Contrôle et étalonnage des pipettes

Une pipette est un outil de laboratoire permettant de transférer des quantités très précises de liquides, en aspirant les échantillons puis en les distribuant. La majorité des pipettes possède désormais un piston qui crée un vide partiel au-dessus du liquide avant de l'aspirer, pour éviter tout contact avec les mécanismes.

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Une pipette est étalonnée lorsque le rapport entre le volume attendu et le volume délivré par la pipette est déterminé par un organisme certifié, en tenant compte de l'incertitude de mesure. L'objectif est de vérifier si la pipette satisfait toujours aux caractéristiques de précision stipulées par sa notice ou par la norme ISO 8655. Les pipettes hors tolérance peuvent souvent faire l'objet d'une maintenance, d'un ajustement et d'un réétalonnage
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Les pipettes à piston servent généralement dans les domaines de la chimie et de la biologie et dans les milieux cliniques et médicaux, où les échantillons sont prélevés en quantités très faibles mais très précises, pour être dilués à des fins de recherche et d'analyse.

Voici quelques techniques très courantes de pipetage, certaines erreurs liées aux pipettes à piston et la manière de les éviter.

1. Profondeur d'immersion du cône erronée
   Une bonne profondeur d'immersion peut améliorer la précision de 5 %. La profondeur d'immersion du cône doit être de 1 à 2 mm pour les micropipettes et jusqu'à 3 à 6 mm pour les pipettes classiques, selon la taille de la pointe. Si la pointe est immergée trop profondément, le gaz contenu à l'intérieur de celle-ci est comprimé et provoque l'aspiration d'une quantité excessive de liquide.
   
   
2. Mauvais angle de pipetage
   L'angle d'immersion de la pointe de votre pipette dans l'échantillon doit être aussi proche que possible de 90 degrés et ne doit pas s'écarter de plus de 20 degrés de la verticale. Un angle trop horizontal augmente la quantité de liquide aspiré dans la pointe et fausse les résultats. Par exemple, à un angle de 30 degrés par rapport à la verticale, la proportion de liquide aspiré en excès peut atteindre 0,7 %.
   
   
3. Distribution inégale
   Afin d'obtenir une précision et une reproductibilité optimales d'un échantillon à l'autre, il convient de veiller à ce que la dernière goutte soit entièrement distribuée et n'adhère pas à l'extrémité de la pointe. Pour la plupart des applications, il est recommandé de distribuer le liquide avec l'extrémité de la pointe placée contre la paroi du récipient afin de réduire ou d'éliminer la quantité d'échantillon restant dans la pointe. Cette technique permet d'accroître l'exactitude de pipetage de 1 % ou plus.
   
   
4. Pas de prérinçage
   Lorsque vous dosez un liquide à l'aide d'une pipette, un dépôt de liquide se forme sur la pointe. Le volume expulsé est donc légèrement inférieur à ce qu'il devrait être. Le fait de prérincer les pipettes neuves au moins deux fois avec le liquide d'échantillonnage permet de préparer la paroi interne de la pointe.
   
   
5. Rythme de pipetage irrégulier
   Maintenez un rythme constant de pipetage d'un échantillon à l'autre. Évitez de vous dépêcher ou de travailler trop rapidement et adoptez un rythme régulier pour chaque étape du cycle de pipetage.
   
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L'exactitude d'une pipette doit faire l'objet d'une vérification régulière entre deux étalonnages pour éviter des résultats hors de la plage de tolérance entre les étalonnages. Pour vérifier la pipette, il convient de distribuer au moins le volume nominal dans un bécher sur une balance d'analyse précise au moins 4 à 6 fois, ce qui permettra de calculer le volume et l'écart type selon les formules préconisées par la norme ISO 8655. Les balances dotées d'une application intégrée ou d'un logiciel pour PC délivrent automatiquement un résultat Réussite ou Échec en quelques secondes.

Plus : Contrôle des pipettes

L'exactitude d'une pipette doit faire l'objet d'une vérification régulière entre deux étalonnages pour éviter des résultats hors de la plage de tolérance entre les étalonnages. Pour vérifier la pipette, il convient de distribuer au moins le volume nominal dans un bécher sur une balance d'analyse précise au moins 4 à 6 fois, ce qui permettra de calculer le volume et l'écart type selon les formules préconisées par la norme ISO 8655. Les balances dotées d'une application intégrée ou d'un logiciel pour PC délivrent automatiquement un résultat Réussite ou Échec en quelques secondes.  

Un étalonnage de pipettes indique l'écart entre le volume attendu et le volume réel, qui doit se situer dans une plage de tolérance donnée. S'il sort de la plage de tolérance, la pipette risque de produire des erreurs de dilution et aboutir à des résultats d'analyses erronés. Les résultats ne pourront donc pas être reproduits et l'analyse complète devra être refaite. Pour détecter précocement une pipette hors de la plage de tolérance, nous recommandons de vérifier également l'exactitude de la pipette entre les étalonnages afin d'éviter que la sortie de la plage de tolérance ne soit découverte lors de l'étalonnage suivant.

Lors d'un étalonnage de pipettes, le rapport entre le volume attendu et le volume délivré par la pipette est déterminé en tenant compte de l'incertitude de mesure associée par un établissement accrédité. L'objectif est de vérifier si la pipette satisfait toujours aux spécifications de précision stipulées par sa notice ou par la norme ISO 8655. Les pipettes hors tolérance peuvent souvent faire l'objet d'un entretien, d'un ajustement et d'un réétalonnage.

Avant de commencer le nettoyage, consultez toujours d'abord le manuel du fabricant, car la résistance des matériaux varie d'une marque à l'autre. Pour un nettoyage satisfaisant, les pipettes à piston doivent être désassemblées. Souvent l'éjecteur de pointe et le cylindre se dévissent simplement à la main pour ouvrir la pipette. Attention : la pression du ressort peut faire jaillir les pièces. Les pièces peuvent généralement être nettoyées à l'aide d'un chiffon légèrement imprégné d'eau distillée et de savon doux ou à l'aide d'une solution à base d'alcool isopropylique ou d'éthanol. Évitez que les liquides ne pénètrent dans le corps de pipette, de même que pendant le pipetage pour éviter  toute contamination du piston et du joint d'étanchéité. Concernant la stérilisation ou l'autoclavage, consultez le manuel de la pipette concernée pour savoir si ces procédures sont autorisées, et comment y procéder. Après le nettoyage de la pipette, vérifiez qu'elle demeure dans la plage de tolérance. En règle générale, un technicien de maintenance des pipettes effectue un étalonnage après la maintenance pour vérifier que la pipette demeure dans la plage de tolérance.