Bonnes pratiques de pipetage : de meilleurs résultats grâce à la formation et à l’assistance

La plupart des applications des sciences de la vie incluent des étapes critiques de manipulation de liquides où le volume pipeté influence directement le résultat. Si le pipetage n’est pas cohérent et précis, le temps, l’argent et le matériel peuvent être gaspillés. Un pipetage précis constitue la base d’un travail reproductible, ce qui est essentiel pour générer des données significatives.

La première étape pour améliorer la précision du pipetage consiste à choisir le bon type de pipette et la plage de volume appropriée. Pour la taille, choisissez la pipette de volume le plus bas qui s’adaptera au volume que vous pipez. Par exemple, si vous pipetez 2 μL et que vous avez une pipette de 5 μL et une pipette de 20 μL, vous obtiendrez une meilleure précision en utilisant la pipette de 5 μL. 

Consultez ce livre blanc sur la sélection des pipettes pour comprendre quelle pipette convient le mieux au liquide et d’autres facteurs propres à votre situation : Choisir la bonne pipette

Une fois que vous avez le bon instrument, mettez en pratique votre bonne technique de pipetage. Établissez un calendrier de tests de routine pour maximiser la confiance dans vos résultats au fil du temps et, comme pour tout instrument de précision, assurez-vous de mettre en place un service et un programme d’étalonnage réguliers et experts.

Le moyen le plus simple de tester rapidement la précision d’une pipette peut être le Rainin SmartCheck. Pour en savoir plus, rendez-vous sur mt.com/SmartCheck 

Choisir la bonne pipette implique d’évaluer vos besoins. Tout d’abord, quel type d’échantillons pipetez-vous ? Sont-ils aqueux ? Ou sont-ils visqueux, volatils, moussants, corrosifs ou dangereux ? Pour les liquides aqueux et quasi aqueux, les pipettes à déplacement d’air les plus courantes (également appelées pipettes à « coussin d’air ») sont un bon choix. Pour les liquides visqueux, volatils et autres types de liquides inhabituels, une pipette à déplacement positif serait un meilleur choix pour la précision et la sécurité. 

Quel volume allez-vous pipeter ? Combien d’échantillons faut-il transférer d’un récipient à un autre ? Consultez ce livre blanc sur la sélection des pipettes pour comprendre quelle pipette fonctionne le mieux en fonction du liquide et d’autres facteurs propres à votre situation.

Le pipetage des plus petits volumes possibles fait appel à des instruments et à des techniques spécialisés. Une pipette à répétition peut être votre meilleur choix pour répéter des volumes de distribution allant jusqu’à 100 nL. Une autre pipette peut également fonctionner pour quelques distributions seulement. Assurez-vous d’utiliser la pipette de la plus petite taille qui s’adaptera au volume que vous souhaitez pipeter. 

À de très faibles volumes, la technique de pipetage a un impact proportionnellement plus important sur la précision et la reproductibilité. La profondeur d’immersion, l’angle de pipetage et le taux d’aspiration sont importants à contrôler. L’affiche sur les techniques de pipetage de Rainin peut vous aider.

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Le facteur le plus important pour un pipetage multicanaux précis et reproductible est l’intégrité du joint pour chaque canal de la pipette. Cela signifie que chaque pointe s’adapte parfaitement à chaque tige sans aucune fuite d’air. Différents fabricants y parviennent de différentes manières, avec une facilité ergonomique et des niveaux de cohérence d’étanchéité variables. Les pointes de pipette LTS LiteTouch System de Rainin nécessitent le moins de force pour être chargées et éjectées du multicanal, et elles sont étanches de manière cohérente à chaque fois.

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Lors de l’aspiration, tenez une pipette aussi près que possible de la verticale, en évitant tout angle supérieur à 20° par rapport à l’axe Y. Lors de la distribution, si vous touchez la paroi du récipient cible afin d’extraire complètement tout le liquide de la pointe, il est OK de dépasser l’angle de 20°.

Le pipetage direct est la technique de pipetage standard et le meilleur choix pour les échantillons aqueux. Pour les échantillons visqueux et volatils, le pipetage inverse offre une meilleure précision.

Pour faire avancer la pipette, poussez le piston vers le bas jusqu’à la première butée tout en tenant la pipette à l’extérieur du liquide. Ensuite, plongez l’embout à 2-10 mm de profondeur dans le liquide avec lequel vous travaillez, sans plus de profondeur. Relâchez lentement le piston jusqu’à l’extension complète pour aspirer tout le volume de liquide. Pour distribuer dans votre récipient cible, déplacez la pipette dans le récipient, puis appuyez sur le piston à une vitesse régulière à travers la première butée jusqu’à la deuxième butée, jusqu’à la deuxième butée, jusqu’à ce que le piston aille. Avec le piston complètement enfoncé, faites glisser légèrement la pointe de la pipette le long de la paroi du récipient pour « toucher ». Cela permet de distribuer complètement le volume complet de liquide. Relâchez le piston, éjectez la pointe de la pipette, chargez une nouvelle pointe de pipette et répétez l’opération.

Pour inverser la pipette, enfoncez le piston à fond dans la première butée jusqu’à la deuxième butée, jusqu’à la limite du piston. Ensuite, plongez l’embout dans un liquide et relâchez lentement et uniformément le piston pour aspirer. Déplacez-vous vers le récipient récepteur et appuyez sur le piston UNIQUEMENT JUSQU’AU PREMIER ARRÊT pour distribuer le volume correct. Un petit volume résiduel restera dans la pointe de la pipette. Déplacez la pipette au-dessus d’un récipient de distribution-jet-distribution et appuyez sur le piston jusqu’à la deuxième butée, également appelée butée « d’éruption », pour libérer tout liquide restant. 

Relâchez le piston, éjectez la pointe de la pipette, chargez une nouvelle pointe de pipette et répétez l’opération.

Une pipette à déplacement d’air peut être utilisée pour pipeter des liquides légèrement visqueux, y compris du sang. Pour obtenir une précision maximale, utilisez la technique de pipetage inverse décrite ci-dessus. Pour les liquides plus visqueux, tels que le glycérol à 85 % ou le Triton X-100, une pipette à déplacement positif offre la meilleure précision et la meilleure consistance.

Les liquides légèrement volatils tels que l’éthanol peuvent être pipetés à l’aide d’une pipette à déplacement d’air en utilisant la technique de pipetage inversé mentionnée ci-dessus. Cependant, les pipettes à déplacement positif sont un meilleur choix pour les liquides volatils. 

Si vous utilisez une pipette à déplacement d’air, pré-rincez la pointe de la pipette (aspiration et distribution) au moins cinq fois avant de pipeter votre volume. Cela équilibre l’air à l’intérieur de la pipette, ralentissant ainsi le taux d’évaporation du liquide. L’évaporation rapide des liquides volatils dilate l’air à l’intérieur d’une pipette et force le liquide à s’échapper de la pointe sans qu’aucune pression ne soit exercée sur le piston, ce qui diminue la précision de l’administration du volume.

Les liquides volatils tels que l’acétonitrile sont généralement mieux manipulés avec une pipette à déplacement positif.

Oui, le pipetage à l’aide de pipettes à déplacement d’air peut créer des aérosols. Les aérosols peuvent remonter à l’intérieur de la pipette et contaminer les parois intérieures et le piston. L’aérosolisation se produit plus facilement lorsque le piston est libéré trop rapidement pendant l’aspiration et peut également se produire dans la direction opposée à l’extérieur de la pipette avec une distribution trop rapide. 

Pour minimiser les aérosols, aspirez et distribuez lentement et uniformément. Utilisez des pointes filtrées. 

Les pipettes à déplacement positif utilisent des pointes de type seringue qui empêchent l’aérosolisation. Une pipette à déplacement positif est le meilleur choix pour le pipetage de liquides dangereux et de tout liquide de viscosité ou de volatilité élevée.

Les liquides très froids ou chauds modifient la pression de l’air à l’intérieur des pipettes à déplacement d’air, ce qui entraîne un pipetage imprécis. 

Les pipettes volumétriques, avec des embouts de type seringue qui n’ont pas de poche d’air entre le liquide et le piston, ne sont pas affectées par les différentes températures des liquides. Les pipettes à déplacement positif fourniront des résultats précis avec des liquides à température non ambiante.

Si vous devez pipeter un liquide très chaud ou froid avec une pipette à déplacement d’air, ne prérincez pas la pointe de la pipette, car il s’agit généralement de la meilleure pratique pour une précision maximale. Au lieu de cela, aspirez et distribuez rapidement pour minimiser l’effet de la température du liquide sur l’espace d’air intérieur de la pipette.

Pour éviter les bulles et la formation de mousse lors du pipetage, ne plongez pas l’embout à plus de 10 mm dans le réservoir de liquide et aspirez lentement.

Le pipetage inversé offre une protection supplémentaire car, avant d’aspirer, vous appuyez à fond sur le piston jusqu’à la 2e butée, de sorte qu’il n’y a aucune chance d’injecter de l’air dans l’échantillon liquide. Pour en savoir plus sur le pipetage inverse, visitez cette page. 

Une pipette à déplacement positif ne crée pas de bulles ou de mousse lorsqu’elle interagit avec un liquide, car son embout de type seringue ne présente pas d’air avec lequel le liquide peut interagir.

Décontaminez une pipette en l’essuyant avec un chiffon humide et un détergent comme l’isopropanol ou une solution d’eau de Javel à 10 %. Évitez la fenêtre en plastique transparent du micromètre.

L’autoclave peut être une autre option, mais vérifiez les spécifications de l’instrument de votre pipette. S’il est autoclavable, l’ensemble de l’instrument est-il autoclavé ou seulement l’extrémité liquide ?  Souvent, seule l’extrémité liquide peut être autoclavée.

Pour en savoir plus sur le nettoyage d’une pipette, procurez-vous l’affiche Nettoyage d’une pipette .

L’étalonnage est la mesure contrôlée et documentée du taux d’erreur systématique (exactitude) et du taux d’erreur aléatoire (précision) d’une pipette. Dans de nombreux environnements de laboratoire, les performances des pipettes doivent être régulièrement testées et documentées par la loi dans des conditions spécifiques certifiées par un organisme accrédité. 

Les fournisseurs certifiés ISO étalonnent les pipettes dans un cadre contrôlé. Les résultats sont documentés en toute sécurité sur un certificat d’étalonnage, ce qui s’ajoute à un historique de performance prêt pour l’audit pour chaque instrument. Lorsque des ajustements sont nécessaires, les laboratoires d’étalonnage certifiés ISO fournissent un service expert avec des pièces et des lubrifiants recommandés par le fabricant. 

Rainin et METTLER TOLEDO sont la plus grande entreprise de services de pipettes au monde, avec des services postaux et sur site rapides. Les laboratoires de service sont certifiés ISO 17025 et les procédures suivent la mise à jour 2022 vers la norme ISO 8655. 

La précision de la pipette, ou justesse, comme on l’appelle aujourd’hui, est la différence entre le volume moyen de toutes les mesures (4 à 10 mesures) et le volume réglé. 

La précision est l’écart-type de toutes les mesures effectuées. À quelle distance les unes des autres sont-elles par rapport à chaque lecture ?

L’incertitude d’une pipette est le terme quantitatif désignant sa précision globale. Il s’agit d’une combinaison de justesse (une mesure de l’erreur systématique) et de précision (une mesure de l’erreur aléatoire). 

L’équation de l’incertitude est la suivante : 

Incertitude = erreur systématique + erreur aléatoire * k. k (facteur de couverture ou score Z) dépend du nombre de mesures. k = 3,31 pour quatre mesures et 2 pour dix mesures.

Rangez les pipettes verticalement, suspendues à une étagère ou à un support de pipette. Gardez les pipettes propres et exemptes de tout contaminant. Gardez les portoirs de pointes de pipette fermés.