Kuvetter til spektrofotometre

Den kuvette, der bruges til at måle en prøve, er en del af spektrofotometerets optiske system. Derfor kan kuvettens position, geometri og tilstand have en indflydelse på absorbansmålingernes nøjagtighed og præcision og skal kontrolleres omhyggeligt.

Den optiske lysvejlængde for en kuvette er lysafstanden, der går gennem kuvettens indvendige vægge.

På en standard-spektrometerkuvette er lysvej- eller afstandslængden den indre afstand fra forvinduet til bagvinduet. Den optiske lysvejlængde for en standard-kuvette er 10 mm.

Kuvettens materiale kan forårsage dens egen absorbans afhængigt af bølgelængden. Kvartskuvetter er fuldstændig gennemsigtige over hele måleområdet (UV/Vis). Engangskuvetter af plast er ret ofte kun gennemsigtige i det synlige område af spektret. Derfor afhænger valget af kuvette hovedsageligt af anvendelsen.

Ifølge Beer-Lambert-loven er absorbans direkte proportional med kuvettens lysvejlængde og prøvekoncentrationen. Valg af en ideel lysvejlængde (f.eks. fra 1 mm til 5 cm) kan eliminere behovet for fortyndinger. Absorbans, der ligger i området fra 0,2 A til 1,5 A, genererer de mest nøjagtige resultater. Et mikrovolumeninstrument med en meget kort lysvejlængde, (1 mm eller 0,1 mm) er ideel til meget koncentrerede prøver.

For at opnå den bedste målepraksis skal kuvetten forblive i kuvetteholderen mellem målingerne. Hvis den fjernes, skal man passe på altid at placere kuvetten i samme retning i kuvetteholderen, dvs. med etiketten mod lyskilden. Dette sikrer, at de optiske effekter er identiske for både reference- og prøvemålinger.

For at opnå de bedste resultater skal reference- og prøvemålingerne udføres med den samme type kuvette.

Kuvetter skal have vinduer, der er fremstillet af et materiale, som er gennemsigtigt i det spektrale interesseområde.

For at opnå de bedste resultater af målinger i UV-området, skal der bruges UV-transparent glas, såsom kvartsglas eller SUPRASIL^®-glas.

SUPRASIL^® er et varemærke tilhørende Heraeus (kvartsglas)

Til det synlige område (>400 nm) bruges ofte optisk glas eller engangs-PMMA (Polymethylmethacrylat) eller PS (Polystyren)-kuvetter.

Engangskuvetter, fremstillet af poly-methyl-methacrylat, absorberes i UV-området og fungerer som et afskæringsfilter, hvilket gør målinger i UV-området unøjagtige og bør kun tages i betragtning til målinger inden for det synlige område.

Bland prøven godt inden brug, især når du gensuspenderer nukleinsyrer eller proteiner. Undgå at bruge glaspipetter til at fylde kuvetten, da de kan ridse den optiske overflade. Pipetter med engangsspidser af plast er ideelle. Lad opløsningen løbe langs glasvæggen ind i kuvetten for at undgå dannelse af bobler. Undgå at fylde mere end 80 % af dens kapacitet.

Kuvettens vinduer, hvorigennem lyset passerer, skal rengøres inden hver brug. Til grundig indvendig og udvendig rengøring skal du bruge en 60 % isopropanol/deioniseret vandopløsning og aftørre med en optisk rengøringsklud eller fnugfri klud (for at undgå ridser fra fnug på overfladen).

For at undgå højere absorbans skal kuvetter rengøres grundigt før og efter brug. Der skal udvises ekstra forsigtighed for at undgå at røre ved vinduerne efter afsluttet rengøring. Prøven skal fjernes umiddelbart efter målingen for at undgå at beskadige kuvetten pga. fordampende opløsningsmidler.

Højere absorbanser måles, hvis rester, såsom fingeraftryk eller fedt, afsættes på kuvettevinduerne, fordi der er yderligere absorberende komponenter. Dette kan undgås med grundig rengøring før og efter brug. Man skal passe ekstra meget på ikke at røre ved vinduerne, når rengøringen er afsluttet.

Hold kun kuvetter på de matte sider og pas på ikke at efterlade fingeraftryk på kuvetten.

Placer kuvetten med den gennemsigtige side i lysstrålen, hvilket sikrer, at den tomme etiket og prøve-kuvetteetiketten vender i den samme retning. Sørg for, at kuvetten ikke er tippet og er helt fastgjort i kuvetteholderen. Kuvetten må ikke bevæge sig mere.

For at begrænse opløsningsmidlets fordampning eller vandabsorption fra den omkringværende luft i tilfælde af hydrofile prøver skal du bruge det låg, som normalt er leveret med kuvetten.

Flowcellen skal altid tømmes helt efter en serie af målinger. For at undgå forkalkning på det optiske vindue skal indersiden af flowcellen skylles med acetone og derefter tørres grundigt for at fjerne overskydende acetone.

For korttidsopbevaring fås særlige kuvetteholdere. For langtidsopbevaring skal den medfølgende kasse bruges for at undgå ridser og støv på glasoverfladen.

For at opnå den bedste målepraksis skal kuvetten forblive i kuvetteholderen mellem målingerne. Hvis den fjernes, skal man passe på altid at placere kuvetten i samme retning i kuvetteholderen, dvs. med etiketten mod lyskilden. Dette sikrer, at de optiske effekter er identiske for både reference- og prøvemålinger. Takket være enestående fremstillingstolerancer for Excellence-kuvetterne fra METTLER TOLEDO er denne foretrukne orientering ikke nødvendig, fordi absorbansforskellene ved 180 grader er marginale.

Hvis rester, såsom fingeraftryk eller fedt, efterlades på kuvettens vinduer, måles der højere absorbans på grund af, at der er flere absorberende komponenter. Dette kan undgås med grundig rengøring før og efter brug. Man skal passe ekstra meget på ikke at røre ved vinduerne, når rengøringen er afsluttet.

En kuvette er et lille rektangulært rør, som kan indeholde vandige prøver. Den har lige sider, som er lavet af klart, gennemsigtigt materiale. Nogle kalder dem også celler eller kapillærer. Kuvetter bruges i spektrofotometriske målinger til at måle absorbansen af en specifik bølgelængde.

Hvis en kuvette har ridser eller små revner i det polerede felt, må den ikke bruges til flere målinger, idet resultatet bliver forfalsket eller kuvetten kan gå i stykker inden i spektrofotometeret. Ethvert harpiksmateriale, der bruges til at reparere eller lime kuvetten, vil forringe målekvaliteten. Derfor anbefales det ikke at reparere en ødelagt kuvette.

En tom kuvette bruges til at kalibrere spektrofotometerets aflæsninger, før en ukendt opløsning måles. Aflæsningen af spektrografen er i forhold til den tomme kuvette. Der er miljøfaktorer, der kan påvirke aflæsningen, som f.eks. støv, temperatur og fugtighed. For at eliminere alle de eksterne faktorer, fjernes spektrografaflæsningerne af den tomme kuvette fra aflæsningerne af prøveopløsningskuvetten

Optisk glas fra METTLER TOLEDO: 320 – 2500 nm bølgelængde; > 80 % transmissionshastighed; genanvendelig; synligt spektrum

Kvartsglas fra METTLER TOLEDO: 200 – 2500 nm bølgelængde; > 82 % transmissionshastighed; genanvendelig; UV-synligt spektrum

Den mest almindelige kapacitet er 3,5 ml (3500 µL) af en standard 10 mm makrokuvette. Volumenet af en kuvette kan let beregnes: indvendig længde x indvendig bredde x indvendig højde x 80 % = kuvettevolumen

Et matchende par af kuvetter beskriver to kuvetter af det samme materiale, der har den samme optiske lysvejlængde. På grund af angivne fremstillingstolerancer, sikrer matchende par sammenlignelige målinger. METTLER TOLEDO Excellence-kuvetter sikrer fremstillingstolerancer på kun ± 0,01 mm og behøver derfor ingen matchning.