Buenas prácticas de pipeteo: mejores resultados a través de la formación y el apoyo

La mayoría de las aplicaciones de ciencias de la vida incluyen pasos críticos de manejo de líquidos en los que el volumen pipeteado influye directamente en el resultado. Si el pipeteo no es consistente y preciso, el tiempo, el dinero y el material pueden desperdiciarse. El pipeteo preciso constituye la base de un trabajo reproducible, que es esencial para generar datos significativos.

El primer paso para mejorar la precisión del pipeteo es elegir el tipo correcto de pipeta y el rango de volumen adecuado. En cuanto al tamaño, elija la pipeta de menor volumen que se adapte al volumen que está pipeteando. Por ejemplo, si pipetea 2 μL y tiene una pipeta de 5 μL y una pipeta de 20 μL, obtendrá una mayor precisión utilizando la pipeta de 5 μL. 

Consulte este documento técnico sobre la selección de pipetas para comprender qué pipeta funciona mejor para el líquido y otros factores únicos de su situación: Selección de la pipeta adecuada

Una vez que tengas el instrumento adecuado, pon en práctica tu buena técnica de pipeteo. Establezca un programa de pruebas de rutina para maximizar la confianza en sus resultados a lo largo del tiempo y, al igual que con cualquier instrumento de precisión, asegúrese de instituir un régimen de calibración y servicio regular y experto.

La forma más fácil de probar rápidamente la precisión de una pipeta puede ser el Rainin SmartCheck. Más información en mt.com/SmartCheck 

La elección de la pipeta adecuada implica evaluar sus necesidades. En primer lugar, ¿qué tipo de muestras está pipeteando? ¿Son acuosos? ¿O son viscosos, volátiles, espumosos, corrosivos o peligrosos? Para líquidos acuosos y casi acuosos, las pipetas de desplazamiento de aire más comunes (también llamadas pipetas de "colchón de aire") son una buena opción. Para líquidos viscosos, volátiles y otros tipos de líquidos inusuales, una pipeta de desplazamiento positivo sería una mejor opción tanto para la precisión como para la seguridad. 

¿Qué volumen va a pipetear? ¿Cuántas muestras necesita transferir de un recipiente a otro? Consulte este informe técnico sobre la selección de pipetas para comprender qué pipeta funciona mejor en función del líquido y otros factores exclusivos de su situación.

El pipeteo de los volúmenes más pequeños posibles involucra instrumentos y técnicas especializadas. Una pipeta repetidora puede ser la mejor opción para repetir volúmenes de dispensación de hasta 100 nL. Otra pipeta también puede funcionar para unas pocas dispensaciones. Asegúrese de utilizar la pipeta de tamaño más pequeño que se adapte al volumen que desea pipetear. 

A volúmenes muy bajos, la técnica de pipeteo tiene un impacto proporcionalmente mayor en la precisión y la reproducibilidad. Es importante controlar la profundidad de inmersión, el ángulo de pipeteo y la velocidad de aspiración. El póster de Técnicas de pipeteo de Rainin puede ayudar.

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El factor más importante para un pipeteo multicanal preciso y reproducible es la integridad de la junta para cada canal de la pipeta. Eso significa que cada punta encaja perfectamente en cada eje sin fugas de aire. Los diferentes fabricantes logran esto de diferentes maneras, con diferentes niveles de facilidad ergonómica y consistencia de sellado. Las puntas de pipeta del sistema LTS LiteTouch de Rainin requieren la menor fuerza para cargarse y expulsarse desde el multicanal, y sellan de forma uniforme en todo momento.

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Al aspirar, sostenga la pipeta lo más cerca posible de la vertical, evitando cualquier ángulo superior a 20° con respecto al eje Y. Al dispensar, si está tocando la pared del recipiente objetivo para extraer completamente todo el líquido de la punta, está bien exceder el ángulo de 20 °.

El pipeteo directo es la técnica de pipeteo estándar y la mejor opción para muestras acuosas. En el caso de muestras viscosas y volátiles, el pipeteo inverso ofrece una mayor precisión.

Para avanzar la pipeta, empuje el émbolo hasta el primer tope mientras mantiene la pipeta fuera del líquido. A continuación, sumerge la punta a una profundidad de 2-10 mm en el líquido con el que estás trabajando, no más profundamente. Suelte el émbolo lentamente hasta la extensión completa para aspirar el volumen completo de líquido. Para dispensar en su recipiente objetivo, mueva la pipeta dentro del recipiente y, a continuación, presione el émbolo a una velocidad uniforme a través del primer tope hasta el segundo tope, hasta el punto de alcanzar el émbolo. Con el émbolo completamente presionado, arrastre ligeramente la punta de la pipeta por la pared del recipiente para "tocarlo". Esto ayuda a dispensar completamente el volumen total de líquido. Suelte el émbolo, expulse la punta de pipeta, cargue una nueva punta de pipeta y repita.

Para invertir la pipeta, empuje el émbolo hasta el fondo desde el primer tope hasta el segundo tope, hasta donde llega el émbolo. Luego, sumerja la punta en líquido y suelte lenta y uniformemente el émbolo para aspirar. Muévase al recipiente receptor y presione el émbolo SOLO HASTA EL PRIMER TOPE para dispensar el volumen correcto. Un pequeño volumen residual permanecerá en la punta de la pipeta. Mueva la pipeta sobre un recipiente de desecho y dispensación y presione el émbolo hasta el segundo tope, también llamado tope de "reventón", para liberar el líquido restante. 

Suelte el émbolo, expulse la punta de pipeta, cargue una nueva punta de pipeta y repita.

Una pipeta de desplazamiento de aire se puede utilizar para pipetear líquidos ligeramente viscosos, incluida la sangre. Para lograr la máxima precisión, utilice la técnica de pipeteo inverso descrita anteriormente. Para líquidos más viscosos, como el glicerol al 85% o Triton X-100, una pipeta de desplazamiento positivo ofrece la mejor precisión y consistencia.

Los líquidos ligeramente volátiles, como el etanol, se pueden pipetear con una pipeta de desplazamiento de aire utilizando la técnica de pipeteo inverso mencionada anteriormente. Sin embargo, las pipetas de desplazamiento positivo son una mejor opción para líquidos volátiles. 

Si utiliza una pipeta de desplazamiento de aire, enjuague previamente la punta de la pipeta (aspire y dispense) al menos cinco veces antes de pipetear el volumen. Esto equilibra el aire dentro de la pipeta, ralentizando la tasa de evaporación del líquido. La rápida evaporación de líquidos volátiles expande el aire dentro de una pipeta y fuerza el líquido desde la punta sin que se ejerza ninguna presión sobre el émbolo, y esto disminuye el suministro de volumen preciso.

Los líquidos volátiles como el acetonitrilo generalmente se manejan mejor con una pipeta de desplazamiento positivo.

Sí, el pipeteo con pipetas de desplazamiento de aire puede crear aerosoles. Los aerosoles pueden subir al interior de la pipeta y contaminar las paredes interiores y el pistón. La aerosolización se produce más fácilmente cuando el émbolo se libera demasiado rápido durante la aspiración y también puede producirse en la dirección opuesta fuera de la pipeta con una dispensación demasiado rápida. 

Para minimizar los aerosoles, aspire y dispense lenta y uniformemente. Usa propinas filtradas. 

Las pipetas de desplazamiento positivo utilizan puntas tipo jeringa que evitan la aerosolización. Una pipeta de desplazamiento positivo es la mejor opción para pipetear líquidos peligrosos y cualquier líquido de viscosidad o volatilidad elevadas.

Los líquidos muy fríos o calientes cambian la presión del aire dentro de las pipetas de desplazamiento de aire, lo que provoca un pipeteo inexacto. 

Las pipetas de desplazamiento positivo, con puntas tipo jeringa que no tienen bolsa de aire entre el líquido y el pistón, no se ven afectadas por las diferentes temperaturas de los líquidos. Las pipetas de desplazamiento positivo proporcionarán resultados precisos con líquidos que no estén a temperatura ambiente.

Si debe pipetear un líquido muy caliente o frío con una pipeta de desplazamiento de aire, no enjuague previamente la punta de la pipeta, ya que suele ser la mejor práctica para obtener la máxima precisión. En su lugar, aspire y dispense rápidamente para minimizar el efecto de la temperatura del líquido en el espacio de aire interior de la pipeta.

Para evitar burbujas y formación de espuma al pipetear, no sumerja la punta más de 10 mm en el depósito de líquido y aspire lentamente.

El pipeteo inverso ofrece una protección adicional porque, antes de aspirar, se presiona completamente el émbolo hasta el 2º tope, por lo que no hay posibilidad de inyectar aire en la muestra líquida. Para obtener más información sobre el pipeteo inverso, visite esta página. 

Una pipeta de desplazamiento positivo no crea burbujas ni espuma al interactuar con el líquido porque su punta tipo jeringa no presenta aire para que el líquido interactúe con él.

Descontamine una pipeta limpiándola con un paño húmedo y un detergente como isopropanol o una solución de lejía al 10%. Evite la ventana de plástico transparente del micrómetro.

El autoclave puede ser otra opción, pero compruebe las especificaciones del instrumento de su pipeta. Si se puede esterilizar en autoclave, ¿todo el instrumento se esteriliza en autoclave o solo el extremo líquido?  A menudo, solo el extremo líquido se puede esterilizar en autoclave.

Para obtener más información sobre la limpieza de una pipeta, obtenga el póster Limpieza de una pipeta .

La calibración es la medición controlada y documentada de la tasa de error sistemático (precisión) y la tasa de error aleatorio (precisión) de una pipeta. En muchos entornos de laboratorio, el rendimiento de la pipeta debe probarse y documentarse regularmente por ley bajo condiciones específicas certificadas por un organismo acreditado. 

Los proveedores con certificación ISO calibran las pipetas en un entorno controlado. Los resultados se documentan de forma segura en un certificado de calibración, lo que se suma a un historial de rendimiento listo para auditoría para cada instrumento. Cuando son necesarios ajustes, los laboratorios de calibración con certificación ISO brindan un servicio experto con piezas y lubricantes recomendados por el fabricante. 

Rainin y METTLER TOLEDO son la organización de servicio de pipetas más grande del mundo, con una respuesta rápida entre las opciones de servicio por correo y en el sitio. Los laboratorios de servicio cuentan con la certificación ISO 17025 y los procedimientos siguen la actualización de 2022 a la ISO 8655. 

La precisión de la pipeta, o veracidad, como se llama ahora, es la diferencia entre el volumen medio de todas las mediciones (4-10 mediciones) y el volumen establecido. 

La precisión es la desviación estándar de todas las mediciones realizadas. ¿A qué distancia de cada lectura están las demás?

La incertidumbre de una pipeta es el término cuantitativo para su precisión general. Es una combinación de veracidad (una medida del error sistemático) y precisión (una medida del error aleatorio). 

La ecuación para la incertidumbre es: 

Incertidumbre = Error Sistemático + Error Aleatorio * k. k (factor de cobertura o Z-score) depende del número de mediciones. k=3,31 para cuatro mediciones y 2 para diez mediciones.

Guarde las pipetas en posición vertical, colgándolas de un estante o soporte para pipetas. Mantenga las pipetas limpias y libres de contaminantes. Mantenga cerradas las gradillas de puntas de pipeta.