Comprobación y calibración de pipetas

Una pipeta es una herramienta de laboratorio que sirve para transportar cantidades pequeñas de líquido medido de forma precisa aspirando y dosificando la muestra. Hoy en día, la mayoría de las pipetas son pipetas de tipo émbolo que crean un vacío parcial sobre el líquido para aspirarlo, con lo que se evita el contacto con la mecánica.

Más: Pipetas Rainin

Una pipeta está calibrada cuando el volumen previsto y el volumen obtenido proporcionado por la pipeta viene determinado de forma conjunta con la incertidumbre de medición asociada por una institución acreditada. El objetivo es probar si la pipeta sigue funcionando según las especificaciones de la norma ISO8655 o las especificaciones del fabricante para ofrecer resultados precisos. Las pipetas que se encuentran fuera de los valores de tolerancia pueden recibir mantenimiento, ajustarlas y volverlas a calibrar.
Más: Mantenimiento de la pipeta Rainin

Las pipetas de émbolo se usan en química, biología, ámbitos clínicos y médicos, donde se toman muestras de líquido y se suelen transportar en cantidades pequeñas y precisas para realizar diluciones, investigaciones y análisis adicionales.

A continuación, se exponen algunas técnicas de pipeteo y errores muy habituales en las pipetas de émbolo y cómo evitarlos.

1. Profundidad de inmersión errónea de la punta
   La correcta profundidad de inmersión de la punta puede mejorar la precisión en hasta un 5 %. La punta debe estar sumergida entre 1 y 2 mm en las pipetas de microvolumen y hasta de 3 a 6 mm en las pipetas de gran volumen, en función del tamaño de la punta. Si la punta se sumerge demasiado, el volumen de gas de la punta se comprime y provoca que se aspire demasiado líquido.
   
   
2. Ángulo de pipeteo incorrecto
   El ángulo de inmersión de la punta de la pipeta en la muestra debe ser lo más vertical posible y no debe desviarse más de 20 grados desde el ángulo vertical. Un ángulo más horizontal provoca que se introduzca demasiado líquido en la punta, lo que conlleva aspiraciones imprecisas. Por ejemplo, en un ángulo de 30 grados respecto a la vertical, puede aspirarse hasta un 0,7 % de líquido en exceso.
   
   
3. Dosificación irregular
   Para lograr una precisión y una reproducibilidad superior entre muestras, asegúrese de dosificar hasta la última gota de la muestra, sin que quede nada adherido en el extremo de la punta. Para la mayoría de las aplicaciones, se recomienda la dosificación con el extremo de la punta apoyada contra la pared del recipiente, ya que así se reduce o se elimina la cantidad de muestra que queda en la punta. Esta técnica puede aumentar la precisión en un 1 % o más.
   
   
4. Error en el preenjuague
   La dosificación del líquido de una pipeta deja un recubrimiento del líquido en la punta, lo que provoca que el volumen expulsado sea ligeramente inferior de lo que debería ser. Enjuagar previamente un nueva punta un par de veces, como mínimo, con el líquido que se va a usar, servirá para acondicionar el interior de la punta.
   
   
5. Ritmo irregular en el pipeteo
   Utilice un ritmo constante en el pipeteo entre muestras. Evite ir deprisa o realizar operaciones rápidas, y mantenga el ritmo para cada paso del ciclo de pipeteo.
   
   Más: Good Pipetting Practice

La precisión de la pipeta se comprobará con regularidad entre calibraciones, para evitar obtener resultados fuera de los valores de tolerancia entre calibraciones. Para comprobar la pipeta, se dispensará el volumen nominal, como mínimo, en un vaso en una balanza analítica de precisión al menos de 4 a 6 veces, de las cuales el volumen y la desviación media se calcula con las fórmulas de la norma ISO8655. Las balanzas con un software de aplicación o para PC incorporado proporcionan un resultado que indica si se ha superado o no en cuestión de segundos, de forma automática.

Más: Comprobación de pipetas

La precisión de la pipeta se comprobará con regularidad entre calibraciones, para evitar obtener resultados fuera de los valores de tolerancia entre calibraciones. Para comprobar la pipeta, se dispensará el volumen nominal, como mínimo, en un vaso en una balanza analítica de precisión al menos de 4 a 6 veces, de las cuales el volumen y la desviación media se calcula con las fórmulas de la norma ISO8655. Las balanzas con un software de aplicación o para PC incorporado proporcionan un resultado que indica si se ha superado o no en cuestión de segundos, de forma automática.  

La calibración de pipetas muestra la diferencia entre el volumen esperado y el volumen real, que se encontrará dentro de un valor de tolerancia dado. Si se encuentra fuera de dicho valor, se pueden producir diluciones erróneas y, por tanto, resultados de análisis incorrectos. Como consecuencia, los resultados no se podrán reproducir y se tendrá que volver a repetir todo el análisis. Para detectar con antelación que la pipeta se encuentra fuera del valor de tolerancia, se recomienda comprobar la precisión de la pipeta también entre calibraciones para evitar que el valor fuera de tolerancia sea lo primero que se detecte en la siguiente calibración.

Con la calibración de pipetas, el volumen previsto y el volumen obtenido proporcionado por la pipeta viene determinado de forma conjunta con la incertidumbre de medición asociada por una institución acreditada. El objetivo es probar si la pipeta sigue funcionando según las especificaciones de la norma ISO8655 o las especificaciones del fabricante para ofrecer resultados precisos. Las pipetas que se encuentran fuera de los valores de tolerancia pueden recibir mantenimiento, ajustarlas y volverlas a calibrar.

Antes de empezar la limpieza, consulte siempre, en primer lugar, el manual del fabricante, ya que la resistencia del material es distinta según la marca. Para una limpieza correcta, es necesario desmontar las pipetas tipo émbolo. El brazo de expulsión de puntas y el cilindro se pueden desatornillar con la mano para abrir la pipeta. Aviso: la presión del muelle puede hacer que las piezas salten. Las piezas se pueden limpiar con un trapo humedecido con un detergente suave y agua destilada o alcohol isopropílico, o una solución de etanol. Evite que los líquidos entren en el cuerpo, también durante el pipeteo para evitar la  contaminación del émbolo y el sellado. Para realizar la esterilización o autoclavización, consulte el manual para ver si se puede realizar y cuál es el procedimiento para el modelo de pipeta concreto. Tras la limpieza, se debe comprobar si la pipeta se encuentra dentro de los valores de tolerancia. Normalmente, un técnico de mantenimiento de pipetas realiza una calibración tras el mantenimiento para comprobar y confirmar que la pipeta se encuentra dentro de los valores de tolerancia.