Kyvety pro spektrofotometry

Kyveta, která se využívá k měření vzorku, je součástí optického systému spektrofotometru. Poloha, geometrie a stav kyvety mohou mít proto vliv na přesnost a preciznost měření absorbance a měly by být pečlivě kontrolovány.

Délka optické dráhy kyvety je vzdálenost světla, které prochází vnitřními stěnami kyvety.

U standardní spektrometrické kyvety bude dráha světla nebo délka dráhy vnitřní vzdálenost od předního okénka k zadnímu okénku. Délka optické dráhy standardní kyvety je 10 mm.

Materiál kyvety může – v závislosti na vlnové délce – způsobit vlastní absorbanci. Křemenné kyvety jsou zcela průsvitné v celém rozsahu měření (UV/Vis). Jednorázové plastové kyvety jsou často průsvitné pouze ve viditelném rozsahu spektra. Výběr kyvety závisí tedy hlavně na aplikaci.

Podle Beerova-Lambertova zákona je absorbance přímo úměrná délce dráhy kyvety a koncentraci vzorku. Výběr ideální délky dráhy (např. od 1 mm do 5 cm) může odstranit potřebu ředění. Absorbance v rozsahu 0,2 A až 1,5 A generuje nejpřesnější výsledky. Mikroobjemový přístroj s velmi krátkou délkou dráhy (1 mm nebo 0,1 mm) je ideální pro vysoce koncentrované vzorky.

Podle postupů nejlepší měřicí praxe by kyveta měla mezi měřeními zůstat v držáku kyvety. V případě jejího odstranění je třeba dbát na to, aby byla kyveta v držáku kyvety umístěna pokaždé stejným směrem, tj. se štítkem směřujícím ke zdroji světla. Díky tomu jsou optické účinky identické jak pro referenční, tak pro vzorková měření.

Pro dosažení nejlepších výsledků musí být referenční a vzorková měření prováděna pomocí stejného typu kyvety.

Kyvety musí mít okénka vyrobená z materiálu, který je ve spektrální oblasti zájmu průsvitný.

Pro dosažení nejlepších výsledků měření v UV rozsahu je třeba používat UV průsvitné sklo, jako je křemenné sklo nebo sklo SUPRASIL^®.

SUPRASIL^® je ochranná známka společnosti Heraeus (křemenné sklo).

Pro viditelný rozsah (> 400 nm) se často používá optické sklo nebo jednorázové kyvety z PMMA (polymethylmethakrylát) nebo PS (polystyren).

Jednorázové kyvety vyrobené z polymethylmethakrylátu absorbují v UV rozsahu a fungují jako cut-off filtr; v důsledku toho jsou měření v UV rozsahu nepřesná a měla by být brána v úvahu pouze měření ve viditelném rozsahu.

Před použitím vzorek dobře promíchejte, zejména při resuspendování nukleových kyselin nebo proteinů. K naplnění kyvety nepoužívejte skleněné pipety, neboť by mohly poškrábat optický povrch. Ideální jsou pipety s jednorázovými plastovými špičkami. Aby se zabránilo tvorbě bublin, nechejte roztok stékat po skleněné stěně do kyvety. Kyvetu naplňte pouze do 80 % kapacity.

Okénka kyvety, kterými prochází světlo, je nutné čistit před každým použitím. Pro důkladné vnitřní a vnější čištění používejte 60% roztok isopropanolu / deionizované vody a otřete kyvety hadříkem na čištění optiky nebo netřepivou tkaninou (aby nedošlo k poškrábání povrchu vlákny).

Kyvety by se měly důkladně vyčistit před každým použitím i po něm. Zabráníte tím vyšší absorbanci. Po dokončení čištění je třeba věnovat zvýšenou pozornost tomu, abyste zabránili kontaktu s okýnky. Aby nedošlo k poškození kyvety vlivem odpařování rozpouštědel, vzorek by měl být ihned po měření odstraněn.

Pokud se na okýnkách kyvety usazují rezidua, jako jsou otisky prstů nebo mastnota, jsou naměřeny vyšší absorbance v důsledku přítomnosti dalších absorbujících látek. Tomu lze zabránit důkladným čištěním před použitím i po něm. Po dokončení čištění je nutné věnovat zvýšenou pozornost tomu, abyste zabránili kontaktu s okýnky.

Kyvety berte do ruky pouze za matné strany a dávejte pozor, abyste na kyvetě nezanechali otisky prstů.

Kyvetu umístěte průsvitnou stranou do dráhy světelného paprsku a ujistěte se, že štítek kyvety s blankem a vzorkem směřuje stejným směrem. Ujistěte se, že kyveta není nakloněna a je zcela upevněna v držáku kyvety. Kyveta se už nesmí hýbat.

Víko, které se obvykle dodává s kyvetou, použijte v situacích, kdy bude potřeba omezit odpařování rozpouštědla nebo absorpci vody z okolního vzduchu v případě hydrofilních vzorků.

Po sérii měření musí být průtočné cely vždy zcela vyprázdněny. Aby se zabránilo kalcifikaci na optickém okénku, měl by se vnitřek průtočné cely opláchnout acetonem a poté důkladně vysušit, čímž se odstraní veškerý reziduální aceton.

Pro krátkodobé skladování jsou k dispozici speciální držáky kyvet. Pro dlouhodobé skladování by se měl používat dodávaný box, aby se zabránilo poškrábání a usazování prachu na skleněném povrchu.

Podle postupů nejlepší měřicí praxe by kyveta měla mezi měřeními zůstat v držáku kyvety. V případě jejího odstranění je třeba dbát na to, aby byla kyveta v držáku kyvety umístěna pokaždé stejným směrem, tj. se štítkem směřujícím ke zdroji světla. Díky tomu jsou optické účinky identické jak pro referenční, tak pro vzorková měření. Díky vynikajícím výrobním tolerancím kyvet METTLER TOLEDO Excellence není tato preferovaná orientace nutná, neboť rozdíly absorbance o 180 stupňů jsou v rámci mezí.

Pokud se na okýnkách kyvety usazují rezidua, jako jsou otisky prstů nebo mastnota, jsou naměřeny vyšší absorbance v důsledku přítomnosti dalších absorbujících látek. Tomu lze zabránit důkladným čištěním před použitím i po něm. Po dokončení čištění je nutné věnovat zvýšenou pozornost tomu, abyste zabránili kontaktu s okýnky.

Kyveta je malá obdélníková zkumavka na vodné vzorky. Má rovné strany vyrobené z čirého, průsvitného materiálu. Někdy se také označuje jako cela nebo kapilára. Kyvety se používají při spektrofotometrických měřeních za účelem zjištění absorbance specifické vlnové délky.

Pokud je leštěná oblast kyvety poškrábaná nebo obsahuje menší praskliny, kyvetu už při dalších měřeních nepoužívejte. V opačném případě by došlo ke znehodnocení výsledku nebo by se kyveta mohla uvnitř spektrofotometru rozlomit. Přítomnost pryskyřice použité k opravě nebo lepení kyvety negativně ovlivní kvalitu měření. Oprava rozbité kyvety se proto nedoporučuje.

Kyveta s blankem se používá ke kalibraci hodnot spektrofotometru před měřením neznámého roztoku. Hodnota spektrografu je vůči kyvetě s blankem relativní. Na hodnotu mohou mít vliv faktory prostředí, jako je přítomnost prachu, teplota a vlhkost. Za účelem odstranění všech vnějších faktorů se hodnoty spektrografu kyvety s blankem odečítají od hodnot kyvety s roztokem vzorku.

Optické sklo METTLER TOLEDO: vlnová délka 320–2500 nm; > 80% rychlost přenosu; opakované použitelné; viditelné spektrum

Křemenné sklo METTLER TOLEDO: vlnová délka 200–2500 nm; > 82% rychlost přenosu; opakované použitelné; UV viditelné spektrum

Nejběžnější kapacita standardní 10mm makrokyvety je 3,5 ml (3500 µl). Objem kyvety lze snadno vypočítat: vnitřní délka x vnitřní šířka x vnitřní výška x 80 % = objem kyvety

Vzájemně přizpůsobená dvojice kyvet označuje dvě kyvety stejného materiálu, které mají stejnou délku optické dráhy. Díky navrženým výrobním tolerancím zajišťují vzájemně přizpůsobené dvojice porovnatelná měření. Kyvety METTLER TOLEDO Excellence zajišťují výrobní tolerance o velikosti pouhých ± 0,01 mm, a proto není třeba je přizpůsobovat.