyors és precíz elvégzése abszolút előfeltétele a sikeres labormunkának. A labormunka nagy részében modern léghelyettesítéses pipettákat használnak számos előnyük miatt: ideálisak a kis folyadékmennyiségek hatékony kiadagolására. Modern, kiváló minőségű pipettákkal és pipettahegyekkel magas szintű produktivitás érhető el, és ezzel párhuzamosan munkaidő takarítható meg.

2.Projekttervezés, munkafolyamat és eszközválasztás

Projekttervezés és munkafolyamat

A legtöbb új projektnek előnyére válik, ha azt teljesen megtervezik. A munkafolyamat minden lépését elemzik a maximális hatékonyság és adatnyerés érdekében. Folyadékkezelési szempontból a folyamatban ismerni kell a kiindulási mintatípust, a szükséges végponti elemzést, valamint a mintaáteresztő képességet. Cserébe ezek határozzák meg a felhasznált technikákat és a szükséges folyadékkezelési formákat (csövek, lemezek stb.). Ez pedig meghatározza a folyadék kezelésére szolgáló optimális eszközöket a munkafolyamatban. Minden pipettázási művelet vagy tevékenység esetében egyetlen rendszerként kell kezelni a pipettát, a csatlakozó hegyet és a használat technikáját a szükséges pontos folyadéktérfogat átviteléhez. A megfelelő pipetta és hegy kiválasztása, majd a leghatékonyabb technika alkalmazása szerves részét képezi bármely projekt vagy kísérlet megtervezésének és megvalósításának.

A munkafolyamat elemzése

Ebben az eljárásban az első lépés a kísérleti munkafolyamat minden egyes lépésének azonosítása – a kiindulási mintaizolálástól a végső adatelemzésig, de ide tartozik az összes előkészítő lépés is, ami a munkafolyamatot támogatja, például a pufferek és mesterkeverékek elkészítése. Ezt követően meg kell határozni, mennyi variabilitás tolerálható a kísérletben ahhoz, hogy jó adatok keletkezzenek. Egyes alkalmazások és lépések sokkal érzékenyebbek a kísérleti variabilitásra, mint mások, például az amplifikációval járó kísérletek, mint a qPCR, nagyon érzékenyek lehetnek a variabilitásra, míg egy egyszerű pufferkészítés nem feltétlenül. A pipetta és pipettahegy nem megfelelő kiválasztása, valamint a rossz pipettázási technika jelentős mértékű kísérleti variabilitást okozhat, például minden olyan kísérlet esetében, amely egy sorozatból előállított standard görbétől függ.

A munkafolyamat optimalizálása

  • Térfogattartományra és mintaáteresztő képességre vonatkozó követelmények
  • A minta-/reagenstartó formátumára vonatkozó követelmények
  • Minta-/assayspecifikus követelmények

3.A megfelelő pipetta kiválasztása

Számos pipettázási eszköz kapható, amellyel optimális eredmények és nagyobb produktivitás érhető el, miközben olyan további előnyökkel is járnak, mint a továbbfejlesztett ergonómia és jobb funkcionalitás egy adott alkalmazáshoz. Két fő mikropipetta típus különíthető el: léghelyettesítéses és pozitív helyettesítéses. Mindkét típus a dugattyú átmérőjéből és a dugattyú elmozdulásának hosszából határozza meg a kiadagolt folyadék térfogatát.

Léghelyettesítéses pipetták

  • Rendkívül pontosak a legtöbb vizes oldat esetében
  • Gazdaságosak

A léghelyettesítéses pipetták a leggyakoribb pipetták a laboratóriumban. Ezek a pipetták úgy működnek, hogy a hegyüket a folyékony mintába kell mártani, majd felengedni a dugattyú gombját. A pipetta dugattyújának pipettatestben való felfelé mozgásával részleges vákuum keletkezik, és a folyékony minta felfelé mozdul a hegyben, hogy kitöltse a részleges vákuum miatt létrejött, kiválasztott térfogatú űrt.

Pozitív helyettesítéses pipetták

  • Rendkívül pontosak a legtöbb oldat esetében
  • Viszkózus, sűrű, illékony vagy korrozív folyadékokhoz javasolt

Noha nem annyira gyakoriak, mint a léghelyettesítéses pipetták, a pozitív helyettesítéses pipettákat is gyakran látni a laboratóriumokban. Ezek a pipetták eldobható dugattyút és kapillárisrendszert használnak, hogy fizikai űrként hozzák létre a kiválasztott térfogatot. A dugattyú közvetlenül érintkezik a mintával, és amikor a dugattyú felfelé mozdul el, minta szívódik fel a kapillárisba. A pozitív helyettesítéses pipetták nagy pontosságot és precizitást biztosítanak vizes oldatok pipettázásánál, de használatuk viszkózus, sűrű, illékony vagy korrozív folyadékokhoz javasolt. A pozitív helyettesítéses pipettákhoz használt eldobható kapillárisok és dugattyúk drágábbak, mint a léghelyettesítéses pipettákhoz való eldobható hegyek, így amikor azonos eredményt adnak, a léghelyettesítéses pipetták használata javasolt.

A munkafolyamat optimalizálása

  • Térfogattartományra és mintaáteresztő képességre vonatkozó követelmények
  • Elektronikus egycsatornás pipetták
  • Többcsatornás pipetták
  • Nagy kapacitású pipettázó rendszerek
  • Speciális pipetták
  • Pozitív helyettesítéses pipetták
  • Ismétlő pipetták
  • Pipettavezérlők
  • Palack tetejére szerelhető adagolók

4.A megfelelő hegy kiválasztása: kialakítás, minőség és illeszkedés

A pipettát és a gyártója által ajánlott hegyet érdemes egy rendszernek tekinteni, nem pedig két különálló alkatrésznek. A minden pipettával használhatóként hirdetett pipettahegyek gyakran kompromisszumot jelentenek, mivel számos pipettatípushoz illeszkedniük kell. Amikor pipettahegyeket választ, a megfontolandó tulajdonságok a kialakítás, a minőség és az illeszkedés.

A hegy kialakítása

A legfejlettebb kialakítású pipettahegyek fala vékony és rugalmas, csúcsa pontszerű vagy kisméretű nyílással van ellátva. Kis, 20 μl-nél kisebb térfogatú pipettázáshoz a Rainin FinePoint™ pipettahegyek javítják a pontosságot és a precizitást a hagyományos pipettahegyekhez képest, amelyek vastag falúak vagy csapott végűek. A FinePoint pipettahegyek rugalmasabbak, mint a legtöbb más, hagyományos hegy, és lehetővé teszik a folyadékminták lefolyatását bármely szögben tartva a teljes átvitel érdekében. Ezzel sokkal kevesebb minta marad meg a hegyen a vastagabb falú vagy csapottabb végű hegyekhez képest. A hegy kialakítása befolyásolja a teljesítményt, a pontosságot és a precizitást. Amikor azonban a pipettákat helyesen használják, garantált a meghatározott pontosság és precizitás, feltéve, hogy a gyártó által javasolt pipettahegyekkel használják azokat.

A pipettahegy minősége

A legsúlyosabb minőségbeli hibák a hegy végi nyílásnál jelentkeznek, ami a legjobban befolyásolja a minta felszívását és kiadagolását. A 13. ábra négy pipettahegyet ábrázol kinagyítva.

A sorja olyan műanyagmaradék, ami az öntés során marad vissza a pipettahegy belsejében vagy a nyílás körül.

Az öntési és a koaxiális hibák abból erednek, hogy az öntőforma központi tűit nem megfelelően sütik el a műanyag befecskendezése után. Mindezen hibák mintavesztést eredményeznek a pipettázás során. A kiváló minőségű gyártási eljárás minimálisra csökkenti a hegyhibákat és a következményes hibákat.

A pipettahegyek illeszkedése

  • LTS™ LiteTouch™ hegyledobó rendszer
  • Hegyválasztás
  • Specializált hegyek speciális alkalmazásokhoz

5.Pipettázási technikák

Az alkalmazás helyes kiértékelése – és a berendezések kiválasztása – jelentősen befolyásolja a kutatási eredményét. De mégsem ezek a kizárólag figyelembe veendő dolgok az optimális kutatási eredményekért. Más tényezők, például a helyes pipettázási technika és a környezeti körülmények is befolyásolják az eredményeket. A pontosság és precizitás alapvető fontosságú a tudományos kutatásokban, és az alábbi oldalak rövid áttekintést adnak a pipettázás technikájának számos aspektusáról. Tudta-e például, hogy ezen technikák betartásával pontossága és precizitása akár 5%-ot is javulhat?

Optimális térfogattartomány

A legtöbb pipetta normál működési tartománya a névleges térfogat 10–100%-a. Noha ezt tekintjük a működési tartománynak, a teljesítményspecifikációk változnak, ahogy a beállított térfogat csökken. Egy 100 mikroliteres pipetta meghatározott pontossága +/– 0,8% a névleges térfogat 50–100%-ában. Azonban amikor 10 μl-t (vagy a névleges térfogat 10%-át) pipettáz, a megadott pontatlanság több mint 3-szor nagyobb lesz, 2,5–3%. Ezért az optimális térfogat a legpontosabb és legprecízebb méréshez jellemzően a névleges térfogat 35–100%-a. Próbálja meg elkerülni, hogy a pipetta maximális térfogatának kevesebb mint 10%-át pipettázza – ehelyett a kisebb térfogatokhoz váltson át egy kisebb térfogatú pipettára.

A hegy bemártásának mélysége

A mikrotérfogatú pipetták esetében különösen fontos, hogy a helyes merülési mélységgel akár 5%-kal javítható a pontosság. A hegyet mikrotérfogatú pipetták esetében 1–2 mm-re, nagy térfogatú pipetták esetében legfeljebb 6–10 mm-re szabad bemeríteni. Ha a hegy merülési mélysége túl nagy, akkor a hegyben lévő gáz térfogata összetömörül, ami túl sok folyadék felszívásához vezet. A hegy felületén maradó folyadék szintén torzíthatja az eredményeket. Ha a hegyet nem mártja be elég mélyre, akkor levegőt is beszívhat, ami buborékkal és pontatlan térfogatokkal jár. Mindkettő pontatlan térfogatot eredményez.

  • Felszívás a helyes szögben
  • Konzisztencia fenntartása
  • Konzisztens mintaadagolás
  • Hegyek előöblítése
  • Változó hőmérséklet kiküszöbölése
  • Konzisztens mikrométer beállítások
Thank you for visiting www.mt.com. We have tried to optimize your experience while on the site, but we noticed that you are using an older version of a web browser. We would like to let you know that some features on the site may not be available or may not work as nicely as they would on a newer browser version. If you would like to take full advantage of the site, please update your web browser to help improve your experience while browsing www.mt.com.