Hvordan bruker jeg en pipette riktig?

Nøyaktig pipettering krever å mestre noen få grunnleggende teknikker. Disse inkluderer:

  • Senk pipettespissen til riktig dybde i en væske, basert på spissstørrelse og væsketype
  • Forskyll en ny spiss med væsken som skal suges opp
  • Holde pipetten i riktig vinkel (ikke mer enn 20° fra vertikal) 
  • Aspirering og dispensering med en hastighet som minimerer bobledannelse
  • Ta pauser for å unngå overoppheting av instrumentet, noe som kan skyldes langvarig bruk og påvirke nøyaktigheten ved å utvide luft i pipetten


Hvorfor er nøyaktig pipettering viktig?

De fleste biovitenskapelige applikasjoner inkluderer kritiske væskehåndteringstrinn der pipettert volum direkte påvirker resultatet. Hvis pipetteringen ikke er konsistent og nøyaktig, kan tid, penger og materiale gå til spille. Nøyaktig pipettering danner grunnlaget for reproduserbart arbeid, noe som er avgjørende for å generere meningsfulle data.

Hvordan forbedrer jeg pipetteringsnøyaktigheten og reduserer feil?

Det første trinnet mot å forbedre pipetteringsnøyaktigheten er å velge riktig type pipette og riktig volumområde. For størrelse, velg pipetten med lavest volum som passer til volumet du pipetterer. Hvis du for eksempel pipetterer 2 μL og har en 5 μL-pipette og en 20 μL-pipette, får du bedre nøyaktighet ved å bruke 5 μL. 

Ta en titt på dette white paperet om valg av pipette for å forstå hvilken pipette som fungerer best for væsken og andre faktorer som er unike for din situasjon: Velge riktig pipette

Når du har det riktige instrumentet, bruk din gode pipetteringsteknikk i praksis. Sett opp en rutinemessig testplan for å maksimere tilliten til resultatene dine over tid, og som med alle presisjonsinstrumenter, sørg for å innføre et regelmessig, ekspert service- og kalibreringsregime.

Den enkleste måten å raskt teste en pipettes nøyaktighet på kan være Rainin SmartCheck. Finn ut mer på mt.com/SmartCheck 

Hvordan vet jeg hvilken pipette jeg skal bruke?

Å velge riktig pipette innebærer å evaluere dine behov. For det første, hva slags prøver pipetterer du? Er de vandige? Eller er de tyktflytende, flyktige, skummende, etsende eller farlige? For vandige og nesten vandige væsker er de vanligste luftforskyvningspipettene (også kalt "luftpute"-pipetter) et godt valg. For tyktflytende, flyktige og andre uvanlige væsketyper vil en pipette med positiv forskyvning være et bedre valg for både nøyaktighet og sikkerhet. 

Hvilket volum vil du pipettere? Hvor mange prøver trenger du for å overføre fra ett fartøy til et annet? Ta en titt på dette white paperet om valg av pipetter for å forstå hvilken pipette som fungerer best, avhengig av væsken og andre faktorer som er unike for din situasjon.

Hvordan pipetterer du små volumer?

Pipettering av minst mulig volum involverer spesialiserte instrumenter og teknikker. En repeterende pipette kan være det beste valget for å repetere volumer ned til 100 nL. En annen pipette kan også fungere for bare noen få dispenseringer. Sørg for å bruke den minste pipetten som passer til volumet du ønsker å pipette. 

Ved svært lave volumer har pipetteringsteknikk en proporsjonalt større innvirkning på nøyaktighet og reproduserbarhet. Nedsenkingsdybde, pipetteringsvinkel og aspirasjonshastighet er viktig å kontrollere. Pipetting Techniques-plakaten fra Rainin kan hjelpe.

Rainin NanoRep gjentar og dispenserer alikvoter ned til 100 nL. Finn ut mer her: mt.com/NanoRep

Hvordan bruker jeg en flerkanalspipette?

Den viktigste faktoren for nøyaktig, reproduserbar flerkanalspipettering er integriteten til tetningen for hver kanal i pipetten. Det betyr at hver spiss passer perfekt på hvert skaft uten luftlekkasje. Ulike produsenter oppnår dette på forskjellige måter, med varierende ergonomisk letthet og tetningskonsistensnivåer. LTS LiteTouch System-pipettespisser fra Rainin krever minst mulig kraft for å laste og løse ut fra flere kanaler, og de forsegler konsekvent hver gang.

Klikk her for å se Rainins brede utvalg av flerkanalspipetter.

Hva er den riktige måten å holde en pipette på?

Når du aspirerer, hold en pipette så nær vertikal som mulig, og unngå enhver vinkel større enn 20° fra Y-aksen. Når du dispenserer, hvis du berører veggen til målbeholderen for å trekke all væske helt ut av spissen, er det OK å overskride 20°-vinkelen.

Hva er pipettering forover og bakover?

Fremoverpipettering er standard pipetteringsteknikk og det beste valget for vandige prøver. For viskøse og flyktige prøver gir omvendt pipettering bedre nøyaktighet.

For å sende pipetten fremover, skyv stempelet ned til første stopp mens du holder pipetten utenfor væsken. Senk deretter spissen 2-10 mm dypt ned i væsken du jobber med – ikke dypere. Slipp stempelet sakte til full forlengelse for å aspirere hele væskevolumet. For å dispensere inn i målbeholderen, flytt pipetten inn i beholderen, og trykk deretter stempelet med jevn hastighet gjennom det første stoppet helt til det andre stoppet – så langt stempelet går. Med stempelet helt trykket, dra spissen av pipetten lett oppover veggen på karet for å "berøre". Dette hjelper til med å dispensere hele væskevolumet fullstendig. Slipp stempelet, løs ut pipettespissen, sett inn en ny pipettespiss og gjenta.

For å reversere pipetten skyver du stempelet helt ned gjennom det første stoppet til det andre stoppet – så langt stempelet går. Senk deretter spissen i væske og slipp stempelet sakte og jevnt for å aspirere. Beveg deg til mottakerbeholderen og trykk stempelet KUN TIL FØRSTE STOPP for å dispensere riktig volum. Et lite restvolum vil forbli i pipettespissen. Flytt pipetten over et kasseringsbeholder og trykk stempelet helt ned til det andre stoppet, også kalt "utblåsningsstoppet", for å frigjøre eventuell gjenværende væske. 

Slipp stempelet, løs ut pipettespissen, sett inn en ny pipettespiss og gjenta.

Hvordan pipetterer jeg tyktflytende væsker?

En luftfortrengningspipette kan brukes til å pipettere lett tyktflytende væsker, inkludert blod. For å oppnå maksimal nøyaktighet, bruk omvendt pipetteringsteknikk beskrevet ovenfor. For mer tyktflytende væsker, for eksempel 85 % glyserol eller Triton X-100, gir en pipette med positiv forskyvning den beste nøyaktigheten og konsistensen.

Hvordan pipetterer jeg flyktige væsker?

Lett flyktige væsker som etanol kan pipetteres med en luftforskyvningspipette ved hjelp av den ovennevnte omvendte pipetteringsteknikken. Pipetter med positiv forskyvning er imidlertid et bedre valg for flyktige væsker. 

Hvis du bruker en luftforskyvningspipette, må du forhåndsskylle pipettespissen (aspirere og dispensere) minst fem ganger før du pipetterer volumet. Dette balanserer luften inne i pipetten, og bremser væskens fordampningshastighet. Rask fordampning av flyktige væsker utvider luften inne i en pipette og tvinger væske ut av spissen uten at det legges noe trykk på stempelet, og dette reduserer nøyaktig volumtilførsel.

Flyktige væsker som acetonitril håndteres generelt bedre med en pipette med positiv forskyvning.

Genererer pipettering aerosoler?

Ja, pipettering med luftforskyvningspipetter kan skape aerosoler. Aerosoler kan stige inn i det indre av pipetten og forurense innvendige vegger og stempel. Aerosolisering skjer lettere når stempelet frigjøres for raskt under aspirasjon og kan også forekomme i motsatt retning utenfor pipetten med altfor rask dispensering. 

For å minimere aerosoler, aspirer og dispenser sakte og jevnt. Bruk filtrerte spisser. 

Pipetter med positiv forskyvning bruker sprøytespisser som forhindrer aerosolisering. En pipette med positiv forskyvning er det beste valget for pipettering av farlige væsker og enhver væske med forhøyet viskositet eller flyktighet.

Hvordan påvirker temperaturen på væsker pipettering?

Svært kalde eller varme væsker endrer lufttrykket i luftforskyvningspipetter, noe som fører til unøyaktig pipettering. 

Pipetter med positiv forskyvning, med sprøytespisser som ikke har luftlomme mellom væske og stempel, påvirkes ikke av forskjellige temperaturer på væsker. Pipetter med positiv forskyvning vil gi nøyaktige resultater med væsker uten romtemperatur.

Hvis du må pipettere en veldig varm eller kald væske med en luftforskyvningspipette, må du ikke forhåndsskylle pipettespissen – dette er vanligvis den beste fremgangsmåten for høyest mulig nøyaktighet. Aspirer og dispenser i stedet raskt for å minimere effekten av væskens temperatur på pipettens indre luftspalte.

Hvordan unngår jeg bobler når jeg pipetterer?

For å unngå bobler og skumdannelse ved pipettering, må du ikke senke spissen mer enn 10 mm i væskebeholderen, og aspirere sakte.

Omvendt pipettering gir ekstra beskyttelse fordi du trykker stempelet helt til 2. For mer om omvendt pipettering, besøk denne siden

En pipette med positiv forskyvning skaper ikke bobler eller skum når den samhandler med væske fordi sprøytespissen ikke har luft som væsken kan samhandle med.

Hva er den beste måten å dekontaminere en pipette på?

Dekontaminerer en pipette ved å tørke av den med en våt klut og et vaskemiddel som isopropanol eller en 10 % blekemiddelløsning. Unngå mikrometerets klare plastvindu.

Autoklavering kan være et annet alternativ, men sjekk pipettens instrumentspesifikasjoner. Hvis det er autoklaverbart, er hele instrumentet autoklavert eller bare væskeenden?  Ofte kan bare væskeenden autoklaveres.

Hvis du vil ha mer informasjon om rengjøring av en pipette, kan du laste ned plakaten Rengjøring av en pipette .

Hvordan kalibrerer jeg en pipette?

Kalibrering er kontrollert og dokumentert måling av en pipettes systematiske feilrate (nøyaktighet) og tilfeldige feilrate (presisjon). I mange laboratoriemiljøer må pipetteytelsen testes regelmessig og dokumenteres ved lov under spesifikke forhold sertifisert av et akkreditert organ. 

ISO-sertifiserte leverandører kalibrerer pipetter i en kontrollert setting. Resultatene dokumenteres sikkert på et kalibreringssertifikat, og legger til en revisjonsklar ytelseshistorikk for hvert instrument. Når justeringer er nødvendige, tilbyr ISO-sertifiserte kalibreringslaboratorier ekspertservice med deler og smøremidler som er anbefalt av produsenten. 

Rainin og METTLER TOLEDO er verdens største pipetteserviceorganisasjon med rask behandling fra postinnsending og servicealternativer på stedet. Servicelaboratorier er ISO 17025-sertifiserte, og prosedyrer følger 2022-oppdateringen til ISO 8655. 

Hvordan beregner jeg nøyaktigheten og presisjonen til en pipette?

Pipettenøyaktighet – eller sannhet, som det heter nå – er forskjellen mellom gjennomsnittsvolumet for alle målinger (4–10 målinger) og det innstilte volumet. 

Presisjon er standardavviket for alle målinger som utføres. Hvor langt fra hverandre er de andre?

Hvordan beregner du usikkerheten til en pipette?

En pipettes usikkerhet er den kvantitative betegnelsen for dens generelle nøyaktighet. Det er en kombinasjon av sannhet (et mål på systematisk feil) og presisjon (et mål på tilfeldig feil). 

Ligningen for usikkerhet er: 

Usikkerhet = Systematisk feil + Tilfeldig feil * k. k (dekningsfaktor eller Z-score) avhenger av antall målinger. k=3,31 for fire målinger og 2 for ti målinger.

Hva er den beste måten å oppbevare en pipette på?

Oppbevar pipetter vertikalt, hengende fra en hylle eller pipettestativ. Hold pipettene rene og fri for forurensninger. Hold pipettespissstativene lukket.